miR-200b對奶牛乳腺上皮細胞泌乳功能的影響

邊艷杰，韓金汾，段江燕

(山西師范大學 生物化學教研室，山西 臨汾 041004)

MicroRNA(miRNA)是一類單鏈非編碼RNA分子，成熟的miRNA含有19～25個核苷酸，是由具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA前體加工而成。在動物體內(nèi)，miRNA調(diào)控基因的表達主要通過與其靶mRNA 3′UTR序列互補結(jié)合抑制其翻譯或特異性切割靶mRNA使其降解來實現(xiàn)。 作為體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子，miRNA幾乎在所有的生物學過程中都發(fā)揮著重要作用，如發(fā)育、細胞增殖、凋亡和分化[1]。miR-200家族主要由miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-429和miR-141組成，根據(jù)它們在染色體上位置的不同，miR-200的家族成員分為miR-200b/a/429簇與miR-200c/141簇。

乳腺是哺乳動物體內(nèi)唯一反復進行多次發(fā)育與退化的重要器官，乳腺的發(fā)育與泌乳除受到細胞因子、激素等調(diào)控外，miRNA的異常表達也會對泌乳功能造成重要的影響[2-5]。雖然目前關于miRNA在乳腺中的研究已有一些報道，但是對一些泌乳調(diào)控中重要功能性miRNA的挖掘仍然非常有限。Wang等[6]研究發(fā)現(xiàn)，miR-152能介導甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT1的表達促進奶牛乳腺上皮細胞的增殖及泌乳。Bian等[7]報道顯示，miR-29s參與調(diào)控乳腺泌乳主要通過靶控甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3a及DNMT3b的表達。金晶等[8]通過small RNA測序發(fā)現(xiàn)，miR-200b在不同乳品質(zhì)的奶牛乳腺中的表達量差異顯著，推測其可能參與奶牛乳腺乳成分合成的調(diào)控。張犁蘋等[9]研究發(fā)現(xiàn)，與干奶期乳腺組織相比，奶山羊泌乳中期miR-200家族的表達量顯著增加，推測其在乳蛋白、乳脂的合成中也具有重要的調(diào)控作用。目前，關于miR-200家族成員的生物學功能研究報道，主要集中在腫瘤進程調(diào)節(jié)方面[10-11]，而在乳腺泌乳調(diào)控中的研究還不曾報道。鑒于此，以奶牛乳腺上皮細胞系作為體外細胞模型，通過細胞中過表達miR-200b，探討其對奶牛乳腺上皮細胞泌乳能力的影響，以期為我國奶業(yè)乳品質(zhì)量的優(yōu)化提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗所用的中國荷斯坦奶牛均為泌乳期奶牛，選自黑龍江畜牧業(yè)科技園區(qū)，具有相近的遺傳背景、胎次和產(chǎn)奶量。依據(jù)產(chǎn)乳品質(zhì)的不同將6頭試驗奶牛劃分成高乳品質(zhì)H組和低乳品質(zhì)L組(每試驗組3頭)。高乳品質(zhì)H組：平均乳蛋白率(3.27±0.04)%、乳糖含量(4.84±0.03)%、平均乳脂率(4.17±0.01)%；低乳品質(zhì)L組：平均乳蛋白率(2.89±0.02)%、乳糖含量(4.52±0.09)%、平均乳脂率(3.20±0.06)%。取乳腺深層組織，每塊組織體積均勻，約為1 cm3，用生理鹽水(含0.01% DEPC，已滅菌)進行清洗，后用于細胞培養(yǎng)。

Trizol、MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶購自Invitrogen公司，Hairpin-itTMmiRNAs qPCR Quantitation Kit(miR-200b、內(nèi)參5S rRNA)及siRNA-Mate轉(zhuǎn)染試劑購自上海吉瑪生物技術公司，miR-200b mimics及陰性對照Scr購自韓國Bioneer公司，DMEM/F12以及胎牛血清購自Gibco公司，Lactose/D-Galactose(Rapid) Assay Kit購自Megazyme公司，PrimeScriptTMRT Reagent Kit、SYBR Premix ExTaqTM試劑盒購自TaKaRa公司，甘油三酯定量檢測試劑盒購自普利萊基因技術公司，β-酪蛋白(CSN2)檢測試劑盒購自Uscn Life Science公司，細胞培養(yǎng)皿購自康寧公司，Cell-LightTMEdU Apollo1567 In Vitro Imaging Kit購自廣州RiBoBio公司，NaCl等其他常用試劑為國產(chǎn)分析純級。

