復(fù)方克林霉素磷酸酯凝膠的制備及質(zhì)量控制

戴薇薇

摘 要：本實(shí)驗(yàn)研究復(fù)方克林霉素磷酸酯凝膠的制備方法并建立反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方克林霉素磷酸酯凝膠中維A酸的含量。方法：采用Inertsil ODS-3液相色譜柱，甲醇-水-冰醋酸（75∶25：0.5），檢測(cè)波長(zhǎng)為346nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。維A酸在5～25ug·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。維A酸平均回收率為99.3%。結(jié)論：本制劑穩(wěn)定、可靠，測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：乳膏；制備；測(cè)定

維A酸是體內(nèi)維生素A的代謝中間產(chǎn)物，主要影響骨的生長(zhǎng)和促進(jìn)上皮細(xì)胞增生、分化、角質(zhì)溶解等代謝作用。維A酸用于治療尋常痤瘡、銀屑病、毛發(fā)紅糠疹、毛囊角化病、鱗狀細(xì)胞癌及黑色素瘤等疾病。復(fù)方克林霉素磷酸酯凝膠主要用于痤瘡。本實(shí)驗(yàn)研究復(fù)方克林霉素磷酸酯凝膠的制備方法并建立反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方克林霉素磷酸酯凝膠中維A酸的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：百靈LA114型電子天平（常熟市百靈天平儀器有限公司）；長(zhǎng)城獅鼎SHB-III型臺(tái)式循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；美國(guó)澤拉布Super超越系列全觸屏超純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）；青島盛瀚色譜柱溫箱（青島盛瀚色譜技術(shù)有限公司）；CH3030CH3030超級(jí)恒溫油槽（上海平軒科學(xué)儀器有限公司）；600220液相保護(hù)柱（天津琛航科苑科技發(fā)展有限公司）；蘭博OV3000大容量柱溫箱（天津市蘭博實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司）；紫外分光光度計(jì)（尤尼柯（上海）儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：Inertsil ODS-3液相色譜柱（上海卓好實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）。

1.3 對(duì)照品：維A酸 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑及輔料：磷酸氫二鈉（上海玻爾化學(xué)試劑有限公司）、甲醇（上海玻爾化學(xué)試劑有限公司）、冰醋酸（上海玻爾化學(xué)試劑有限公司）、乙腈（上海玻爾化學(xué)試劑有限公司）、三乙胺（上海玻爾化學(xué)試劑有限公司）、磷酸（上海玻爾化學(xué)試劑有限公司）。三乙醇胺（陜西圣瑞醫(yī)藥科技有限公司）、甘油（陜西圣瑞醫(yī)藥科技有限公司）、維A酸（陜西圣瑞醫(yī)藥科技有限公司）、維生素E（江蘇科鼐生物制品有限公司）。

2 制備方法

2.1 處方

克林霉素磷酸酯、三乙醇胺、甘油、維A酸、維生素E等。

2.2 制備

復(fù)方克林霉素磷酸酯凝膠的制備：取克林霉素磷酸酯和維A酸溶解后，加三乙醇胺、甘油、維生素E等混合均勻，分裝，即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為微黃色透明半固體凝膠。符合《中國(guó)藥典》2015年版對(duì)凝膠的要求。

3.2 含量測(cè)定

3.2.1 流動(dòng)相的選擇

分別考察甲醇-水-冰醋酸（75∶25：0.5）；0.01mol/L磷酸氫二鈉-磷酸緩沖液（pH=2.2）-水（80：20）；甲醇-水-冰醋酸（75∶25：0.5）；乙腈-水（體積比為65∶35）；甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺）；乙腈-0.2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）磷酸（體積比25：75）；0.01mol/L磷酸氫二鈉-磷酸緩沖液（pH=2.2）-水（50：50）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-水-冰醋酸（75∶25：0.5）；為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-水-冰醋酸（75∶25：0.5）為流動(dòng)相。

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-7]。流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸（75∶25：0.5），檢測(cè)波長(zhǎng)：346nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按維A酸峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

3.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取維A酸對(duì)照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含10ug的溶液，即得。

3.2.3 供試品溶液的制備

取適量供試品精密稱定，置具小燒杯中，精密加入異丙醇10mL，用甲醇轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中并稀釋定容，超聲處理5分鐘，放冷，濾過(guò)。取續(xù)濾液，即得。

3.2.4 專屬性試驗(yàn)

依照處方取克林霉素磷酸酯、三乙醇胺、甘油、維生素E等，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在維A酸出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒(méi)有干擾，表明本方法專屬性良好。

3.2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取維A酸對(duì)照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為10ug·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.91%，表明本方法精密度良好。

3.2.6 對(duì)照品的線性考察

精密稱取維A酸對(duì)照品5mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照3.2.2項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，維A酸在5～25μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.3 微生物限度檢查

按照《中國(guó)藥典》2015年版附錄所載方法測(cè)定，結(jié)果符合規(guī)定。

4 討論

近來(lái)凝膠劑引起了藥學(xué)人員的極大關(guān)注，其使藥物緩慢釋放，具有長(zhǎng)效、減低不良反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。凝膠制劑，前景十分廣闊。本制劑穩(wěn)定、可靠，符合中國(guó)藥典相關(guān)規(guī)定。測(cè)定復(fù)方克林霉素磷酸酯凝膠三批樣品中維A酸的含量，分別為標(biāo)示量的百分之九十八點(diǎn)九、百分之九十九點(diǎn)八、百分之一百點(diǎn)一。

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