大鼠右冠狀動(dòng)脈右緣支結(jié)扎制備心動(dòng)過(guò)緩模型

湯依群，馮 凱，梁時(shí)雨，吳啟權(quán)，潘奕彤，劉婷婷

（中國(guó)藥科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床藥學(xué)學(xué)院，江蘇南京 211198）

心動(dòng)過(guò)緩是臨床常見(jiàn)疾病，多見(jiàn)于老年或心臟有疾病的患者，可出現(xiàn)眩暈、心絞痛，甚至導(dǎo)致心衰［1］。目前心動(dòng)過(guò)緩造模方法主要有以下幾類(lèi)：①直接給予心臟抑制性藥物，如乙酰膽堿和普萘洛爾等［2-4］。此類(lèi)方法造模方便，但動(dòng)物種屬差異性大，與臨床心動(dòng)過(guò)緩發(fā)病機(jī)制不同。②化學(xué)物質(zhì)損傷法，即將甲醛或NaOH等注射至右心房，造成竇房結(jié)局部損傷［5］，模擬病竇發(fā)生。此類(lèi)方法操作較復(fù)雜，損傷程度難控制，重現(xiàn)性差。③刺激迷走神經(jīng)干引起心率減慢［6］。此法動(dòng)物心率減慢程度與受刺激動(dòng)物的種屬及刺激頻率相關(guān)，多用于制備急性模型，較少用于心動(dòng)過(guò)緩發(fā)病機(jī)制的研究。制備與臨床發(fā)病機(jī)制相關(guān)且重現(xiàn)性好的心動(dòng)過(guò)緩動(dòng)物模型，是研究心動(dòng)過(guò)緩發(fā)病機(jī)制及評(píng)價(jià)干預(yù)措施療效的關(guān)鍵。

臨床數(shù)據(jù)顯示，心肌梗死患者易發(fā)生心動(dòng)過(guò)緩［7］。左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)可以引起心肌缺血、心肌重構(gòu)、誘發(fā)心率失常和心衰，是本實(shí)驗(yàn)室常用的動(dòng)物模型［8］。Goldstein等［9］發(fā)現(xiàn)，右冠狀動(dòng)脈阻塞導(dǎo)致心肌梗死患者易發(fā)生心動(dòng)過(guò)緩。本研究通過(guò)結(jié)扎大鼠右冠狀動(dòng)脈分支，引起右心房供血障礙，損傷竇房結(jié)細(xì)胞，建立大鼠缺血性心動(dòng)過(guò)緩模型。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試劑和儀器

雄性SD大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量250～300 g，購(gòu)自南京市青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)，動(dòng)物許可證號(hào)為SCKX（浙）2014-0001。動(dòng)物飼養(yǎng)條件符合中國(guó)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理委員會(huì)的要求，大鼠實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，溫度23～25℃，濕度50%～70%，明暗交替12 h飼養(yǎng)，每天更換墊料。

Trizol和BCA試劑盒，碧云天生物技術(shù)有限公司；ECL顯色劑，上海生工生物有限公司；兔抗大鼠GAPDH多克隆抗體（A00227-1）和HRP-羊抗兔lgG多克隆抗體（BA1054），博士德生物有限公司；兔抗大鼠超極化激活環(huán)核苷酸門(mén)控陽(yáng)離子通道亞型4（hyperpolarization activated cyclic nucleotide gated cation channel 4，HCN4）蛋白多克隆抗體（bs-1691R），北京博奧森生物技術(shù)有限公司；兔抗大鼠鈉鈣交換蛋白1（sodium calcium exchanger 1，NCX1）單克隆抗體（ab177952），美國(guó)abcam公司。