1.2 TaqMan qRT-PCR檢測miR-200b在不同產(chǎn)乳品質(zhì)奶牛乳腺組織中的表達

添加液氮，將乳腺組織研成粉末，收集至RNase-Free EP管中，加入1 mL Trizol，劇烈振蕩，室溫孵育10 min，然后加入0.2 mL氯仿，混勻15 s后靜置孵育3 min，于4 ℃、12 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min，吸取上層水相至新EP管中，加0.5 mL異丙醇(-20 ℃預冷)，輕輕混勻后，靜置孵育10 min，12 000 r/min離心10 min，收取沉淀，并用75%乙醇洗滌，7 500 r/min離心15 min后，倒掉75%的乙醇，用濾紙蘸去多余水分，風干沉淀，用RNase-Free水溶解沉淀，瓊脂糖凝膠電泳檢測獲取的RNA質(zhì)量。將提取的完整的總RNA進行逆轉(zhuǎn)錄及PCR檢測，具體操作參照MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶及Hairpin-itTMmiRNAs qPCR Quantitation Kit操作說明書，PCR反應結(jié)束后，采用2-ΔΔCt方法計算miR-200b在各組樣品中的相對表達量[12]。

1.3 miR-200b mimics轉(zhuǎn)染奶牛乳腺上皮細胞

本試驗中奶牛乳腺上皮細胞的原代培養(yǎng)采用組織塊法，胰酶消化法進行后期上皮細胞的純化，將純化后的乳腺上皮細胞接種至細胞培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)液為含10%血清的DMEM/F12，細胞于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取濃度約為5×104個/mL的細胞懸液進行接種，待培養(yǎng)板中細胞密度為80%時，進行轉(zhuǎn)染操作。取DMEM/F12細胞培養(yǎng)基(不含雙抗及血清)95 μL，滴加siRNA-Mate轉(zhuǎn)染試劑5 μL，輕輕混勻，室溫孵育5 min，加入miR-200b mimics及陰性對照Scr，其終濃度為100 nmol/L，混勻后靜置10 min?？瞻讓φ战M(Mock)只滴加siRNA-Mate試劑。轉(zhuǎn)染6 h后，熒光顯微鏡分析細胞轉(zhuǎn)染效率，若轉(zhuǎn)染效率滿足試驗要求，用含10%血清的DMEM/F12繼續(xù)培養(yǎng)細胞。轉(zhuǎn)染48 h后，收集細胞樣品，Trizol法提取總RNA，qRT-PCR檢測miR-200b的表達。

1.4 miR-200b靶基因的生物信息學預測

通過生物信息學軟件，對miR-200b可能的靶基因進行在線預測，根據(jù)TargetScan(http://www. targetscan.org/)及miRanda (http://www.microrna.org/)網(wǎng)站提供的miR-200b靶基因預測相關數(shù)據(jù)，篩選出與奶牛乳腺發(fā)育及泌乳相關的重要功能調(diào)控基因。通過分析TargetScan 7.2得到的數(shù)據(jù)，明確miR-200b與其靶基因可能結(jié)合的調(diào)控位點。

1.5 miR-200b過表達對預測靶基因及泌乳相關功能基因mRNA表達的影響

轉(zhuǎn)染陰性對照Scr及miR-200b mimics 48 h后，Trizol法提取總RNA，qRT-PCR檢測miR-200b過表達組及對照組中預測的miR-200b靶基因的表達量，同時檢測對乳成分合成功能基因Akt、Csn2、Srebp1、Glut1 mRNA表達的影響，具體操作步驟參照文獻[7]。β-actin為內(nèi)參基因，結(jié)果用2-ΔΔCt法進行計算。試驗中所涉及引物由華大基因公司合成，相關序列見表1。

