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    不同微生物青貯劑對全株玉米青貯飼料的影響

    2019-12-04 01:40:12侯楠楠謝全喜雷春紅鹿曉慧
    中國釀造 2019年11期
    關鍵詞:發(fā)酵劑青貯飼料酵母菌

    侯楠楠,謝全喜*,雷春紅,王 梅,楊 梟,鹿曉慧,周 紅,谷 巍

    (山東寶來利來生物工程股份有限公司 山東省動物微生態(tài)制劑省級重點實驗室,山東 泰安 271000)

    青貯飼料是指利用新鮮青綠飼料及其植株上附著的乳酸菌等,在厭氧條件下發(fā)酵而成[1]。青貯飼料乳酸菌添加劑被廣泛用于改善青貯飼料品質。在不使用乳酸菌發(fā)酵劑的條件下,原料自身微生物起主要作用,往往會導致青貯飼料干物質的損失以及蛋白質的水解等,影響青貯飼料的品質[2]。在實際生產(chǎn)中,由于管理疏忽,青貯飼料滋生大量霉菌,導致青貯飼料發(fā)霉、腐敗變質,營養(yǎng)成分大量損失,因此選擇合適的發(fā)酵劑進行科學發(fā)酵對保證青貯飼料營養(yǎng)品質具有重要意義[3-4]。

    近年來,許多研究者采用多種乳酸菌發(fā)酵青貯飼料,研究表明,全株玉米中添加植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵,能夠快速降低飼料的pH值;黑麥草中添加布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri)可以提高青貯飼料的有氧穩(wěn)定性,添加鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)能夠提高青貯飼料的發(fā)酵品質[1-2]。李翠霞等[5-8]的研究表明,植物乳桿菌、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)單獨或者是組合處理全株玉米,能夠抑制發(fā)酵過程中霉菌的生長,提高全株玉米的有氧穩(wěn)定性。

    全株玉米青貯飼料營養(yǎng)豐富,適口性好,已經(jīng)成為反芻動物飼喂的主要飼料來源之一。隨著國內畜牧行業(yè)的高速發(fā)展,如何生產(chǎn)高效、優(yōu)質、安全的全株玉米青貯飼料,提高全株玉米的利用效率,已成為行業(yè)內高度關注的問題。本研究選擇兩種青貯發(fā)酵劑(A、B),比較添加不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料營養(yǎng)品質及微生物消長的影響,為全株玉米青貯發(fā)酵劑的開發(fā)探究提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 青貯發(fā)酵劑

    A、B兩種青貯發(fā)酵劑(乳酸菌、酵母菌等,活菌總數(shù)≥1.0×109CFU/g):山東寶來利來生物工程股份有限公司。

    1.1.2 材料

    全株玉米:選自吉林通化四方山青貯玉米種植基地,在玉米進入乳熟末期、蠟熟初期時收割,收割機切碎至1.5 cm左右長度。

    1.1.3 試劑

    黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)檢測試劑盒、嘔吐毒素檢測試劑盒、玉米赤霉烯酮檢測試劑盒:青島普瑞邦生物工程有限公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 儀器與設備

    KDN-103F自動定氮儀、SZC-C粗脂肪提取儀、SLQ-6粗纖維測定儀:上海纖檢儀器有限公司;HPX-9082MBE電熱恒溫培養(yǎng)箱:上海博迅實業(yè)有限公司;SW-CJ-2F(2)超凈工作臺:蘇州安泰空氣技術有限公司;F50酶標儀:帝肯(上海)貿(mào)易有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 全株玉米青貯

    試驗分為青貯發(fā)酵劑A組、青貯發(fā)酵劑B組,取5 g青貯發(fā)酵劑A溶解于2 L溫水中,均勻噴灑于1 t待青貯的全株玉米中,裝窖、壓實,鋪蓋塑料布填土封窖。青貯發(fā)酵劑B處理相同。分別在發(fā)酵第8天、10天、20天、40天取樣,取樣時A、B兩窯選擇相同位置取樣,取樣后及時封窯。

    1.3.2 全株玉米青貯飼料的感官評價

    參照地方標準DB50/T 669—2016《青貯飼料品質鑒定》的方法從嗅覺、結構、色澤三個方面對全株玉米青貯飼料進行感官評定。

    1.3.3 青貯飼料pH值的測定

    取10 g樣品于90 mL無菌生理鹽水中,攪拌均勻,直接采用玻璃電極pHS-3C型pH計測定。

    1.3.4 全株玉米青貯飼料中有益微生物含量的檢測

    乳酸菌:參照GB 4789.35—2010《食品微生物學檢驗乳酸菌檢驗》;酵母菌:參照GB 4789.15—2010《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)》。