TE124S電子天平（萬(wàn)分之一），德國(guó)Sartorius公司；Versamax光吸收型酶標(biāo)儀，美谷分子儀器（上海）有限公司；Bioshine Chemi Q4600mini化學(xué)發(fā)光成像儀，上海歐翔科學(xué)儀器有限公司；HX-300S動(dòng)物呼吸機(jī)、BL-420S生物信號(hào)采集與分析系統(tǒng)和PT-100壓力轉(zhuǎn)換器，成都泰盟軟件有限公司；TGLM20高速低溫離心機(jī)，凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司。

1.2 動(dòng)物分組及手術(shù)

動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，ip水合氯醛300 mg·kg-1麻醉，將BL-420S生物信號(hào)采集與分析系統(tǒng)的白色，黑色和紅色電極分別插入大鼠右前肢，右后肢和左后肢的皮下，測(cè)量Ⅱ?qū)?lián)心電圖，將心電圖正常大鼠隨機(jī)分成3組：左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組和假手術(shù)組，每組6只。

左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎［8］：大鼠麻醉后記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖（麻醉方法同上）。連接呼吸機(jī)（潮氣量：13 mL，呼吸比：2∶1，呼吸頻率：70 min-1），左胸皮膚縱向切開(kāi)，分離胸肌，在第4肋間打開(kāi)胸腔隔膜和心包膜。輕微擠壓胸部使心臟露出胸腔。左冠狀動(dòng)脈左前降支（left anterior descending，LAD）起始部位下約2 mm處，用5-0縫合線結(jié)扎。心電圖Ⅱ?qū)?lián)中ST段抬高，認(rèn)定結(jié)扎成功。心臟放回胸腔，排出空氣。對(duì)大鼠肌肉和皮膚逐層縫合?？p合完畢后，除去呼吸機(jī)。整個(gè)手術(shù)過(guò)程注意無(wú)菌操作，避免傷口感染帶來(lái)的大鼠死亡或心率等指標(biāo)的改變。

右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎：動(dòng)物麻醉及開(kāi)胸方法同前，用蚊式鉗分離胸肌并且在第4肋間打開(kāi)胸腔隔膜和心包膜，輕微擠壓胸部使心臟露出胸腔。右冠狀動(dòng)脈的右緣支（right marginal artery，RMA）位于右心耳下緣及心尖中點(diǎn)處，用5-0縫合線結(jié)扎右緣支起點(diǎn)處。心電圖Ⅱ?qū)?lián)中ST段抬高，為結(jié)扎成功標(biāo)志。后續(xù)動(dòng)物處理同左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎。

假手術(shù)組：動(dòng)物麻醉及開(kāi)胸方法同前，在大鼠左、右冠狀動(dòng)脈相應(yīng)位置穿線后，將心臟放回胸腔，之后同法縫合，處理。

各組動(dòng)物手術(shù)全過(guò)程，以及術(shù)后第5天（d5），d10和d15記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。術(shù)后d16進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)以測(cè)量心功能，剪取心臟組織，部分放置于4%甲醛溶液中為組織學(xué)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備，其余放在-80℃冰箱凍存進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

1.3 大鼠心功能測(cè)定

大鼠術(shù)后d16，麻醉，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，聚乙烯導(dǎo)管插入頸總動(dòng)脈，連接PT-100壓力轉(zhuǎn)換器。通過(guò)觀察顯示器波形變化，將插管從頸動(dòng)脈推入大鼠左心室內(nèi)，記錄4個(gè)心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)衡量大鼠心功能狀態(tài)：左心室內(nèi)壓最大下降速率（maximal rate of decline of ventricular pressure，-dp/dtmax），左心室內(nèi)壓最大上升速率（maximal rate of rise of ventricular pressure，+dp/dtmax），左心室終末舒張壓（left ventricular end-diastolic pressure，LVEDP）和左心室收縮壓（left ventricular systolic pressure，LVSP）。

