新發(fā)2型糖尿病合并肥胖患者血清鋅α2蛋白水平與胰島素抵抗的相關(guān)性分析

王銘婕 閆朝麗

[摘要] 目的 分析2型糖尿病（TD2M）患者血清鋅α2蛋白（ZAG）水平與胰島素抵抗（IR）的相關(guān)性，探索ZAG成為代謝綜合征（MS）或肥胖血清指標(biāo)的可能性。方法 選擇單純肥胖與新發(fā)TD2M合并肥胖患者為研究對(duì)象，通過(guò)雙向凝膠電泳（2-DE）、質(zhì)譜分析、實(shí)驗(yàn)室檢查等方式，分析血清ZAG水平與胰島素抵抗及脂糖代謝的相關(guān)性。結(jié)果 與對(duì)照組相比，觀察組ZAG上調(diào)；觀察組患者ZAG水平與胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、甘油三酯（TG）呈正相關(guān)（P<0.05），與高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；在觀察組中，HDL-C是血清ZAG水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。結(jié)論 ZAG為單純肥胖者與新發(fā)TD2M合并肥胖者的差異表達(dá)蛋白，ZAG與新發(fā)TD2M合并肥胖者IR關(guān)系密切，是人體脂代謝的重要調(diào)節(jié)因子。

[關(guān)鍵詞] 2型糖尿??；血清鋅α2蛋白；胰島素抵抗；相關(guān)性

[中圖分類號(hào)] R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-4062（2018）03（a）-0055-02

糖尿病（DM）是臨床常見(jiàn)的慢性疾病，以高血糖水平為主要標(biāo)志，若未能及時(shí)得到治療，可引起全身多器官損害[1]。隨著人們物質(zhì)條件的提高，肥胖癥成為現(xiàn)代社會(huì)常見(jiàn)的慢性代謝性疾病，常伴有局部體脂沉淀過(guò)多的癥狀（單純肥胖脂肪分布均勻，無(wú)代謝分泌紊亂現(xiàn)象）。肥胖可導(dǎo)致胰島素抵抗（IR）與胰高血糖癥已被證實(shí)，但與DM之間的具體機(jī)制尚不明確。研究發(fā)現(xiàn)[2-3]，肥胖、IR、DM患者與健康人群之間存在諸多差異蛋白，這些蛋白可能在疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。鋅α2蛋白（ZAG）是成熟脂肪細(xì)胞分泌的一種脂肪因子，具有強(qiáng)烈的促脂肪分解作用，對(duì)人體脂糖代謝具有明顯的影響。該次研究比較了不同人群血清ZAG水平差異，探索ZAG成為代謝綜合征（MS）或肥胖血清指標(biāo)的可能性，以及2型糖尿?。═D2M）合并肥胖患者血清ZAG水平與IR的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選則10例內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)內(nèi)分泌科接收的門診或住院的新發(fā)TD2M合并肥胖者，納入觀察組。患者均符合《中國(guó)2型糖尿病防治指南（2013年版）》中提出的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）≥25 kg/m2。排除半年內(nèi)有糖尿病癥狀且經(jīng)治療的患者；合并肝腎功能異常、腫瘤、感染或其他嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病及基線資料缺失者。

另外，選擇該院健康體檢中心選取年齡、性別、體重等基線資料相匹配的健康志愿者10例（單純肥胖，BMI≥25 kg/m2）作為對(duì)照組。該次研究經(jīng)研究對(duì)象知情并簽署同意書(shū)。

1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)器材 儀器設(shè)備：臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（湘儀TGL-20M）、臺(tái)式高速離心機(jī)（湘儀TG16-WS）、等電聚焦儀（IEF 100）、雙向垂直電泳儀（Hoefer SE900）、快速掃描儀（愛(ài)普生 V10）、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（α100）、納升液相色譜-四級(jí)桿-（micrOTOF-Q ⅡTM）。試劑盒：白蛋白/IgG去除試劑盒、IPG膠條（13 cm，PH3-10）。

1.2.2 樣本制備 所有受檢者禁食10 h后，于次日清晨進(jìn)行統(tǒng)一血樣采集，取空腹肘靜脈血2～3 mL，離心10 min（3 000 r/min）后取上清液分裝，存放于-70℃冰箱內(nèi)保存。實(shí)驗(yàn)前將每組10例按等體積混勻。取樣本10 μL，利用除高豐度試劑盒去除多數(shù)高豐度白蛋白及IgG后，再利用三氯乙酸/丙酮進(jìn)行除鹽。

1.2.3 雙向凝膠電泳（2-DE） 第一向電泳：將樣品與尿素、硫脲、CHAPS、溴酚藍(lán)、DTT、Bio-Lyte、超純水混合均勻后加至水化槽，然后放入預(yù)制IPG膠條（17 cm，PH3-10），對(duì)好正負(fù)極后蓋上蓋子，設(shè)置等電聚焦參數(shù)。第二向電泳：使用12%的SDS-PAGE膠，開(kāi)始使用較低電流，待樣品走出IPG膠條，凝聚成線后后采用較高電流，當(dāng)凝膠底部邊緣顯示酚藍(lán)指示劑時(shí)即為完成電泳。