    1.3.5 全株玉米青貯飼料中營養(yǎng)成分的檢測

    水分:參照GB/T 6435—2014《飼料中水分的測定》;粗蛋白含量:參照GB/T 6432—1994《飼料中粗蛋白測定方法》中凱氏定氮法;粗纖維含量:參照GB/T 6434—2006《飼料中粗纖維的含量測定過濾法》;粗灰分含量:參照GB/T 6438—2007《飼料中粗灰分的測定》;粗脂肪含量:參照GB/T 6433—1994《飼料粗脂肪測定方法》;中性洗滌纖維(neutral detergent fiber,NDF)含量:參照GB/T 20806—2006《飼料中中性洗滌纖維(NDF)的測定》;酸性洗滌纖維含量(acid detergent fiber,ADF):參照NY/T 1459—2007《飼料中酸性洗滌纖維的測定》;所有營養(yǎng)指標均以干物質為基礎計算測定結果??偹幔ㄒ匀樗嵊嫞┖浚簠⒄誈B/T 12456—2008《食品中總酸的測定》。

    1.3.6 全株玉米青貯飼料中限制因子的檢測

    霉菌:參照GB 4789.15—2010《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)》;揮發(fā)性鹽基氮含量:參照GB 5009.44—2003《肉與肉制品衛(wèi)生標準的分析方法》;黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON):采用酶聯(lián)免疫法測定,參照GB 17480—2008《飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯(lián)免疫吸附法》。

    1.3.7 數(shù)據(jù)處理與分析

    試驗數(shù)據(jù)用Excel軟件進行初步處理后,采用SPSS 13.0進行統(tǒng)計分析,采用One-way ANOVA進行方差分析,最小顯著差數(shù)(least significant difference,LSD)法進行組間多重比較,結果以“平均值±標準差”表示,P<0.05表示差異顯著。

    2 結果與分析

    2.1 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料感官品質的影響

    選擇發(fā)酵20 d的全株玉米青貯飼料進行感官評價,結果見表1。

    表1 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料感官品質的影響Table 1 Effect of different silage starters on sensory quality of whole crop corn silage

    由表1可知,兩種青貯發(fā)酵劑處理的全株玉米青貯飼料的氣味、質地差異均不大,均有酒香味,松軟不粘手;僅在顏色、酸味上稍有差異,等級均為優(yōu)良級,可用于飼喂各種家畜。

    2.2 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料pH值及有益微生物的影響

    全株玉米青貯飼料pH值及有益微生物的測定結果見表2。

    表2 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料pH值、乳酸菌及酵母菌的影響Table 2 Effect of different silage starters on pH,lactic acid bacteria and yeast of whole crop corn silage

    由表2可知,兩種青貯發(fā)酵劑處理的全株玉米青貯飼料的pH值均符合團體標準T/CAAA 005—2018《青貯飼料全株玉米》中一級全株玉米青貯標準(pH≤4.2)。兩組pH值差異不顯著(P>0.05),且隨著發(fā)酵時間的延長,pH值均呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢。分析原因可能是發(fā)酵內環(huán)境中乳酸菌活菌數(shù)下降,酵母菌等雜菌開始恢復生長利用了內環(huán)境中的乳酸,導致pH值升高,表明這個階段青貯飼料開始有不同程度腐敗變質現(xiàn)象產(chǎn)生[5-8]。

    兩種青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料的乳酸菌和酵母菌的影響表現(xiàn)較一致,前期乳酸菌生長迅速,酵母菌生長較緩慢,隨著發(fā)酵時間的延長乳酸菌活菌數(shù)下降,酵母菌活菌數(shù)呈先升高后降低的趨勢。分析原因可能是,發(fā)酵前期,乳酸菌作為優(yōu)勢菌與酵母菌競爭營養(yǎng)物質,且乳酸菌發(fā)酵代謝產(chǎn)物可能抑制酵母菌,導致酵母菌前期增長緩慢[7];發(fā)酵后期,營養(yǎng)物質不足,乳酸菌、酵母菌活菌數(shù)均降低。在發(fā)酵8 d時,B組乳酸菌活菌數(shù)顯著高于A組(P<0.05),而酵母菌活菌數(shù)顯著低于A組(P<0.05);發(fā)酵劑與發(fā)酵時間相互作用,發(fā)現(xiàn)發(fā)酵劑B對乳酸菌活菌數(shù)的影響更大,發(fā)酵劑A對酵母菌的影響更大。

    2.3 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料營養(yǎng)成分的影響

    有研究表明,乳酸菌的添加能夠加速青貯飼料內環(huán)境的酸化,進而抑制有害微生物的活性,降低干物質的損失[9-12]。雷趙民等[13-17]也有類似研究,苜蓿青貯添加植物乳桿菌發(fā)酵劑,能夠縮短pH的下降過程,降低蛋白質的降解,減少氨基酸態(tài)氮的產(chǎn)生。不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料營養(yǎng)成分的影響見表3~表5。