1.4 HE和Masson染色進(jìn)行病理組織學(xué)檢查

術(shù)后d16，大鼠處死，暴露心臟，在體原位尋找大鼠右側(cè)上腔靜脈，沿上腔靜脈遠(yuǎn)端與心臟相連的大血管根部離斷血管，取下完整心臟，剪下右心房及與之相連的上腔靜脈，分離并去除上腔靜脈周?chē)慕Y(jié)締組織，進(jìn)一步修剪取下來(lái)的組織，去除多余部分，以上腔靜脈與右心房交界區(qū)為中心，上下各1.5 cm處橫斷上腔靜脈與右心房，取下的組織部分包含竇房結(jié)。剪取1/2用于病理組織學(xué)檢測(cè)。剩余組織凍存于-80℃冰箱，用于分子生物學(xué)測(cè)定。將包含竇房結(jié)的右心房組織放置于4%甲醛中固定48 h，脫水，包埋，切片（5 μm），固定于載玻片上，晾干備用。進(jìn)行HE染色和Masson染色，顯微鏡下觀察，拍照。HE觀察組織中細(xì)胞是否排列整齊，組織間隙是否發(fā)生炎性浸潤(rùn)。Masson染色觀察組織間隙是否發(fā)生纖維化。每張切片在顯微鏡（200倍）下選取3個(gè)視野，使用Image-Pro Plus 6.0統(tǒng)計(jì)炎性浸潤(rùn)，纖維化和整個(gè)組織切片的面積。炎性浸潤(rùn)和纖維化百分比為炎性浸潤(rùn)和纖維化面積與組織切片面積的比值，取3個(gè)視野的平均值。

1.5 Western蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)HCN4和NCX1蛋白表達(dá)

取組織30 mg，加入RIPA裂解液，剪碎，放入勻漿器中磨碎，冷凍離心（12000×g，4℃，15 min）。BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。各樣品組織加入等量的5×SDS加樣緩沖液均勻混合，煮沸5 min，使蛋白質(zhì)充分變質(zhì)。采用10%SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，120 V，60 min轉(zhuǎn)膜。將轉(zhuǎn)好的PVDF膜置于封閉液（5%脫脂奶粉TBST混合液）中1 h，取出PVDF膜于TBST中洗凈，進(jìn)行一抗（GAPDH：1∶5000，HCN4：1∶5000，NCX1：1∶3000）孵育，4℃過(guò)夜。用TBST溶液洗膜，重復(fù)3次，每次10 min。二抗（1∶5000）室溫孵育2h。TBST重復(fù)洗膜3次，每次10min。最后加入ECL顯色劑后放入Bioshine Chemi Q4600mini化學(xué)發(fā)光成像儀中顯影，Chemi Capture軟件拍照成像，用Image J圖像分析軟件進(jìn)行分析。目標(biāo)蛋白相對(duì)表達(dá)水平用積分吸光度（integrated absorbance，IA）目標(biāo)蛋白/IAGAPDH比值表示。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究采用SPASS 11.0系統(tǒng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)均以±s表示，多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎對(duì)SD大鼠心電圖的影響

SD大鼠心電圖結(jié)果顯示（圖1），與正常組大鼠心電圖相比，假手術(shù)組無(wú)明顯改變，左、右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組大鼠ST段升高。對(duì)ST段進(jìn)行分析，結(jié)果顯示（圖1B），與假手術(shù)組相比，左、右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎均可引起大鼠心電圖ST段顯著升高（P＜0.01）；但右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組大鼠ST段升高較左冠脈動(dòng)脈結(jié)扎大鼠ST段上升幅度?。≒＜0.01），提示右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎導(dǎo)致大鼠右心房缺血程度較輕。

2.2 右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎對(duì)SD大鼠心率的影響

結(jié)果顯示（圖2），假手術(shù)組大鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中心率平穩(wěn)，無(wú)較大波動(dòng)；左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組大鼠心率在術(shù)后d5上升（P＜0.05），術(shù)后d15回落至正常水平；右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組大鼠，在術(shù)后d10心率顯著降低（P＜0.05）。提示右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎可誘導(dǎo)大鼠心動(dòng)過(guò)緩，導(dǎo)致心率顯著降低。

