大黃與偽品大黃的鑒定方法探究

何雪梅

摘要 目的：探討大黃與偽品大黃的鑒定方法。方法：真品和偽品各25份，分別對實驗樣本進(jìn)行性狀鑒定、顯微鑒定、熒光試驗鑒定和薄層色譜鑒定，對比4種鑒定方法的鑒定準(zhǔn)確率。結(jié)果：顯微鑒定、熒光試驗鑒定和薄層色譜鑒定方法準(zhǔn)確率均明顯高于性狀鑒定（P<0.05）。結(jié)論：顯微鑒定、熒光試驗鑒定和薄層色譜鑒定均為大黃和偽品大黃的有效鑒定方法，性狀鑒定方便、省時，但準(zhǔn)確率較低。

關(guān)鍵詞 大黃；偽品大黃；鑒定方法；鑒定準(zhǔn)確率

資料與方法

實驗樣本：大黃50份，真品和偽品各25份，樣本種類、采集地、數(shù)量，見表l。

方法：采用的鑒定方法包括性狀鑒定、顯微鑒定、熒光試驗（理化鑒定）、薄層色譜鑒定。①性狀鑒定：觀察樣本的外形，測量樣本的長度，將樣本橫切開，觀察橫切面的顏色，再將根莖髓部起開，觀察內(nèi)部情況，嗅聞氣味，咀嚼。②顯微鑒定：使用顯微成像系統(tǒng)（日本OLYMPUS）進(jìn)行顯微觀察，先將樣品橫切，觀察橫切面情況，再將樣品研成粉末，使用水合氯醛試液透化后，放置在顯微鏡下觀察。③熒光試驗：將樣品研成粉末，精確稱量0.2 g，置于干凈的容器中，向容器中加入2 mL甲醇，加入10 min，放置在常規(guī)室溫中冷卻后，取10 uL上清液點于濾紙上，使用45%乙醇展開，晾干后，放置10 min，在365nm的波長紫外光燈下進(jìn)行觀察。④薄層色譜鑒定：精確稱量正品大黃、偽品大黃粉末各lg，放置在潔凈容器中，向容器中加入20 mL甲醇浸泡樣品th，過濾，取5 mL濾液，蒸干，保留殘渣。加水10 mL溶解殘渣，再加入l mL鹽酸，置于水浴箱中，60℃，30 min，常規(guī)室溫中冷卻。將樣本分為2份，每份均使用乙醚進(jìn)行萃取，合并兩側(cè)所得乙醚液，蒸干后，向殘渣中加入氯仿進(jìn)行溶解，總?cè)莘e為l mL，作為供試品溶液。取蘆薈大黃素和大黃酸作為對照品，向?qū)φ掌分屑蛹状?，制作成對照品溶液（每l mL含lmg對照品），精確稱取12 g硅膠H，置于研缽中，再向研缽中加入42 mL 0.3%羥甲基纖維素鈉溶液，充分研磨至糊狀，置于面積為20 cm×20 cm的干凈玻璃板上，使用潔凈的工具涂勻，使其厚度保持在300 um左右，水平放置，常規(guī)室溫中晾干，經(jīng)105℃活化，時間30mm，置于干燥器皿中，制作成硅膠H-0.3%羥甲基纖維素鈉板待用。取對照品溶液和供試品溶液5uL，點在同一個含有0.3%羥甲基纖維素鈉硅膠H薄層板上，以20：25：5：2的比例向薄層板上滴加環(huán)己烷、醋酸乙酯、甲醇、醋酸作為展開劑，取出后晾干，在365 nm的波長紫外光燈下進(jìn)行觀察。

觀察指標(biāo)：對比性狀鑒定、顯微鑒定、熒光試驗、薄層色譜鑒定4種鑒定方法的鑒定結(jié)果。

統(tǒng)計學(xué)方法：使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS18.0建立數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析模型，計數(shù)資料的描述形式為百分率（%），差異檢驗采用X2，P< 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

性狀鑒定正品、偽品大黃判定標(biāo)準(zhǔn)：正品大黃大量為圓柱形、圓柱形或馬蹄形，長度3 ～7 cm，表面呈棕黃色，有白色網(wǎng)狀紋理，斷面呈黃棕色，根莖髓部有異形維管束（星點），并有層環(huán)紋形成。有清香氣，味苦澀，咀嚼粘牙，有沙粒感，能將舌苔染成黃色，唾液也為黃色。偽品大黃形狀不規(guī)則，多為扭曲狀，長度多在5～13 cm，不如正品大黃粗壯，表明顏色較深，多為黃褐色，橫斷面為淺黃色，內(nèi)部無星點，無清香氣味，味苦。

