蒲地藍(lán)消炎顆粒的毒性研究

侯麗麗 ，陳文云,栗榮霞，晏永新，楊彥平

(1.山西省獸藥監(jiān)察所，太原030027；2.江西省獸藥飼料監(jiān)察所，南昌330029；3.西安雨田農(nóng)業(yè)科技有限公司，西安710075；4.西安國(guó)聯(lián)質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)股份有限公司，西安710105；5.江西新世紀(jì)民星動(dòng)物保健品有限公司，南昌330096）

蒲地藍(lán)消炎片、蒲地藍(lán)消炎口服液等是目前臨床較常見(jiàn)的抗炎藥物，由蒲公英、板藍(lán)根、苦地丁、黃芩4味中藥組成，其主要成分包含黃芩苷、漢黃芩素、咖啡酸等，具有清熱解毒，抗炎消腫之功效，對(duì)金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等有較強(qiáng)的抑制作用，臨床上用于治療癤腫、腮腺炎、咽炎、扁桃體炎、淋巴腺炎等［1-3］。本課題研究的蒲地藍(lán)消炎顆粒源于人藥《部頒標(biāo)準(zhǔn)》第3冊(cè)“蒲地藍(lán)消炎片”，是由蒲公英、苦地丁、板藍(lán)根、黃芩四味藥材提取制成的復(fù)方制劑。蒲地藍(lán)消炎顆粒尚未應(yīng)用于動(dòng)物臨床，其安全性尚不清楚，基于此展開(kāi)了蒲地藍(lán)消炎顆粒的小鼠急性毒性試驗(yàn)和大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，以觀察并評(píng)價(jià)其長(zhǎng)期用藥的安全性。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 受試藥物、試劑及儀器 蒲地藍(lán)消炎顆粒，100g/袋，1.5g 生藥 /g，批號(hào)：20120205，由江西新世紀(jì)民星動(dòng)物保健品有限公司提供；ALT、AST、Bun、Crea、TP、ALB 等生化試劑盒由濟(jì)南希森美康醫(yī)用電子有限公司提供，批號(hào)：ZG8004；十萬(wàn)分之 一 電 子 分 析 天 平 （AB204-N，METTLER TLLEDO）；全自動(dòng)生化儀（日立 7100）；血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（SysmexXT-2000i）。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)ICR小鼠60只，體重18-22g，清潔級(jí) SD大鼠 80只，體重 100-120g，均雌雄各半。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于室溫20～25℃，相對(duì)濕度45%～70%條件下，分別飼喂大、小鼠全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料，自由采食，飲水。

1.2 方法

1.2.1 蒲地藍(lán)顆粒小鼠經(jīng)口最大給藥量測(cè)定［4-5］試驗(yàn)前12小時(shí)禁食不禁水，小鼠稱重，隨機(jī)分為3組，每組10只，分別灌胃蒲地藍(lán)消炎顆粒溶液（0.375g生藥 /mL、0.75g生藥 /mL、1.5g 生藥 /mL濃度），每次0.1mL/10g體重，24小時(shí)內(nèi)給藥3次，給藥后飼養(yǎng)觀察一周。

1.2.2 蒲地藍(lán)顆粒大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)［5-7］將大鼠隨機(jī)分為4組：高劑量組（60g生藥/kg），中劑量組（40g 生藥 /kg），低劑量組（20g 生藥 /kg），對(duì)照組（等容積蒸餾水）。每天上午8～10時(shí)灌胃給藥1次，給藥容積為1mL/100g體重，連續(xù)給藥4周，對(duì)照組給予等容積蒸餾水。每天觀察動(dòng)物精神狀態(tài)、行為、活動(dòng)、毛色、二便等一般體征，每周稱重1次，并依體重變化調(diào)整藥量。給藥結(jié)束后，每組取10只大鼠，禁食12小時(shí)，采血，進(jìn)行血液學(xué)、生化檢查，系統(tǒng)解剖和病理學(xué)檢查。各組剩余動(dòng)物停止給藥，觀察2周后，進(jìn)行相同指標(biāo)檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 蒲地藍(lán)消炎顆粒最大給藥量測(cè)定 最高濃度1.5g生藥/mL、每次0.1mL/10g體重、24小時(shí)內(nèi)給藥3次，給藥后連續(xù)觀察7天，小鼠全部存活，活動(dòng)正常，未見(jiàn)聳毛、耳廓蒼白或充血、突眼、步履蹣跚、肌肉癱瘓、呼吸困難、昏迷、驚厥、大小便失禁等不良反應(yīng)。體重明顯增長(zhǎng)，與對(duì)照組無(wú)顯著差異。7天后處死，大體解剖未見(jiàn)內(nèi)臟器官有異常改變。蒲地藍(lán)消炎顆粒小鼠最大給藥量為45g生藥/kg體重。