2.3 右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎對(duì)SD大鼠心功能的影響

心功能結(jié)果顯示（圖3），與假手術(shù)組相比，左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠的-dp/dtmax顯著下降（P＜0.01），LVEDP顯著上升（P＜0.01）。右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠上述參數(shù)無(wú)顯著差異,提示右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎未造成SD大鼠心功能受損。提示右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎并未通過(guò)損傷大鼠心功能導(dǎo)致心率降低。

2.4 右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎對(duì)SD大鼠右心房組織形態(tài)的影響

組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖4），左、右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎SD大鼠的右心房都有較為明顯的炎癥浸潤(rùn)（HE染色）和纖維化變化（Masson染色），說(shuō)明2種結(jié)扎方法均可引起SD大鼠右心房組織形態(tài)改變。對(duì)炎性浸潤(rùn)（圖4A白色區(qū)域）和纖維化（圖4A藍(lán)色區(qū)域）區(qū)域面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示（圖4B和4C），與左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組相比，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠炎性浸潤(rùn)（P＜0.01）和纖維化（P＜0.01）變化更明顯，提示右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎對(duì)SD大鼠右心房損傷更嚴(yán)重。

Fig.1 Representative traces of electrocardiogram（ECG）after coronary artery ligations.Eighteen male SD rats were divided into left anterior descending（LAD）ligation group，right marginal branch of right coronary artery（RMA）ligation group，and sham-operated group.Chests of six rats per group were opened after being anesthetized with 10%chloral hydrate（ip，300 mg · kg-1）.Then LAD and RMA were ligated while moni?tored.The ECG was recorded on the 5thday(d5)，d10 and d15 after surgery.B was quantitative analysis of ST segment in A.Arrows in A show ST segments were elevated obviously in LAD ligation group and slightly in RMA ligation group,respectively.±s，n=6. ＊＊P＜0.01，compared with sham group；##P＜0.01，compared with RMA ligation group.

Fig.2 Effect of LAD and RMA ligation on heart rate from d0 to d15.See Fig.1 for the rat treatment.±s，n=6.＊P＜0.05，compared with d0 after surgery.

Fig.3 Effect of LAD and RMA ligation on maximal rate of decline of ventricular pressure（-dp/dtmax）（A），maximal rate of rise of ventricular pressure（+dp/dtmax）（B），left ventricular end-diastolic pressure（LVEDP，C）and left ventricular systolic pressure（LVSP，D）on d16 after surgery.See Fig.1 for the rat treatment.1 mmHg=0.133 kpa.±s，n=6.＊＊P＜0.01，compared with sham group.

Fig.4 Histopathological changes on auricula dextra of rats by HE and Masson staining.See Fig.1 for the rat treatment.B：quantitative result of fibrosis in A；C：quantitative result of inflammatory cells infiltration in A.The arrows indicate inflammatory cell infiltration and fibrosis.± s，n=3. ＊＊P＜0.01，compared with sham group；##P＜0.01，compared with LAD ligation group.

2.5 右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎對(duì)大鼠竇房結(jié)起搏相關(guān)通道蛋白表達(dá)的影響

Western蛋白印跡結(jié)果顯示（圖5），與假手術(shù)組相比，左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠的HCN4和NCX1蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯改變，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠HCN4和NCX1蛋白表達(dá)水平顯著性降低（P＜0.05）,提示右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎可抑制SD大鼠HCN4和NCX1蛋白的表達(dá)。

Fig.5 Sodium calcium exchanger 1（NCX1）and hyper?polarization activated cyclic nucleotide gated cation channel 4（HCN4）protein expression after surgery by Western blotting.See Fig.1 for the rat treatment.IA：integrated absorbance.B was semi-quantitative results of A.±s，n=3.＊P＜0.05，compared with sham group.

