高效液相色譜法測定石岐乳鴿中氟喹諾酮類藥物殘留

馬世柱 陳楠 黎小鵬 周嘉誠 梁錦填 高文彬 林俊杰

摘要 研究了石岐乳鴿中環(huán)丙沙星、達氟沙星、沙拉沙星和恩諾沙星4種氟喹諾酮類藥物殘留量的高效液相色譜測定方法。采用磷酸緩沖液提取，水飽和正己烷除脂，C18固相萃取小柱凈化分離，LC-FLD檢測器檢測。結果表明，氟喹諾酮類藥在15 min內獲得良好的分離，線性相關系數(shù)r2為0.999 5～0.999 6，檢測限可達0.02 mg/kg，回收率范圍為74.2%～93.2%。該方法凈化效果良好，操作簡便。

關鍵詞 高效液相色譜法；石岐乳鴿；氟喹諾酮類藥物

中圖分類號 O657.7+2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）11-0241-02

Abstract A HPLC method for the determination of 4 kinds of fluoroquinolones in Shiqi pigeons such as ciprofloxacin，danofloxacin，sarafloxacin and enrofloxacin was studied，extracting by phosphoric acid buffer solution，degreasing by water saturated hexane，purifing and separating by C18 solid phase extraction column，detecting by LC-FLD detector. The results showed that the fluoroquinolones were separated well in 15 min，the linear corr-elation coefficient r2 was 0.999 5-0.999 6，the detection limit was 0.02 mg/kg，and the recovery rate was 74.2%-93.2%.This method have good purifi-cation effect and simple operation.

Key words HPLC；Shiqi pigeon；fluoroquinolones

石岐乳鴿是中山市著名特色小吃，為20世紀30年代后期中山市先后從日本、澳大利亞引進的欽麻鴿和澳洲地鴿與本地優(yōu)良鴿種雜交而獲得的優(yōu)良品種。石岐乳鴿在孵化后飼養(yǎng)22～25 d，體重達600～700 g即可食用。因其羽翼未豐，故名乳鴿[1]。石岐乳鴿因具有體形大、胸肉厚、肌肉飽滿、肉質嫩滑爽口的特點而飲譽廣東省以及港澳市場。

氟喹諾酮類藥物（Fluoroquinolones，F(xiàn)QNS）是新一代廣譜全合成抗菌素，高效低毒，價格低廉，少量使用還具有一定的促生長作用[2]，近年來逐漸在預防和治療畜禽及魚類疾病中廣泛應用。但是該類藥物在動物體內代謝緩慢，過量或不當使用易導致細菌耐藥性問題，并對中樞神經系統(tǒng)造成不良反應[3]。本方法采用水飽和正己烷進行除脂，回收效果良好，能高效準確檢測石岐乳鴿中所含氟喹諾酮類藥物的殘留[4-5]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀，配Agilent 1260 FLD檢測器；百分之一電子天平（CP2102，Ohaus）；高速分散均質機（T-18 digital，IKA）；poxwar漩渦混合器（TZL-5009，蘇州珀西瓦爾實驗設備有限公司）；臺式冷凍高速離心機（A2316R，上海安戈儀器有限公司）；固相萃取裝置（天津奧特賽思儀器有限公司）；多功能超純水系統(tǒng)（Spring-S20，廈門銳思捷科學儀器有限公司）；pH計（STARTER 3100，Ohaus）。

前處理所用試劑磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、正己烷均為分析純，廣州化學試劑廠生產；流動相用85%磷酸，為色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司生產；三乙胺，阿拉丁試劑；C18固相萃取小柱（Agilent Bond Elut 100 mg，3 mL）、0.22 μm有機濾膜，天津津騰實驗室設備有限公司生產。標準品由農業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所生產，濃度均為100 mg/L，使用前用甲醇將其稀釋成所需濃度的混合標準溶液。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品提取與凈化。稱取2.0 g搗碎的乳鴿試樣，置于30 mL勻漿杯中，加磷酸鹽緩沖溶液10 mL，5 000 r/min勻漿5 min。勻漿液轉移到離心管中，中速振蕩5 min，5 000 r/min離心5 min后取其上清液待用。用磷酸鹽緩沖溶液10 mL清洗刀頭及勻漿杯，轉入離心管，混合均勻，中速振蕩5 min，5 000 r/min離心5 min，合并2次上清液，加入15 mL水飽和正己烷混合均勻，待用[6]。

固相萃取柱依次用甲醇、磷酸鹽緩沖溶液各2 mL預沖洗。取上清液5.0 mL過柱，用1 mL水淋洗，擠干。用1.0 mL流動相洗脫，擠干，收集洗脫液，經濾膜過濾后作為試樣溶液，待檢測。

1.2.2 色譜條件。色譜柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，粒徑5 μm；流動相：0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（V∶V=82∶18），使用前經微孔濾膜過濾；流速1 mL/min；檢測波長：激發(fā)波長280 nm；發(fā)射波長450 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL；定量方法：外標法。

2 結果與分析

2.1 氟喹諾酮類藥物標準色譜圖

由于待測氟喹諾酮類藥物極性較低，故選擇C18柱（250 mm×4.6 mm）作為分析色譜柱，結合藥物結構和化學性質，按照上述色譜條件進行測定，得到氟喹諾酮類藥物標準色譜圖（圖1）。結果表明，氟喹諾酮類藥物在15 min內可實現(xiàn)良好分離，且峰形對稱，滿足檢測要求。

2.2 標準曲線、線性范圍及檢出限

將不含待測藥物的鴿肉空白基質溶液稀釋標準品分別配制成為50、75、100、500 μg/kg的氟喹諾酮藥物混合標準溶液，過0.45 μm濾膜后，按上述色譜條件進行測定。

2.3 回收率和精密度

在上述色譜條件下，采用標準加入法，在不含氟喹諾酮藥物的空白鴿肉樣品中，添加50～500 μg/kg氟喹諾酮藥物混合標準溶液進行加標回收試驗，測定加標回收率和試驗精密度。結果表明，氟喹諾酮藥物的加標回收率在74.9%～93.2%之間，其相對標準偏差在3.2%～11.8%之間（表1）。表明該方法具有較好的回收率和精密度，滿足測定要求。

3 結論

本文采用高效液相色譜法測定石岐乳鴿中氟喹諾酮藥物殘留量，應用溶劑提取，固相萃取凈化，濃縮定容后即可進行測定。該方法前處理簡單，試驗精密度和準確度均滿足要求，適用于氟喹諾酮藥物殘留的快速測定，可進一步在更大范圍的樣品測定中推廣應用。

4 參考文獻

[1] 周艷明，李湘寧，胡睿. 無公害蔬菜中39種農藥的氣相色譜-質譜多殘留檢測[J]. 江蘇農業(yè)科學，2008（2）：241-244.

[2] 李鵬，張子德，王琦，等.氟喹諾酮藥物殘留降解的研究[J].食品科學，2008（4）：86-88.

[3] 戴自英.實用抗菌藥物學[M].上海：科學技術出版社，1992：268-276.

[4] 陳新謙，金有豫.新編藥物學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：101-103.

[5] 孫曼琴.喹諾酮類抗菌藥的安全性評價[C]//全國抗感染藥物臨床評價學術研討會論文集.北京：中華醫(yī)學會臨床藥物評價專家委員會，1996：67.

[6] 溫賢有，陳堅文，李擁軍，等.動物性食品中藥物殘留分布規(guī)律[J].雜草科學，2010（1）：36-38.