顯微鑒定正品、偽品大黃判定標(biāo)準(zhǔn)：正品大黃根莖橫切面木栓層、皮層大多已去除，韌皮部射線較平直，能夠容下多列細(xì)胞，內(nèi)部有棕色物質(zhì)，層環(huán)明顯，木質(zhì)部導(dǎo)管非木化，木質(zhì)導(dǎo)管類圓，髓部寬廣，有星點分布，薄壁細(xì)胞內(nèi)可見淀粉粒和草酸鈣簇晶。偽品大黃橫切面偶爾可見殘存的木栓層，射線較直和較窄，能容下l列細(xì)胞，環(huán)層不明顯，髓部無星點，薄壁細(xì)胞內(nèi)有較少的淀粉粒和草酸鈣簇晶。

熒光試驗正品、偽品大黃判定標(biāo)準(zhǔn)：正品大黃有棕色至棕紅色熒光，偽品大黃呈亮藍(lán)色和紫色熒光。

薄層色譜鑒定正品、偽品大黃判定標(biāo)準(zhǔn)：在365 nm波長的紫外光燈下觀察，正品大黃可見蘆薈大黃素和大黃酸，有橙紅色斑點和2～3個藍(lán)紫色熒光斑點，偽品大黃不含有蘆薈大黃素、大黃酸兩種代表性物質(zhì)，無熒光斑點。

結(jié)果

4種鑒定方法中，薄層色譜的鑒定準(zhǔn)確率最高，與顯微鑒定結(jié)果和熒光試驗鑒定結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），3種鑒定方法的鑒定準(zhǔn)確率均明顯高于性狀鑒定，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

討論

2010版《藥典》中收載蓼科植物唐古特大黃、掌葉大黃或藥用大黃的干燥根及根莖為正品大黃，除上述3種品種外，其余河套大黃、天山大黃的干燥根和根莖均被稱為偽品大黃[1]?，F(xiàn)代藥理研究證實，大黃具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝利膽、抗炎等作用。如國內(nèi)研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)，大黃能夠通過3種作用機(jī)制發(fā)揮調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用，一是能夠?qū)?nèi)毒素誘生巨噬細(xì)胞的分泌功能產(chǎn)生影響[2]。二是大黃中的大黃素能夠?qū)?xì)胞炎性因子白介素的表達(dá)產(chǎn)生抑制作用，保護(hù)血管內(nèi)膜，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。大黃具有的上述機(jī)制提示我們對大黃和偽品大黃進(jìn)行鑒定十分必要。

本研究應(yīng)用4種方法進(jìn)行大黃和偽品大黃鑒定，結(jié)果顯示薄層色譜鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確率最高，其次為顯微鑒定和熒光試驗，性狀鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確率最低，其他3種鑒定方法的鑒定結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。分析原因為性狀鑒定主要通過肉眼觀察和咀嚼，難以發(fā)現(xiàn)正品大黃和偽品大黃在結(jié)構(gòu)上存在的差異。而熒光試驗和顯微鑒定恰好能彌補(bǔ)性狀鑒定存在的不足。薄層色譜鑒定能夠觀察到正品大黃和偽品大黃的成分差異，故鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性更高，但鑒定操作相對復(fù)雜。

綜上所述，對正品大黃和偽品大黃進(jìn)行鑒定具有重要意義，在選擇鑒定方法時，建議先選擇操作簡單的方法，當(dāng)難以明確鑒定結(jié)果時，再選擇鑒定結(jié)果準(zhǔn)確率較高的方法，以最大程度地保障藥效和患者的用藥安全。

參考文獻(xiàn)

[1]汪景榮，張卓勇，楊玉平，等.太赫茲時域光譜結(jié)合主成分分析線性判別和支持向量機(jī)用于大黃樣品鑒定[J]光譜學(xué)與光譜分析，2017，37（5）：1606-1611.

[2]田曉軒，劉杰，竇永杰，等.中成藥大黃蟄蟲丸的宏條形碼基原鑒定[J]天津中醫(yī)藥，2014，31（4）：234-237.