1.6 miR-200b過表達對奶牛乳腺上皮細胞活力及增殖的影響

轉(zhuǎn)染陰性對照Scr及miR-200b mimics 96 h后，應用CASY細胞分析儀(Sch?rfe System，德國)檢測miR-200b對奶牛乳腺上皮細胞活力的影響。胰酶消化細胞成單細胞懸液，吸取待測細胞樣品，將其加入10 mL的等電壓電解質(zhì)溶液CASY-TON中，運行分析儀器，將檢測結(jié)果存為活細胞數(shù)據(jù)。吸取單細胞懸液200 μL，加入600 μL乙醇，輕輕混勻，靜置約6 min，確保細胞完全死亡，加入10 mL的CASY-TON，混勻后運行儀器進行檢測，將檢測結(jié)果存為死細胞數(shù)據(jù)，并進行活細胞與死細胞圖像疊加，將二者交叉處所對應的X軸數(shù)值設定為標線位置。吸取100 μL的單細胞懸液加入10 mL的CASY-TON，充分混勻后置于分析儀器外部的電極處，檢測各組細胞活力的變化。參照文獻[7]，應用5-乙炔基-2′脫氧尿嘧啶核苷(EdU)標記法，檢測轉(zhuǎn)染miR-200b mimics 96 h后處于增殖期的奶牛乳腺上皮細胞，激光共聚焦觀察細胞，結(jié)果用Image Pro-Plus 6.0軟件進行圖片分析，算出S期細胞百分比，判斷細胞的增殖情況。

表1 miR-200b預測靶基因及乳成分合成相關

1.7 miR-200b過表達后奶牛乳腺上皮細胞分泌β-酪蛋白、乳糖及甘油三酯的測定

miR-200b mimics及陰性對照Scr轉(zhuǎn)染奶牛乳腺上皮細胞 96 h，取細胞培養(yǎng)液，分別于450 nm和550 nm處檢測各組培養(yǎng)液中β-酪蛋白和甘油三酯的含量；烘干法對培養(yǎng)液進行濃縮處理，于450 nm處測定培養(yǎng)液中乳糖的含量。

1.8 統(tǒng)計分析

SPSS 13.0進行試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，試驗均重復3次，結(jié)果以平均值±標準差表示。采用t檢驗分析各試驗組的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 miR-200b在不同產(chǎn)乳品質(zhì)奶牛乳腺組織中的表達水平

將5S rRNA cDNA作為內(nèi)參，進行qRT-PCR數(shù)據(jù)分析，結(jié)果如圖1所示，與L組相比，miR-200b在H組中的表達量極顯著上調(diào)，miR-200b在不同產(chǎn)乳品質(zhì)奶牛乳腺組織中差異表達，推測其可能與奶牛乳腺泌乳調(diào)控相關。

H：高乳品質(zhì)組； L：低乳品質(zhì)組 **表示處理間差異極顯著(P<0.01)，下同圖1 miR-200b在不同產(chǎn)乳品質(zhì)奶牛乳腺組織中的表達水平

2.2 miR-200b mimics轉(zhuǎn)染率及過表達效果檢測

圖2A為純化后的奶牛乳腺上皮細胞，由圖可知，奶牛乳腺上皮細胞形態(tài)均一，細胞呈現(xiàn)為多邊形鵝卵石樣。將異硫氰酸熒光素(FITC)標記的陰性對照Scr，以及通過瞬時轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)入細胞的miR-200b mimics，使用熒光顯微鏡觀察，記錄轉(zhuǎn)染6 h后的轉(zhuǎn)入效率。結(jié)果如圖2B所示，在奶牛乳腺上皮細胞內(nèi)可觀測到較多的綠色熒光，表明轉(zhuǎn)染效果較好。轉(zhuǎn)染miR-200b mimics 48 h后，過表達組與對照組相比miR-200b表達量極顯著升高(圖2C)，表明轉(zhuǎn)染 miR-200b mimics能夠?qū)崿F(xiàn)miR-200b的過表達。

A：純化的奶牛乳腺上皮細胞； B：轉(zhuǎn)染FITC標記的 miR-200b mimics； C：qRT-PCR檢測miR-200b過表達效果圖2 奶牛乳腺上皮細胞中miR-200b mimics轉(zhuǎn)染效率及miR-200b過表達效果的檢測

