ELISA檢測(cè)豬尿中β-受體激動(dòng)劑類藥物影響因素研究

李延山,劉慶偉，卞大偉，徐國榮，李洪根，王小柱，劉映雪，張志遙，田 穎

(1.遼寧省畜產(chǎn)品安全監(jiān)察所，遼寧沈陽 110003；2.遼寧省黑山縣畜牧獸醫(yī)局，遼寧黑山 121400)

β-受體激動(dòng)劑(俗稱“瘦肉精”)對(duì)畜產(chǎn)品安全和人類健康造成了極大威脅和影響，一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。經(jīng)過多年的治理，非法使用“瘦肉精”行為得到有效遏制。但受利益驅(qū)使，少數(shù)不法生產(chǎn)經(jīng)營者違法使用“瘦肉精”問題始終難以根除，特別是生豬養(yǎng)殖、運(yùn)輸和屠宰等環(huán)節(jié)“瘦肉精”都有不同程度地檢出[1-2]。加強(qiáng)生豬養(yǎng)殖、運(yùn)輸和屠宰等環(huán)節(jié)“瘦肉精”的監(jiān)管，把住基層監(jiān)管的第一道關(guān)口，是有效遏制“瘦肉精”非法使用的關(guān)鍵一環(huán)。完善基層檢測(cè)手段是準(zhǔn)確及時(shí)完成工作任務(wù)的有力保障。在我們多年來的“瘦肉精”監(jiān)督檢測(cè)工作中發(fā)現(xiàn)，采用ELISA檢測(cè)β-受體激動(dòng)劑類藥物中鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的過程中，經(jīng)常出現(xiàn)不同程度的陽性率，有的經(jīng)過質(zhì)譜方法確證后結(jié)果為陰性[3-4]。這種ELISA檢測(cè)結(jié)果的不確定性一直困擾著基層監(jiān)督檢測(cè)人員，既耗時(shí)、耗力，又造成大量的浪費(fèi)，給基層監(jiān)督工作帶來極大的不便，嚴(yán)重影響工作效率，為摸清干擾因素，完善基層“瘦肉精”監(jiān)督檢測(cè)手段，提高工作效率。我們針對(duì)生豬飼養(yǎng)中常用藥物及添加劑檢測(cè)進(jìn)行了干擾因素研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)、蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O，大連三儀動(dòng)物藥品有限公司提供。

1.1.2 試驗(yàn)用動(dòng)物 健康生長(zhǎng)育肥豬，體重為50 kg～60 kg。

1.1.3 試劑盒 克倫特羅酶聯(lián)免疫試劑盒、萊克多巴胺酶聯(lián)免疫試劑盒、沙丁胺醇酶聯(lián)免疫試劑盒,北京維德維康生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

選擇體重為50 kg～60 kg的生長(zhǎng)育肥豬33頭，隨機(jī)分為6組。復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉(下稱H)組6頭、氟苯尼考粉(下稱F)組6頭、替米考星預(yù)混劑(下稱T)組5頭、蛋氨酸鉻(下稱C)組5頭、ZnSO4·H2O(下稱Z)組6頭，空白(下稱B)組5頭。分別對(duì)應(yīng)飼喂含有復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉(每天1次，飼喂?jié)舛?.2 g/kg)，氟苯尼考粉(100 g/kg)(每天2次，飼喂?jié)舛?.3 g/kg)，替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)(每天1次，飼料中4 g/kg)，蛋氨酸鉻(每天3次，按Cr元素計(jì)算飼料中150 mg/kg)，ZnSO4·H2O(每天3次，按Zn元素計(jì)算飼料150 mg/kg)，空白對(duì)照(每天3次)的飼料，并于連續(xù)飼喂3 d后的1、6、12、24 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行豬尿液采集，并將采集的尿液置于4℃冷藏備檢。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1～表3?？藗愄亓_最低檢測(cè)限為0.5 μg/mL。檢測(cè)結(jié)果表明，替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)和蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中克倫特羅無陽性結(jié)果出現(xiàn)(表1)。

萊克多巴胺最低檢測(cè)限為0.5 μg/mL。檢測(cè)結(jié)果表明，替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)和蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中萊克多巴胺無陽性結(jié)果出現(xiàn)(表2)。