    由表3可知,當發(fā)酵8 d、40 d時,兩種發(fā)酵劑處理的全株玉米青貯飼料的水分含量差異不顯著(P>0.05),而發(fā)酵10 d、20 d時,差異顯著(P<0.05);除發(fā)酵40 d外,粗蛋白含量差異不顯著(P>0.05);粗脂肪含量差異不顯著(P>0.05)。隨著發(fā)酵時間的延長,兩種發(fā)酵劑對水分、粗蛋白、粗脂肪含量的影響也不大。

    由表4可知,除發(fā)酵40 d外,兩組總酸含量差異顯著(P<0.05),且在發(fā)酵前期(8 d、10 d),A組總酸含量高于B組,后期呈相反趨勢。這與前期發(fā)酵劑B處理的高乳酸菌含量相悖,可能與發(fā)酵劑乳酸菌的類型有關。除發(fā)酵20 d外,兩組粗灰分含量差異不顯著(P>0.05),且粗灰分的含量均較低,這可能與玉米的收割時間有關,韓建成等[18-21]研究發(fā)現(xiàn),不同收割期對玉米全株青貯粗灰分含量的影響較明顯,蠟熟期收獲的玉米青貯較乳熟期玉米青貯粗灰分含量高,這可能與玉米生長過程中營養(yǎng)物質的轉化和沉積有關。

    由表5可知,兩種發(fā)酵劑處理的全株玉米青貯飼料中性洗滌纖維(NDF)含量、酸性洗滌纖維(ADF)含量基本達到一級全株玉米青貯標準(NDF≤48%、ADF≤27%)。除發(fā)酵10 d外,兩組粗纖維含量差異不顯著(P>0.05),且在發(fā)酵前期(8 d、10 d),A組高于B組。除發(fā)酵40 d外,兩組中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量差異顯著(P<0.05),且在發(fā)酵前期(8 d、10 d),A組高于B組。分析原因可能是發(fā)酵劑B處理,乳酸菌生長迅速,能夠快速起到降解纖維素的作用;反之發(fā)酵劑A處理,乳酸菌生長相對緩慢,對纖維素的降解作用也相對緩慢[22]。

    表3 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料水分、粗蛋白及粗脂肪含量的影響Table 3 Effect of different silage starters on moisture,crude protein and crude fat contents of whole crop corn silage

    表4 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料總酸及粗灰分含量的影響Table 4 Effect of different silage starters on total acid and crude ash contents of whole crop corn silage

    表5 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料纖維含量的影響Table 5 Effect of different silage starters on fibre content of whole crop corn silage

    2.4 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料限制因子的影響

    不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料限制因子的影響見表6和表7。

    表6 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料揮發(fā)性鹽基氮及霉菌含量的影響Table 6 Effect of different silage starters on volatile base nitrogen and mold contents of whole crop corn silage

    由表6可知,兩種發(fā)酵劑處理的全株玉米青貯飼料揮發(fā)性鹽基氮含量均符合一級全株玉米青貯標準≤10%,兩組揮發(fā)性鹽基氮含量差異顯著(P<0.05),且發(fā)酵前期(8 d、10 d),A組高于B組。兩組霉菌含量均符合GB 13078—2017《飼料衛(wèi)生標準》(霉菌<4×104CFU/g)要求,隨著發(fā)酵時間的延長,霉菌的生長受到抑制。

    表7 不同青貯發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮及嘔吐毒素含量的影響Table 7 Effect of different silage starters on aflatoxin B1,zearalenone and vomitoxin contents of whole crop corn silage

    由表7可知,兩種發(fā)酵劑處理的全株玉米青貯中常見的3種毒素(黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素)含量均符合GB 13078—2017《飼料衛(wèi)生標準》要求(黃曲霉毒素B1≤20 μg/kg,玉米赤霉烯酮≤500 μg/kg,嘔吐毒素≤5 000 μg/kg)。

    3 結論

    兩種青貯發(fā)酵劑處理后,全株玉米青貯飼料均有酒香味;發(fā)酵前期(8 d、10 d)乳酸菌生長迅速,酵母菌生長相對緩慢。兩種發(fā)酵劑對全株玉米青貯飼料的pH值、水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和粗纖維含量的影響差異不大,但對總酸、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量影響差異較大,青貯發(fā)酵劑B適合短期發(fā)酵使用,而青貯發(fā)酵劑A適合長期發(fā)酵保藏使用。兩種青貯發(fā)酵劑處理的全株玉米青貯飼料中的限制因子(揮發(fā)性鹽基氮、霉菌、黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素)均符合相關標準要求。

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