3 討論

竇房結(jié)是哺乳動(dòng)物心臟正常節(jié)律的起搏點(diǎn)。竇房結(jié)由4種細(xì)胞組成：具有起搏功能的P細(xì)胞，過(guò)渡細(xì)胞（T細(xì)胞），浦肯野細(xì)胞以及普通心肌細(xì)胞。竇房結(jié)細(xì)胞4期自動(dòng)除極速率是心臟自律性的基礎(chǔ)，主要由HCN、NCX、L型Ca2+通道、T 型Ca2+通道和Na+-K+泵等參與［10］。其中L型和T 型Ca2+通道及Na+-K+泵已有許多研究者進(jìn)行了大量研究。本研究以NCX和HCN為研究對(duì)象，觀察其在心動(dòng)過(guò)緩模型中的改變。NCX在動(dòng)作電位4相，可通過(guò)調(diào)節(jié)胞外Ca2+內(nèi)流，協(xié)助自動(dòng)除極而影響心率［11］。NCX1是心臟NCX的主要亞型。HCN在竇房結(jié)細(xì)胞中選擇性地高密度分布，激活后可使竇房結(jié)起搏細(xì)胞去極化，引起膜電位逐漸升高至接近閾值，從而產(chǎn)生周而復(fù)始的電活動(dòng)。與HCN相關(guān)的門(mén)控通道亞單位主要有HCN1，HCN2和HCN4，在竇房結(jié)起搏通道中占主要支配的成分是HCN4亞型［12］。起搏電流（funny current，I）f是HCN陽(yáng)離子電流，由Na+和K+混合而成，主要在竇房結(jié)細(xì)胞的舒張去極化的早期起除極的作用，HCN4含量的減少導(dǎo)致If減弱，Na+內(nèi)流減少，嚴(yán)重阻礙了起搏細(xì)胞自動(dòng)去極化的速度，減慢大鼠心率。竇房結(jié)細(xì)胞的去極化早中期的Ca2+內(nèi)流促進(jìn)肌漿網(wǎng)蘭尼堿受體的局部Ca2+釋放，觸發(fā)INCX，INCX以排出1個(gè)Ca2+和轉(zhuǎn)入3個(gè)Na+的正向模式形成內(nèi)向電流，降低膜電位負(fù)值達(dá)閾電位水平約-40 mV時(shí)，激活I(lǐng)Ca-L，大量Ca2+內(nèi)流通過(guò)Ca2+誘導(dǎo)的Ca2+釋放激發(fā)全細(xì)胞肌漿網(wǎng)鈣釋放至胞質(zhì)形成鈣瞬變，產(chǎn)生動(dòng)作電位的上升支。NCX1含量降低，使Ca2+內(nèi)流減少，緩慢形成動(dòng)作電位上升支，動(dòng)作電位周期延長(zhǎng)，導(dǎo)致心率降低。

