飲料中肌醇測(cè)定新方法探究

□ 翟海洋 樊云霄 程海芳 河南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)院

1 原理

試樣中的肌醇通過用水和乙醇充分提取出來，再與硅烷化試劑以合適的條件進(jìn)行衍生，衍生過后加入正己烷提取，經(jīng)用氣相色譜儀分離，用外標(biāo)法進(jìn)行定量，計(jì)算得出結(jié)果。

2 試劑及試劑配制

（1）試劑：無(wú)水乙醇（C2H6O）、正己烷(C6H14)、95%乙醇（C2H6O）、三甲基氯硅烷（C3H9ClSi）、六甲基二硅胺烷（C6H19NSi2）、N·N-二甲基甲酰胺（C3H7NO）。本實(shí)驗(yàn)中所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

（2）硅烷化試劑的配制：三甲基氯硅烷和六甲基二硅胺烷以體積比1∶2進(jìn)行配制，超聲混勻，要現(xiàn)用現(xiàn)配。N·N-二甲基甲酰胺、三甲基氯硅烷、六甲基二硅胺烷三者混合后要保證無(wú)白色渾濁現(xiàn)象時(shí)才能用于試驗(yàn)。肌醇的標(biāo)準(zhǔn)品（C6H12O6）經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)為物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度大于等于99%。

（3）肌醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 μg/mL）：稱取100 mg（精確到0.1 mg）經(jīng)過105 ℃烘干兩小時(shí)的肌醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100 mL容量瓶中，用25 mL水完全溶解，完全溶解后再用95%的乙醇定容至刻度線，搖勻。取混勻后的此溶液1 mL于100 mL容量瓶中，再用75%的乙醇進(jìn)行定容至刻度線，混勻備用。

3 儀器與設(shè)備

離心機(jī)（轉(zhuǎn)速大于4 500 r/min）、平行蒸發(fā)儀及平行蒸發(fā)管、超聲波儀、恒溫水浴鍋、烘箱。

氣相色譜儀（配氫火焰離子化檢測(cè)器）、分析天平（感量0.000 1 g）。

4 試樣的處理

液態(tài)樣品用50 mL容量瓶作為載具稱取12～15 g，在樣品中加入95%的乙醇定容到刻度線，定容后的樣品在超聲波儀中超聲10～15 min，溫度設(shè)定為恒溫30 ℃，超聲過后的樣品進(jìn)行用混勻器渦旋混合均勻，靜置20 min左右后，取10 mL置于50 mL離心管中，以 4 700 ～5 000 r/min，-1～-4 ℃離心7 min。將離心后樣品溶液全部轉(zhuǎn)移至平行蒸發(fā)管中，向平行蒸發(fā)管中加入10 mL無(wú)水乙醇，以壓力250～300 mbar，轉(zhuǎn)速220～250 rpm，溫度75～80 ℃進(jìn)行平行蒸發(fā)濃縮，濃縮至樣品黏稠狀，再加入3 mL無(wú)水乙醇繼續(xù)濃縮至至樣品黏稠狀。轉(zhuǎn)移平行蒸發(fā)管至烘箱中以（115±5）℃烘70～90 min。烘干后取出冷卻至室溫，加入10 mL N·N-二甲基甲酰胺，在30 ℃超聲波儀中超聲5～8 min并轉(zhuǎn)移至50 mL有螺紋的離心管中，加入硅烷化試劑3.0 mL并放于75～85 ℃水浴中進(jìn)行衍生反應(yīng)1.5 h。衍生過程中每間隔15 min取出進(jìn)行振蕩一次，然后取出冷卻至室溫。加入5 mL正己烷，在混勻器混勻后靜置分層。取上層液3 mL于預(yù)先加好適量無(wú)水硫酸鈉的帶螺紋蓋的50 mL離心管中，振蕩混勻后，以不低于4 000 r/min離心，離心后進(jìn)行過濾，濾出液為試樣測(cè)定液。

5 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶液的配制

分別吸取制備好的肌醇標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、2.0、3.0、4 mL置于平行蒸發(fā)管中，向平行蒸發(fā)管中加入15 mL無(wú)水乙醇，以壓力250～300 mbar，轉(zhuǎn)速 220～250 rpm，溫度 75～80 ℃進(jìn)行平行蒸發(fā)濃縮，濃縮至近干，再加入5 mL無(wú)水乙醇繼續(xù)濃縮至近干。轉(zhuǎn)移平行蒸發(fā)管至烘箱中以（115±5）℃烘70～90 min。烘干后取出冷卻至室溫，加入10 mL N·N-二甲基甲酰胺，在30 ℃超聲波儀中超聲5～8 min并轉(zhuǎn)移至50 mL有螺紋的離心管中，加入硅烷化試劑（三甲基氯硅烷和六甲基二硅胺烷以體積比1∶2進(jìn)行配制）3.0 mL并放于75～85 ℃水浴中進(jìn)行衍生反應(yīng)1.5 h。衍生過程中每間隔15min取出進(jìn)行搖勻振蕩一次，然后取出冷卻至室溫。加入5 mL正己烷，在混勻器混勻后將處理液靜置分層。取上層液3 mL于預(yù)先加好適量無(wú)水硫酸鈉的帶螺紋蓋50 mL離心管中，振蕩混勻后，以不低于4 000 r/min離心，離心后進(jìn)行過濾，濾出液為肌醇標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液。

表1 升溫程序

6 測(cè)定色譜條件

色譜柱：100%二甲基聚硅氧烷非極性色譜柱，柱長(zhǎng)30 m，內(nèi)徑0.32 mm，膜厚0.25 μm；或同等性能的色譜柱。進(jìn)樣口溫度：200 ℃。分流比：5∶1。分流量：7.5 mL/min。進(jìn)樣量：1μL。

升溫程序見表1。

后運(yùn)行溫度：240 ℃。后運(yùn)行時(shí)間：3 min。

7 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

將標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定液分別注入氣相色譜儀中（色譜圖如圖1所示），以測(cè)得的峰高（或峰面積）為縱坐標(biāo)，以肌醇標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液中肌醇含量的出峰時(shí)間（min）為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。相關(guān)線性圖如圖2所示。

圖1 肌醇色譜圖

圖2 相關(guān)線性圖

8 計(jì)算公式

公式中：X——樣品中肌醇的含量（mg/100g）；C——儀器測(cè)得肌醇的含量（μg/mL）；n——稀釋倍數(shù)；M——稱樣量（g）。

9 結(jié)論

本方法在處理樣品時(shí)能夠更好地經(jīng)飲料中的肌醇提取出來，能夠讓上機(jī)檢測(cè)數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確，減小誤差。通過本方法在進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，其回收率在85%以上，符合國(guó)家對(duì)肌醇檢測(cè)實(shí)驗(yàn)要求。另外此方法實(shí)驗(yàn)處理標(biāo)液，其相關(guān)性達(dá)到三個(gè)九，回收比較穩(wěn)定。