2.3 miR-200b靶基因的生物信息學預測

結(jié)合TargetScan與miRanda 靶基因生物學預測軟件的分析結(jié)果，通過比較篩選出3個與奶牛乳腺發(fā)育與泌乳調(diào)控關系密切的功能基因，分別為Pten、Dnmt3a、Dnmt3b，將這3個與奶牛乳腺泌乳相關的功能基因作為miR-200b的預測靶基因進行后續(xù)的研究分析。miR-200b與預測靶基因3′UTR 結(jié)合情況如表2所示，miR-200b 的7個種子序列分別與PtenmRNA 3′UTR 2515—2521處、Dnmt3bmRNA 3′UTR 1417—1423處、Dnmt3amRNA 3′UTR 694—700處的堿基序列匹配互補。

表2 miR-200b靶基因預測結(jié)果

2.4 miR-200b過表達對預測靶基因mRNA表達的影響

轉(zhuǎn)染48 h后，qRT-PCR檢測預測的miR-200b靶基因mRNA表達，結(jié)果見圖3，過表達miR-200b后PtenmRNA的表達量與對照組相比降低了約40%，差異顯著，而miR-200b表達量上調(diào)對Dnmt3a與Dnmt3bmRNA水平的影響并不顯著。

*表示差異顯著(P<0.05),下同圖3 miR-200b過表達對靶基因mRNA表達的影響

2.5 miR-200b過表達對乳成分合成相關信號通路關鍵基因mRNA表達的影響

圖4結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染48 h后，奶牛乳腺上皮細胞中乳成分合成相關信號通路關鍵基因Akt、Srebp1、Csn2的mRNA表達量分別上調(diào)了1.9、2.3、3.2倍，與空白對照組(Mock)和陰性對照組(Scr)相比差異極顯著。Glut1的mRNA表達量上調(diào)1.6倍，差異顯著。

圖4 miR-200b過表達對乳成分合成相關功能基因mRNA表達的影響

2.6 miR-200b過表達對奶牛乳腺上皮細胞活力與增殖的影響

轉(zhuǎn)染96 h后，CASY分析細胞活力的變化。結(jié)果如圖5A所示，與對照組相比，miR-200b過表達顯著提升了奶牛乳腺上皮細胞的活力。miR-200b對奶牛乳腺上皮細胞增殖的影響如圖5B所示，轉(zhuǎn)染96 h后，DAPI復染細胞核(藍色熒光)，EdU 標記處于增殖期即S期的細胞(紅色熒光)，DAPI染色與EdU標記圖片疊加(Merged)后S期的細胞顯示為紫色，應用Image pro-plus 6.0計算分析，結(jié)果如圖5C，miR-200b過表達組奶牛乳腺上皮細胞增殖率顯著增加。

2.7 miR-200b過表達對奶牛乳腺上皮細胞分泌β-酪蛋白、乳糖及甘油三酯的影響

轉(zhuǎn)染96 h后，培養(yǎng)液中分泌的β-酪蛋白含量檢測結(jié)果如圖6A所示，miR-200b過表達組與對照組相比，β-酪蛋白的分泌量極顯著提高；甘油三酯含量檢測結(jié)果如圖6B所示，與對照組相比，miR-200b上調(diào)后胞外甘油三酯的分泌量極顯著升高；乳糖含量檢測結(jié)果見圖6C，與對照組相比，miR-200b的過表達能極顯著促進奶牛乳腺上皮細胞乳糖的分泌。