冠狀動(dòng)脈右分支是右心房供血的重要來(lái)源之一，結(jié)扎SD大鼠右冠狀動(dòng)脈分支，右心房供血受損，竇房結(jié)供血不足。左冠狀動(dòng)脈分支是左心室的主要供血來(lái)源，左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎，心室供血障礙，可引起心功能?chē)?yán)重受損。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，結(jié)扎左、右冠狀動(dòng)脈，心電圖ST段均升高，提示結(jié)扎成功，均造成心臟缺血損傷。竇房結(jié)主要由右冠狀動(dòng)脈供血，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎導(dǎo)致竇房結(jié)供血不足，使得竇房結(jié)細(xì)胞損傷，易引發(fā)心動(dòng)過(guò)緩。ST段升高幅度顯示，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎引起的心臟缺血程度顯著低于左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎，說(shuō)明右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎對(duì)心臟的損傷較輕，有利于提高SD大鼠存活率。對(duì)SD大鼠心率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎10 d后，SD大鼠心率明顯降低，且術(shù)后15 d心率保持較低水平，說(shuō)明右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎成功誘導(dǎo)了SD大鼠心動(dòng)過(guò)緩，并且我們認(rèn)為右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎10～15 d，是建立心動(dòng)過(guò)緩模型比較合適的時(shí)間。為了排除SD大鼠心功能對(duì)心率的影響，術(shù)后15 d，對(duì)SD大鼠進(jìn)行了血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)，結(jié)果顯示，左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠-dp/dtmax顯著降低，LVEDP顯著升高，提示心功能明顯受損。此結(jié)果與張穎等［13］左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠的主要血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)（-dp/dtmax，+dp/dtmax，LVEDP和LVSP）與對(duì)照組數(shù)值無(wú)明顯差異。因此猜測(cè)，左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎未能引起心率降低，術(shù)后出現(xiàn)的心率升高，估計(jì)與心室供血障礙引起心功能降低，反饋性心率變化所致。右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎對(duì)左心室功能影響小，心率的平穩(wěn)降低可能與右心房缺血性損害有關(guān)。為此進(jìn)行了SD大鼠右心房組織形態(tài)學(xué)檢查，結(jié)果顯示，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎SD大鼠右心房組織纖維化程度比左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組明顯增高，炎癥浸潤(rùn)更為嚴(yán)重。心房纖維化可引起心肌細(xì)胞靜息電位超極化，抑制細(xì)胞興奮，引起心率降低。右心房損傷使得竇房結(jié)細(xì)胞受損，誘發(fā)心動(dòng)過(guò)緩。Western蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，與對(duì)照組相比，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠的右心房組織（包含竇房結(jié)）中HCN4和NCX1蛋白表達(dá)顯著降低而左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎組SD大鼠上述蛋白表達(dá)無(wú)明顯改變。宋寶瑩［14］研究報(bào)道，右冠狀動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化管腔狹窄可導(dǎo)致HCN4表達(dá)降低，左冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和心肌梗死與HCN4表達(dá)無(wú)關(guān)，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。HCN4和HCN1是竇房結(jié)細(xì)胞維持自律性的重要離子通道，其表達(dá)減少，阻礙起搏細(xì)胞自動(dòng)除極且延長(zhǎng)動(dòng)作電位周期，誘發(fā)心動(dòng)過(guò)緩。

與經(jīng)典的左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)相比，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)對(duì)SD大鼠心臟功能影響較小，交感神經(jīng)反饋性刺激較弱，心率變化平穩(wěn)，竇房結(jié)缺血性病變和纖維化明顯，手術(shù)操作難度與左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎類(lèi)似。為保證結(jié)扎部位和程度類(lèi)似，右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎操作時(shí)要把心臟取出，置于胸腔外，因此實(shí)驗(yàn)操作和飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)盡可能潔凈，SD大鼠胸部主要消毒和無(wú)菌處理，必要時(shí)使用抗菌藥物，避免SD大鼠傷口感染，操作要盡可能輕柔、迅速，避免損傷血管及其他器官。

與現(xiàn)有的心動(dòng)過(guò)緩模型相比，SD大鼠右冠狀動(dòng)脈結(jié)扎建立的心動(dòng)過(guò)緩模型的發(fā)病機(jī)制和缺血性病竇綜合征類(lèi)似，都是由于冠狀動(dòng)脈阻塞，引起竇房結(jié)供血不足，導(dǎo)致竇房結(jié)損傷，引發(fā)心律失常。同時(shí)，成模時(shí)間短，約2周。此模型可用于動(dòng)態(tài)研究缺血對(duì)竇房結(jié)功能的影響和心房纖維化與缺血的關(guān)系。對(duì)探討心動(dòng)過(guò)緩發(fā)病機(jī)制，觀察心動(dòng)過(guò)緩治療藥物的療效，以及尋找心動(dòng)過(guò)緩藥物治療靶點(diǎn)，此模型都有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。