HBsAg陽性母親新生兒乙肝疫苗應(yīng)答的影響因素研究

陳 霞，王玉平

(連云港市東方醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇 連云港 222002)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是世界公共衛(wèi)生問題。目前阻斷HBV母嬰傳播最有效的方法是新生兒接種乙肝疫苗，但國內(nèi)HBsAg陽性孕產(chǎn)婦的12月齡小兒乙肝疫苗無應(yīng)答或弱應(yīng)答率仍達到27.4%[1]。王靜等[2]研究認為，乙肝疫苗接種后弱/無應(yīng)答的原因是多方面的，其中母體HBsAg的陽性率有重要影響。本次研究通過了解HBsAg陽性孕產(chǎn)婦的新生兒HBV血清學(xué)模式，探討其與乙肝疫苗無/弱應(yīng)答的關(guān)系，為臨床提供理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

選取于2015年1月至2016年12月到連云港市東方醫(yī)院就診的HBsAg陽性孕產(chǎn)婦及其足月新生兒100對，入選標準：①年齡18～35周歲，民族不限；②單胎妊娠，母體HBsAg(+)，同時HBsAb、HBcAg、HBcAb、HBeAg均為(-)；③了解研究內(nèi)容并自愿簽署知情同意書。排除標準：①合并肝硬化、急慢性肝炎、膽道疾病的孕婦；②人類免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、梅毒等其他傳染病檢查陽性；③合并胎位異常、胎兒宮內(nèi)窘迫等妊娠并發(fā)癥。根據(jù)我國疫苗接種程序，要求新生兒接種乙肝疫苗并隨訪至12月齡，同時采集新生兒出生后24h內(nèi)主動免疫、被動免疫前股靜脈非抗凝血3mL和抗凝血3mL，采集孕產(chǎn)婦孕期肘靜脈血3mL，所有血液樣本均置于-80℃冰箱保存。本次研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會批準，所有患兒家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1一般資料

采用問卷調(diào)查的方式收集孕婦和胎兒的人口學(xué)資料，包括年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、孕次、產(chǎn)次、孕周、新生兒性別、體重等，從入院即開始采用預(yù)先設(shè)計的信息采集表收集資料，有重要信息缺失的孕婦予以剔除。

1.2.2 HBV血清標志物檢測

新生兒出生后24h采集新生兒外周血，采集孕婦的外周血，隨訪至12月齡采集嬰兒外周血，使用化學(xué)發(fā)光免疫試驗(CLIA)法檢測所有采集血液的HBV血清標志物，包括HBsAg、抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe、HBeAg水平。使用德國羅氏診斷有限公司的HBV血清標志物(HBVM)試劑盒，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.3 Toll樣受體3蛋白表達量和免疫細胞水平檢測

采用流式細胞術(shù)檢測新生兒及12月齡小兒的外周血單個核細胞Toll樣受體3(TLR3)蛋白表達量，使用美國Santa Cruz公司的TLR3鼠抗人抗體和羊抗鼠IgG-IFTC。使用流式細胞術(shù)檢測新生兒及12月齡小兒外周血CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞、樹突狀細胞(DCs)、CD19+B淋巴細胞等。使用美國eBioxcience公司的單克隆抗體。所得細胞數(shù)量為相對數(shù)量，使用百分數(shù)(%)表示。

1.2.4判定標準

新生兒乙肝疫苗免疫應(yīng)答判定標準：抗-HBs≥100mIU/mL為強應(yīng)答，<100mIU/mL為弱應(yīng)答，0mIU/mL為無應(yīng)答。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1一般情況

入組孕婦和新生兒年齡、孕周、身長、體重等方面資料見表1。

指標數(shù)值孕婦(n=100) 年齡(歲)28.59±4.43 BMI(kg/m2)21.84±2.51 孕次*1.50(1～3) 產(chǎn)次*1(1～2)新生兒(n=100) 孕齡(w)38.18±1.24 性別(男/女)64(64.00)/36(36.00) 體重(kg)5.83±1.27

注：*均值(最小值～最大值)。

2.2 HBV血清學(xué)模式

100對HBsAg陽性孕產(chǎn)婦及新生兒HBV血清學(xué)模式共有15種，100例孕產(chǎn)婦中HBV血清學(xué)模式以模式1(單純HBsAg+)多見(47.00%)；100例新生兒的血清學(xué)模式以模式13(病毒標記物全陰)多見(50.00%)，見表2。

表2 孕婦及新生兒血清學(xué)模式[n(%)]

(轉(zhuǎn)下表)

(續(xù)上表)

模式HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc孕產(chǎn)婦(n=100)新生兒(n=100)6+-+-+3(3.00)-7+++--1(1.00)-8+-+++1(1.00)1(1.00)9--++--26(26.00)10--+---3(3.00)11---+--2(2.00)12-+----2(2.00)13------50(50.00)