2.2 蒲地藍(lán)消炎顆粒大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)

2.2.1 動(dòng)物行為學(xué)觀察

給藥期間和停藥2周內(nèi)，各組大鼠精神、行為、活動(dòng)、毛色、二便等一般體征均未見(jiàn)異常，也未出現(xiàn)因藥物毒性而致死亡的情況。

2.2.2 體重

各給藥組，給藥4周和停藥2周后大鼠體重明顯增長(zhǎng)，經(jīng)t檢驗(yàn)，與對(duì)照組比較，各給藥組大鼠體重?zé)o明顯差異。

2.2.3 血液、生化指標(biāo)檢測(cè)

與對(duì)照組相比，給藥1個(gè)月后低劑量組HGB顯著升高（P＜0.05），停藥2周后低劑量組WBC顯著降低（P＜0.05）。高劑量組和中劑量組血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)、白細(xì)胞(WBC)及分類與對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異（見(jiàn)表1、2）。

表1 停藥4周對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響（±s，n=10）

表1 停藥4周對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響（±s，n=10）

注：與對(duì)照組比較“*”表示 P＜0.05，“**”表示 P＜0.01，下表同；

項(xiàng)目 對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組RBC（×1012/L） 7.86±1.20 7.76±0.77 8.02±0.96 7.55±0.94 HGB（g/L） 136.3±12.9 153.8±9.8* 132.7±13.2 138.5±11.5 WBC（×109/L） 7.00±0.62 7.33±0.92 6.89±0.72 7.15±0.85 PLT（×109/L） 510.6±80.5 515.8±110.2 485.5±73.2 477.7±86.2淋巴細(xì)胞（%） 0.68±0.06 0.66±0.04 0.70±0.06 0.72±0.08中性粒細(xì)胞（%） 0.24±0.07 0.25±0.09 0.21±0.08 0.20±0.06凝血時(shí)間（秒） 64.39±5.97 67.77±8.14 65.06±7.62 67.46±9.29

表2 停藥2周對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響（±s，n=5）

表2 停藥2周對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響（±s，n=5）

項(xiàng)目 對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組RBC（×1012/L） 8.04±0.43 7.86±0.68 7.88±0.88 7.78±0.86 HGB（g/L） 141.0±14.2 137.5±9.8 137.9±12.5 144.1±15.9 WBC（×109/L） 10.07±1.11 7.14±0.76* 8.72±1.10 8.91±1.06 PLT（×109/L） 600.8±105.9 640.2±117.3 589.9±111.5 564.6±101.8淋巴細(xì)胞（%） 0.81±0.08 0.75±0.07 0.67±0.04* 0.75±0.08中性粒細(xì)胞（%） 0.30±0.05 0.26±0.10 0.15±0.03* 0.22±0.07凝血時(shí)間（秒） 66.21±12.54 69.60±9.84 63.70±15.60 69.88±11.64

與對(duì)照組相比，各劑量組給藥1個(gè)月后ALT、AST、ALP、BUN、Crea、T-Bili、TP、Alb、GLU、T-CHO均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。與對(duì)照組比，停藥兩周后中劑量組血清ALP顯著增加（P＜0.05），而低劑量組和高劑量組ALP、各劑量組ALT、AST、BUN、Crea、T-Bili、TP、Alb、GLU、T-CHO均無(wú)顯著性差異。（見(jiàn)表3、4）。

表3 給藥4周對(duì)血液生化指標(biāo)的影響（±s，n=10）

表3 給藥4周對(duì)血液生化指標(biāo)的影響（±s，n=10）

項(xiàng)目 對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組ALT（u/L） 49.3±7.3 51.6±7.3 47.3±9.3 46.96±11.4 AST（u/L） 166.5±19.8 170.8±26.3 156.8±16.7 188.3±22.8 ALP（u/L） 185.9±57.8 166.4±63.0 160.1±47.9 190.1±61.4 BUN（mmol/L） 9.5±2.5 10.1±3.7 9.4±3.4 10.1±3.0 Crea（umol/L） 98.5±14.2 103.0±15.8 96.5±16.8 92.3±13.5 T-Bili（umol/L） 1.79±0.30 1.75±0.34 1.86±0.32 1.80±0.36 TP（g/L） 80.0±7.8 77.9±7.5 81.8±7.8 77.6±9.1 Alb（g/L） 40.4±3.7 38.8±3.5 38.2±5.3 41.4±6.1 Glu（mmol/L） 4.89±0.80 4.67±0.93 4.96±0.87 4.66±0.93 T-CHO(mmol/L) 4.29±0.89 4.14±1.05 3.77±1.06 3.82±1.09