沙丁胺醇最低檢測(cè)限為0.5 μg/mL。H組采集豬尿樣24份，假陽性結(jié)果7份，分別分布于6 h尿樣1份，12 h尿樣4份，24 h尿樣2份，假陽性率29.17%；F組采集豬尿樣24份，假陽性結(jié)果2份，全部分布于12 h后，假陽性率8.3%；T組采集豬尿樣20份，假陽性結(jié)果2份，全部分布于12 h后，假陽性率10%(圖1)。上述結(jié)果表明，替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中沙丁胺醇均有假陽性結(jié)果出現(xiàn)。飼料添加劑蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O對(duì)ELISA檢測(cè)沙丁胺醇無假陽性結(jié)果出現(xiàn)。

表1 藥物、飼料添加劑對(duì)豬尿中克倫特羅ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響

表2 藥物、飼料添加劑對(duì)豬尿中萊克多巴胺ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響

綜上所述，替米考星預(yù)混劑(100 g/kg)、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉、氟苯尼考粉(100 g/kg)對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中克倫特羅、萊克多巴胺無假陽性影響，對(duì)檢測(cè)沙丁胺醇有不同程度的假陽性影響。其影響程度為復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉(29.17%)>替米考星預(yù)混劑(10.0%)>氟苯尼考粉(8.3%)。飼料添加劑蛋氨酸鉻、ZnSO4·H2O對(duì)ELISA檢測(cè)豬尿中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇均無假陽性影響。

3 討論

沙丁胺醇為苯乙醇胺類β-受體激動(dòng)劑，分子母核中有2個(gè)呈弱酸性的酚羥基(-OH)，可與磺胺氯噠嗪鈉中的-NH2發(fā)生反應(yīng)。從而使包被的沙丁胺醇消耗量增大，洗滌后殘留的抗原抗體復(fù)合物減少，進(jìn)而使結(jié)果假陽性率增多。這與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致[5-6]。氟苯尼考和替米考星藥物也呈現(xiàn)假陽性，這與曹玉美等[7]的研究結(jié)果基本一致。尿液成分和藥物代謝過程較為復(fù)雜，具體原因仍需探究。

表3 藥物、飼料添加劑對(duì)豬尿中沙丁胺醇ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響

克倫特羅、萊克多巴胺組未檢測(cè)到假陽性尿樣。說明上述3種獸藥在本試驗(yàn)中對(duì)ELISA檢測(cè)克倫特羅、萊克多巴胺未造成干擾。究其原因，可能與本試驗(yàn)未篩選到可能造成干擾的藥物或不同階段動(dòng)物代謝變化等原因，有待今后進(jìn)一步研究。

楊照海[8]認(rèn)為，飼料中金屬離子含量太高會(huì)影響抗原抗體的結(jié)合，硫酸鋅會(huì)干擾尿樣的鹽酸克倫特羅檢測(cè)，但在本試驗(yàn)中未見相同結(jié)果?，F(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道中對(duì)離子影響產(chǎn)生假陽性的報(bào)道較少，需進(jìn)一步確證。

通過上述分析，一方面目前用于“瘦肉精”殘留快速檢測(cè)的ELISA 準(zhǔn)確性受環(huán)境、人員、工藝、畜種等多種因素制約，產(chǎn)生假陽性的原因也不盡相同[9-12]。本試驗(yàn)中選用的5種常用獸藥及飼料添加劑具有一定代表性但并不全面，會(huì)有一些干擾因素并未發(fā)現(xiàn)或找到。另一方面，在基層監(jiān)督檢驗(yàn)工作中，檢驗(yàn)人員應(yīng)不斷強(qiáng)化自身素質(zhì)，盡量減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，在抽樣檢測(cè)前還應(yīng)詢問查證用藥記錄，盡可能避免在上述3種容易引起假陽性藥物的休藥期內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)過程中一旦出現(xiàn)疑似陽性，必須通過液相色譜-質(zhì)譜法等確證方法進(jìn)行確證，保證檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性與嚴(yán)謹(jǐn)性，從而為畜產(chǎn)品安全保駕護(hù)航[13-17]。

圖1 ELISA檢測(cè)豬尿沙丁胺醇假陽性率比較