1.2.4 凝膠掃描與圖像采集 快速掃描制備好的凝膠，將掃描好的圖像用PDQuest7.1.1 2-DU膠分析軟件結(jié)合肉眼觀察進(jìn)行分析，確定蛋白差異點(diǎn)，切取差異點(diǎn)所在凝膠，放入EP管中。

1.2.5 質(zhì)譜分析 將2-DE挑選出的差異蛋白經(jīng)ESI-Q-TOF-LC/MS質(zhì)譜分析，鑒定蛋白點(diǎn)。向每個(gè)樣品管中加水，進(jìn)行洗膠、然后行銀染脫色、酶解；將酶解液點(diǎn)入上樣孔，設(shè)置參數(shù)，獲取質(zhì)譜分析結(jié)果。

1.2.6 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè) 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兩組患者血清ZAG水平；采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血常規(guī)、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平；糖化血紅蛋白（HbA1c）采用糖化血紅蛋白分析儀進(jìn)行檢測(cè)；化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)受檢者空腹胰島素（Fins）水平；胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）采用HOMA穩(wěn)態(tài)模型進(jìn)行計(jì)算：HOMA-IR=Fins×FPG/22.5。操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組患者ZAG的2-DE結(jié)果與質(zhì)譜分析結(jié)果，分析觀察組患者ZAG與TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c水平及HOMA-IR指數(shù)相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

此次研究均由SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理分析數(shù)據(jù)資料，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)；血清ZAG水平與各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析采用偏相關(guān)分析，以血清ZAG水平為因變量，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)為自變量進(jìn)行多元線性回歸分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ZAG在不同人群中表達(dá)差異

通過(guò)2-DE 技術(shù)，明確了ZAG為對(duì)照組（單純肥胖）與觀察組（新發(fā)TD2M合并肥胖）患者的差異蛋白點(diǎn)。與對(duì)照組相比，觀察組ZAG上調(diào)，見(jiàn)表1。

2.2 空腹ZAG水平與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析

偏相關(guān)分析結(jié)果顯示，觀察組患者ZAG水平與HOMA-IR、HbA1c、TG正相關(guān)（rZAGvsHOMA-IRc=0.55、rZAGvsHbA1c=0.39、rZAGvsTG=0.43，P<0.05），與HDL-C負(fù)相關(guān)（rZAGvsHDL-C=-0.45）。以血清ZAG水平為因變量，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)為自變量進(jìn)行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示，在觀察組中，HDL-C是血清ZAG水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（β=-0.38，P<0.05）。

3 討論

ZAG是一種能在血清中分離得到的可溶性糖蛋白，是成熟脂肪細(xì)胞分泌的一種脂肪因子，從屬M(fèi)HC-Ⅰ家族。近年來(lái)研究表明[5-6]，ZAG在機(jī)體脂代謝中具有重要地位，有明顯的分解脂肪的作用，其機(jī)制可能是通過(guò)激活β3腎上腺素受體，提高脂肪細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷水平所致。目前研究已證明瘦素、脂聯(lián)素等脂肪因子與IR關(guān)系密切，而ZAG可通過(guò)分泌影響瘦素、脂聯(lián)素等其他脂肪因子的表達(dá)，故而與IR存在一定關(guān)系[7]。目前研究關(guān)于血清ZAG水平與IR指標(biāo)之間關(guān)系的研究結(jié)果并不一致，該研究就TD2M患者血清ZAG水平與IR的相關(guān)性展開(kāi)研究，以期為深入了解ZAG與IR的關(guān)系作出參考。

2-DE實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在單純肥胖人群與T2DM合并肥胖患者群體中，ZAG表達(dá)并不相同，說(shuō)明ZAG與機(jī)體體脂狀況關(guān)系不大，可能與IR存在一定的相關(guān)性。質(zhì)譜分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，觀察組ZAG上調(diào)，也驗(yàn)證了這一點(diǎn)。偏相關(guān)分析結(jié)果顯示，觀察組患者ZAG水平與HOMA-IR、HbA1c、TG呈正相關(guān)（P<0.05），與HDL-C呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；這與以往文獻(xiàn)報(bào)道相符[8]。在TD2M組中，HDL-C是血清ZAG水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）；進(jìn)一步提示ZAG與脂肪組織存在密切關(guān)系，是人體脂代謝的重要調(diào)節(jié)因子。

綜上所述，ZAG為單純肥胖者與新發(fā)TD2M合并肥胖者的差異表達(dá)蛋白，ZAG與新發(fā)TD2M合并肥胖者IR關(guān)系密切，是人體脂代謝的重要調(diào)節(jié)因子，ZAG可能在未來(lái)肥胖、TD2M的靶向治療中發(fā)揮重要作用。

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（收稿日期：2017-12-09）