B：EdU技術標記S期細胞圖5 miR-200b過表達對奶牛乳腺上皮細胞活力及增殖的影響

圖6 miR-200b過表達對胞外培養(yǎng)液中β-酪蛋白、乳糖及甘油三酯含量的影響

3 結(jié)論與討論

近年來，隨著生活質(zhì)量的不斷提高，人們生活水平有了很大改善，對乳品的質(zhì)量要求也不斷增加，如何進一步優(yōu)化國內(nèi)奶業(yè)乳品質(zhì)、提升乳品產(chǎn)量已成為了當下奶業(yè)科研工作者們面臨的重要問題，深入挖掘泌乳生物學調(diào)控機制對于乳品質(zhì)的提升具有重要的指導意義。miRNA作為一類非編碼的小分子RNA，同時調(diào)控多個靶mRNA，這類小分子RNA與其靶mRNA構(gòu)成了生物體內(nèi)復雜的調(diào)控網(wǎng)絡，影響著疾病的發(fā)生、細胞分化、凋亡、增殖、病毒感染以及機體發(fā)育等一系列重要的生命活動進程[13-14]，據(jù)報道，在人體中約1/3基因的表達受到miRNA調(diào)節(jié)[15]，miRNA表達發(fā)生異常通常會引起細胞調(diào)控的改變。大量的研究表明，miRNA在奶牛乳腺發(fā)育以及泌乳進程中發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用[16-20]。金晶等[8]通過small RNA測序技術挖掘了與奶牛乳腺乳成分生成調(diào)控相關的miRNA表達譜，發(fā)現(xiàn)miR-200b在高乳品質(zhì)組的表達量顯著高于低乳品質(zhì)組，本研究利用qRT-PCR進行再次驗證，結(jié)果與small RNA測序數(shù)據(jù)相符，提示在奶牛乳腺中，miR-200b的生物學功能可能與乳成分的生成以及泌乳量的調(diào)控密切相關。

miRNA功能發(fā)揮主要通過介導其靶基因的表達來實現(xiàn)，本研究通過生物信息學軟件分析，篩選出與奶牛乳腺泌乳密切相關功能基因，分別為Pten、Dnmt3a、Dnmt3b，將這3個功能基因作為miR-200b可能的靶基因進行后續(xù)的研究分析。通過在線軟件，找到miR-200b與預測靶基因Pten、Dnmt3a、Dnmt3b潛在的結(jié)合位點。其中，Pten作為腫瘤中常見的非活性蛋白，主要介導PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導通路的表達，進而參與細胞增殖、凋亡、生長及轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)[21-23]。近期有研究認為，PTEN-AKT通路能夠誘導催乳素的分泌而參與泌乳調(diào)節(jié)的啟動[24]。Wang等[25]研究也證實在奶牛乳腺上皮細胞泌乳過程中，Pten基因可靶向負調(diào)控PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導通路，影響Akt、CyclinD1、S6k1、4Ebp1、Stat5、Csn2、Srebp1、mTOR、Pparγ、Glut1的表達，進而參與細胞的生長與泌乳的調(diào)節(jié)。DNMT3a與DNMT3b作為DNA甲基化過程中重要的酶類，主要參與生物體的發(fā)育調(diào)節(jié)，已有報道表明，DNMT3a與DNMT3b能夠介導乳成分合成相關信號通路基因啟動子的甲基化來影響乳腺發(fā)育與泌乳[7]。為了驗證本研究中生物信息學預測結(jié)果，在過表達miR-200b后，檢測了細胞中其可能的靶基因Pten、Dnmt3a、Dnmt3bmRNA表達的變化。結(jié)果顯示，miR-200b上調(diào)能夠顯著抑制PtenmRNA的表達，而對Dnmt3a、Dnmt3bmRNA水平影響不顯著。由于條件的限制，未能完成miR-200b對DNMT3a與DNMT3b蛋白水平表達影響的檢測，但已有的數(shù)據(jù)表明，miR-200b能夠通過直接調(diào)控PtenmRNA的表達參與乳腺泌乳功能調(diào)節(jié)。

一些泌乳重要功能基因的表達對于乳腺泌乳能力的調(diào)節(jié)至關重要，Akt是奶牛乳腺泌乳進程中重要的應答因子，它能夠被一系列激素或生長因子所激活，在乳腺細胞增殖、乳成分合成、分泌及代謝調(diào)控中扮演著重要角色[26]。Akt介導的信號通路在Pten調(diào)節(jié)的細胞增殖、凋亡與代謝中有著重要的地位，在小鼠乳腺上皮細胞中的研究表明Akt的過表達或者Pten的缺失都能誘導乳腺細胞的迅速分裂[27]。SREBP1作為乳脂合成代謝中一個重要的固醇類調(diào)節(jié)元件，是脂肪合成相關基因轉(zhuǎn)錄的決定子，能夠調(diào)節(jié)乳脂合成關鍵酶的表達，在脂肪酸的調(diào)控和膽固醇的生成中有著至關重要的作用[28]。葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白GLUT1是乳腺上皮細胞中重要的葡萄糖轉(zhuǎn)運載體，它主要介導葡萄糖的轉(zhuǎn)運，參與調(diào)節(jié)動物乳腺乳糖的合成[29]。奶牛乳腺中β-酪蛋白在具有很強的表達活性，同時它也是牛乳中含量最高的酪蛋白。β-酪蛋白的表達是泌乳能力中乳蛋白合成與分泌的重要衡量指標，在乳腺組織中β-酪蛋白調(diào)控能夠指導靶基因的高效表達[30]。相關研究顯示，這些泌乳功能基因在Pten介導的泌乳調(diào)節(jié)過程中有著重要的作用[25]，因此，本研究分析了過表達miR-200b后這些乳合成相關信號通路關鍵基因mRNA的變化。結(jié)果顯示，miR-200b過表達能顯著增加Akt、Srebp1、Csn2、Glut1 mRNA的表達，與Wang等[25]結(jié)論相吻合，提示miR-200b可能通過介導其靶基因Pten表達的抑制進而促進泌乳相關信號通路Akt、Srebp1、Csn2、Glut1的表達。