2.3新生兒乙肝疫苗免疫應(yīng)答與HBV血清學(xué)模式的關(guān)系

新生兒1、2、9、13四種模式下，抗-HBs水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=8.807，P=0.003)，模式9新生兒抗-HBs水平明顯高于其他三種(t值分別為5.012、7.848、8.226，均P<0.05)；四種模式下，新生兒乙肝疫苗無應(yīng)答率為20.22%(18/89)，弱應(yīng)答率為6.74%(6/89)，強應(yīng)答率為73.03%(65/89)，各應(yīng)答率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(H=6.782，P<0.05)，其中強應(yīng)答率高于無應(yīng)答率和弱應(yīng)答率(H值分別為4.467、8.591，均P<0.05)，而無應(yīng)答率和弱應(yīng)答率組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(H=2.854，P>0.05)。四種血清學(xué)模式外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)TLR3蛋白平均熒光強度(%)組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 新生兒乙肝疫苗免疫應(yīng)答與HBV血清學(xué)模式的關(guān)系

注：*M(QR)。

2.4新生兒免疫細胞數(shù)量比較

新生兒外周血免疫細胞數(shù)量在不同血清學(xué)模式之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；1、2、9、13模式新生兒外周血CD4+T淋巴細胞百分比高于CD8+T淋巴細胞百分比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表4。

模式例數(shù)(n)CD4+T淋巴細胞(%)CD8+T淋巴細胞(%)tP1441.21±10.5116.02±5.206.6920.0032938.27±15.2016.87±7.155.0470.01492644.96±9.1716.32±6.018.937<0.001135040.12±11.6319.41±6.5710.563<0.001F3.1782.093P0.2850.496

3討論

3.1 HBV血清學(xué)模式

HBV血清學(xué)模式多式多樣，能夠反應(yīng)機體HBV的感染狀況。本次研究結(jié)果表明，HBsAg陽性孕產(chǎn)婦的HBV血清學(xué)模式主要為模式1，即單純“HBsAg+”模式，占47.00%。這可能與HBsAg陽性孕產(chǎn)婦接受抗病毒治療有關(guān)。傳染性較強的“大三陽”、“小三陽”模式較為少見。這一結(jié)果可能與近年來疾病知識普及和宣傳力度加大，HBsAg陽性孕產(chǎn)婦對自身疾病意識有效增強，阻斷母嬰傳播的意識提高有關(guān)[3-4]。本次研究結(jié)果顯示，HBV血清學(xué)模式為“HBeAg+、抗-HBe+”的新生兒比例較高，可能由于抗-HBe多在HBeAg轉(zhuǎn)陰后檢出，而且孕產(chǎn)婦HBeAg和抗-HBe可通過胎盤傳遞給新生兒，誘導(dǎo)新生兒HBV感染向康復(fù)的方向發(fā)展，這一研究結(jié)果與張芳等[5]的研究結(jié)果一致。

3.2乙肝疫苗免疫應(yīng)答

本次研究結(jié)果表明，新生兒乙肝疫苗無應(yīng)答率為20.22%，弱應(yīng)答率為6.74%，明顯高于我國一般人群。這一結(jié)果可能與新生兒長期處于孕產(chǎn)婦HBV感染的微生態(tài)環(huán)境導(dǎo)致自身免疫功能不同于一般人群有關(guān)，而研究結(jié)果與國內(nèi)彭忠秀等[6]的研究結(jié)果較為接近。HBV的血清學(xué)模式一方面能夠反應(yīng)機體HBV感染狀況；另一方面，能夠有效反應(yīng)機體對HBV產(chǎn)生免疫應(yīng)答的能力[7-8]。本次研究結(jié)果表明，不同HBV血清學(xué)模式的新生兒乙肝疫苗無/弱應(yīng)答率不同，其中血清學(xué)模式為“HBeAg+、抗-HBe+”的新生兒乙肝疫苗無/弱應(yīng)答率較低，提示新生兒不同血清學(xué)模式可能影響機體免疫功能，臨床上對高危新生兒應(yīng)注意鑒別，以提高乙肝疫苗免疫應(yīng)答能力。

3.3 TLR3

TLR3是一種能夠特異性識別HBV復(fù)制中間產(chǎn)物的蛋白質(zhì)，能夠促進T淋巴細胞和細胞因子的表達，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[9]。本次研究結(jié)果表明新生兒四種主要血清學(xué)模式下PBMC TLR3蛋白表達量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但均高于正常新生兒，提示新生兒體內(nèi)由于受到HBV 病毒感染后可能啟動相應(yīng)的免疫反應(yīng)。同時，各模式新生兒外周血CD4+T淋巴細胞高于CD8+T淋巴細胞，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，而CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞與機體TLR3信號通路相關(guān)。由于CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞是機體主要免疫細胞，提示新生兒不同HBV血清學(xué)模式下，清除病毒能力不同。

3.4結(jié)論

綜上所述，HBsAg陽性孕產(chǎn)婦的HBV血清學(xué)模式與新生兒的HBV血清學(xué)模式相關(guān)，血清學(xué)模式為“HBeAg+、抗-HBe+”的新生兒乙肝疫苗無/弱應(yīng)答率較低。應(yīng)進一步擴大樣本，進行深入探討新生兒乙肝疫苗免疫應(yīng)答能力的影響因素。