超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中氟甲砜霉素殘留量的不確定度

◎ 吳正雙，王光新，林顯活

（1.佛山市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測中心，廣東 佛山 528225；2.國家知識產(chǎn)權(quán)局專利局專利審查協(xié)作江蘇中心，江蘇 蘇州 215163）

不確定度是與測量結(jié)果相關(guān)的參數(shù)，用來表示被測量值的分散性，其數(shù)值大小反映了結(jié)果的準(zhǔn)確性，與結(jié)果的判定相關(guān)，一切測量都不可避免地具有不確定度[1-3]。

氟甲砜霉素是一種廣譜類抗生素。農(nóng)業(yè)部235號公告規(guī)定，氟甲砜霉素（又叫氟苯尼考）在各種動物源性食品中的殘留限量為200～3000 μg/kg[5]。近年來，水產(chǎn)品中氟甲砜霉素在國家及地方監(jiān)督抽檢中的檢出率有上升趨勢[6]，為保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和科學(xué)性，有必要對測定結(jié)果進(jìn)行不確定度的評定，同時為測定其他獸藥殘留量的不確定評定提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：氟甲砜霉素、氘代氯霉素（D5-氯霉素），德國Dr.Ehrenstorfer公司。

Quattro Premier XE超高效液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（UPLC-MS/MS）：美國Waters公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海振捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；HU-20500 D超聲波清洗器：天津恒澳科技發(fā)展有限公司。

1.2 樣品前處理方法

樣品前處理參照GB/T 20756-2006《可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》進(jìn)行，內(nèi)標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 數(shù)學(xué)模型

根據(jù)GB/T 20756-2006的測定方法，建立樣品中待測物含量的數(shù)學(xué)模型如下：

其中，X：樣品中氟甲砜霉素的含量，μg/kg；R：由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的樣品溶液中待測物濃度與D5-氯霉素內(nèi)標(biāo)濃度比；Cis：樣品溶液中D5-氯霉素內(nèi)標(biāo)的濃度，ng/mL；V：樣品最終定容體積，mL；m：樣品質(zhì)量，g。

2.2 不確定度來源分析

本方法的不確定主要來源有：①樣品稱量不確定度。②樣液定容體積不確定度。③標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及稀釋時引入的不確定度。④標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度。⑤樣品重復(fù)測定引入的不確定度。⑥同位素內(nèi)標(biāo)引入的不確定度[2-4]。

2.3 相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量的評定

2.3.1 樣品稱量不確定度[5]

稱取樣品5.2581 g，天平的精度為0.0001 g，根據(jù)天平計(jì)量證書查的其最大允差為±0.05 g，取矩形分布（又叫均勻分布），k=則不確定度u(m)=0.05/=0.0289 g；相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度ur(m)=0.0289/5.2581=0.0055。

2.3.2 樣液定容體積不確定度

樣品經(jīng)萃取、凈化后用1.0 mL單標(biāo)刻度的移液管定容至1.0 mL。根據(jù)校準(zhǔn)規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)JJG 196-2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》給出的1 mL單標(biāo)刻度移液管（A級）的容量允差為±0.007 mL，取矩形分布，則定容體積引入的相對不確定度為：

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及稀釋引入的不確定度

（1）由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書可知：氟甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)品純度ps=99.0%，最大允差為0.5%，取矩形分布，則標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

（2）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱量。氟甲砜霉素的稱樣量ms=10.12 mg，使用的天平精密度為0.01 mg，允差為±0.1 mg，取矩形分布，則引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

（3）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與稀釋過程的體積引入的不確定度。定容和稀釋產(chǎn)生的不確定度包括容量瓶和移液器引入的不確定度。①10 mL、50 mL容量瓶體積。根據(jù)校準(zhǔn)規(guī)程JJG 196-2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》，20 ℃時10 mL、50 mL容量瓶（A級）的容量允差分別為±0.02 mL、±0.05 mL，取三角分布，則標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為u=0.02/=0.00816 mL、u=0.05/=0.0204 mL。②1 mL可調(diào)移液器的體積引入的不確定度。根據(jù)校準(zhǔn)規(guī)程JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》，1 mL可調(diào)移液器移液點(diǎn)體積Vi、各移液點(diǎn)體積的容量允差Ui、分布類型及不確定度計(jì)算見表1。計(jì)算公式為：

表11 mL可調(diào)移液器移液點(diǎn)體積校準(zhǔn)的不確定度表

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和稀釋過程中體積引入的標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對不確定度合成為：

氟甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度cs，引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成后為0.0139，計(jì)算公式為：

2.3.4 D5-氯霉素同位素內(nèi)標(biāo)引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

D5-氯霉素內(nèi)標(biāo)純度為99.7%，其純度、稱量、定容和稀釋以及在樣品中的加入量等因素引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度分析和計(jì)算與2.3.1至2.3.3同理，相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別是0.0029、0.0116、0.0112、0.0036，故d5-氯霉素同位素內(nèi)標(biāo)引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

2.3.5 線性回歸方程引入的不確定度

選取待測物與同位素內(nèi)標(biāo)濃度之比（x）為橫坐標(biāo)，待測物與同位素內(nèi)標(biāo)峰面積之比（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行擬合，設(shè)置5個梯度的校準(zhǔn)工作溶液，每個標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度平行測定2次，線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)等數(shù)據(jù)見表2。

表2 線性回歸方程測定結(jié)果和不確定計(jì)算表

2.3.6 樣品重復(fù)測量引入的不確定度

2.4 相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度的合成與擴(kuò)展

2.4.1 相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度的合成

上述各項(xiàng)不確定度分量相互獨(dú)立，不考慮其相關(guān)性，氟甲砜霉素相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度的合成結(jié)果u(w)=0.156 μg/kg，計(jì)算公式為：

u(w)=w×ur(w)，w=5.20 μg/kg

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)不確定度的擴(kuò)展及結(jié)果表示

根據(jù)JJF 1135-2005，取包含因子k=2，置信概率p=95%，氟甲砜霉素的擴(kuò)展不確定度：

U(w)=k×u(w)=0.313 μg/kg

故本實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果可表示為：（5.20±0.312）μg/kg。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過對天平、容量瓶、移液器、樣品前處理、重復(fù)測定和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合等因素進(jìn)行分析和評定[6-8]。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)溶液配制所產(chǎn)生的不確定度最大，其次是樣品測量重復(fù)性和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合。因此，在實(shí)際操作過程中，可以通過提高實(shí)驗(yàn)人員的經(jīng)驗(yàn)水平和熟練程度、增加平行樣品測定次數(shù)來減小測量不確定度，從而保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。