哺乳動物體內(nèi)，乳腺是能夠?qū)Ⅲw內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為食物“奶”的特殊器官，泌乳的發(fā)生也是動物進化過程中最重要的結(jié)果之一，泌乳進程的完成主要經(jīng)歷乳腺組織的發(fā)育、乳汁合成及乳汁分泌等幾個生物學階段。泌乳細胞的活性及數(shù)量對乳腺的泌乳能力具有決定性的影響，奶牛乳腺上皮細胞活力及數(shù)量的增加能夠大大提升乳腺的泌乳能力[31]。過表達miR-200b后，本研究分析了細胞活力的變化，結(jié)果表明，miR-200b表達上調(diào)后能顯著提升奶牛乳腺上皮細胞活力。處于增殖期的細胞即S期細胞中正在復制的DNA分子能夠與EdU結(jié)合而被標記，該法也是至今監(jiān)測細胞增殖最準確的方法之一。本研究通過EdU標記分析發(fā)現(xiàn)miR-200b過表達能促進奶牛乳腺上皮細胞的增殖，研究結(jié)果與Uhlmann等[32]在乳腺癌細胞的發(fā)現(xiàn)相符合，其研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細胞中上調(diào)miR-200bc/429簇后，細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1B(p27/Kip1)的表達降低，細胞分裂周期25C基因(CDC25C)表達增加，miR-200b上調(diào)能夠促進乳腺癌細胞的增殖。在HeLa細胞中，也有報道稱miR-200b也能通過直接靶控Rho家族GTP酶3(RND3)上調(diào)細胞周期因子cyclin D1(CCND1)的表達，在細胞增殖中具有正調(diào)控作用[33]。這些研究表明，miR-200b可以通過靶控幾種不同的因子在轉(zhuǎn)錄或蛋白質(zhì)水平上參與細胞生長的調(diào)節(jié)。本研究結(jié)果顯示，miR-200b能夠負調(diào)控靶基因Pten的表達，Pten表達的缺失能夠抑制泌乳相關功能基因的表達，進而影響奶牛乳腺上皮細胞的增殖。關于奶牛乳腺中miR-200b的過表達能提高奶牛乳腺上皮細胞活力并促進其增殖的研究也為今后乳腺細胞生物學進程調(diào)控研究提供了新的參考。

牛奶是人們?nèi)粘Ｉ钪兄匾臓I養(yǎng)來源，其成分主要包括乳蛋白、乳糖及乳脂。乳腺的泌乳質(zhì)量也主要體現(xiàn)在乳汁中乳蛋白、乳脂及乳糖的含量上。在牛乳蛋白中，β-酪蛋白作為乳腺上皮細胞分泌的一種磷酸蛋白，占總酪蛋白的48%，因此人們常把β-酪蛋白的含量作為鑒定乳蛋白合成能力的重要指標[34]。在動物體內(nèi)，脂肪多數(shù)以甘油三酯的形式貯存，故甘油三酯的含量也常被用來作為衡量乳腺泌乳能力的重要指標。miR-200b過表達后，奶牛乳腺上皮細胞培養(yǎng)液中分泌的β-酪蛋白、甘油三酯及乳糖的含量均明顯增加，提示miR-200b在奶牛乳腺的泌乳生物學調(diào)控中具有重要的正調(diào)節(jié)作用，對我國奶業(yè)乳質(zhì)量改善及乳產(chǎn)量的提升具有重要的理論與生產(chǎn)指導意義。