表4 蒲地藍(lán)消炎顆粒停藥2周對(duì)血液生化指標(biāo)的影響（±s，n=5）

項(xiàng)目 對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組ALT（u/L） 52.0±9.5 46.6±10.6 51.5±8.0 56.7±8.4 AST（u/L） 136.4±15.9 149.8±23.8 146.3±17.4 145.8±22.0 ALP（u/L） 178.5±52.0 170.5±62.72 16.7±37.1* 193.7±56.5 BUN（mmol/L） 8.8±2.0 9.0±2.4 9.4±2.6 8.2±2.6 Crea（umol/L） 108.2±22.0 103.4±11.8 106.0±23.4 104.9±26.3 T-Bili（umol/L） 1.86±0.40 1.76±0.21 1.70±0.21 1.93±0.49 TP（g/L） 80.1±6.8 78.9±7.5 83.0±7.8 78.7±6.7 Alb（g/L） 39.0±7.4 40.3±5.7 37.9±7.9 39.3±6.5 Glu（mmol/L） 4.76±0.97 4.42±0.51 4.53±1.00 4.46±1.11 T-CHO(mmol/L) 2.55±0.96 2.55±0.63 2.05±0.58 2.05±0.91

2.2.4 系統(tǒng)解剖和病理組織學(xué)

進(jìn)行系統(tǒng)解剖發(fā)現(xiàn)，給藥4周后與停藥2周后對(duì)照組和各劑量組動(dòng)物臟器均無(wú)異常變化。對(duì)各組SD大鼠心、肝、脾、肺、腎進(jìn)行稱重，計(jì)算臟器系數(shù)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，各劑量組臟器系數(shù)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）（見(jiàn)表 5、6）；此外，對(duì)各組SD大鼠心、肝、脾、肺、腎進(jìn)行制作石蠟切片，觀察其形態(tài)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，各劑量組動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎未見(jiàn)明顯的與藥物有因果關(guān)系的病理性損害傷。

表5 給藥4周對(duì)臟器指數(shù)的影響（±s，n=10）

表5 給藥4周對(duì)臟器指數(shù)的影響（±s，n=10）

項(xiàng)目 空白對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組心0.324±0.022 0.316±0.043 0.338±0.028 0.325±0.036肝2.912±0.175 3.069±0.302 3.087±0.245 2.949±0.334脾0.319±0.030 0.312±0.031 0.323±0.032 0.297±0.046肺0.526±0.043 0.513±0.103 0.540±0.090 0.468±0.091腎0.653±0.109 0.685±0.133 0.697±0.067 0.712±0.138

表6 給藥2周對(duì)臟器指數(shù)的影響（±s，n=5）

表6 給藥2周對(duì)臟器指數(shù)的影響（±s，n=5）

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3 討論與小結(jié)

急性毒性試驗(yàn)是一次大劑量給藥后，對(duì)動(dòng)物出現(xiàn)的毒性反應(yīng)和死亡情況的觀察，急性毒性試驗(yàn)可以測(cè)定引起急性中毒的劑量，揭示在藥物中毒過(guò)程中所出現(xiàn)的毒性反應(yīng)和可能的靶器官。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究是新藥安全性評(píng)價(jià)的重要研究?jī)?nèi)容，它為臨床安全用藥的劑量設(shè)置提供參考依據(jù)，為臨床毒副反應(yīng)的監(jiān)護(hù)和生理生化指標(biāo)的監(jiān)測(cè)提供依據(jù)。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)動(dòng)物因連續(xù)給藥產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，包括毒性反應(yīng)的性質(zhì)和程度，劑量與毒性效應(yīng)的關(guān)系、可逆性等；推測(cè)藥物的毒性反應(yīng)靶器官；觀察動(dòng)物的耐受性，無(wú)毒性反應(yīng)的安全劑量，毒性反應(yīng)劑量和安全范圍；觀察停藥后毒性反應(yīng)的恢復(fù)情況等［5、8、9］。 由此可見(jiàn)，長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)在藥物安全性評(píng)價(jià)中具有極其重要的作用，是新藥評(píng)價(jià)不可缺少的研究資料。

本研究發(fā)現(xiàn)，蒲地藍(lán)消炎顆粒急性毒性試驗(yàn)測(cè)得最大給藥量相當(dāng)生藥45g/kg。此外，長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，各組動(dòng)物均未出現(xiàn)任何與藥物有因果關(guān)系的毒性反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。各給藥組動(dòng)物的血液學(xué)、生化指標(biāo)和病理學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果表明，除小劑量WBC、淋巴細(xì)胞分類等個(gè)別指標(biāo)與對(duì)照組有顯著差異外，其余與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異，故未發(fā)現(xiàn)蒲地藍(lán)消炎顆粒明顯的長(zhǎng)期毒性。試驗(yàn)結(jié)果表明，蒲地藍(lán)消炎顆粒安全范圍大，臨床使用具有較高的安全性。