HPLC法鑒定不同產(chǎn)地黃連飲片中含生物堿的研究

隆強

（重慶市大足區(qū)中醫(yī)院 重慶 402360）

黃連屬于常見的中藥飲片，具有瀉火解毒、清熱燥濕的功效，取得了較高的臨床價值。黃連的主要成分為生物堿，若能夠準(zhǔn)確掌握黃連中有效成分，選擇療效確切的鑒定方式在保證飲片質(zhì)量中具有重要意義。臨床上常采取紫外分光光度計或者薄層掃描方式進行鑒定，雖然取得過一定檢驗價值，但效果并不明顯[1]。其中薄層掃描鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性較低，而紫外分光光度計僅能夠檢出黃連中生物堿的總含量。隨著鑒定技術(shù)不斷完善，臨床認(rèn)為采取HPLC法鑒定效果顯著，不僅能夠檢出各生物堿含量，同時能夠保證結(jié)果準(zhǔn)確[2]。因此本文展開研究，探討HPLC法在不同區(qū)域黃連生物堿的檢驗中的價值，現(xiàn)作出如下報道。

1.資料與方法

1.1 儀器與試劑

日本日立公司生產(chǎn)的高效液相色譜儀器、色譜柱、超聲波清洗器、電子分析天平、色譜數(shù)據(jù)工作站、乙腈色譜純試劑、鹽酸小檗堿以及雙蒸水等。

1.2 方法

將鹽酸小檗堿判定為對照，按照HPLC法分別檢測黃連中各生物堿含量。

1.3 色譜條件

色譜柱為4.6mm*250mm，5um；流動相50∶50的乙腈-0.1%磷酸液體，與0.1g/100ml的十二烷基磺酸鈉混合，柱溫設(shè)置為30℃，檢驗波長345nm，流速1.0ml/min。

1.4 配置溶液

將100℃干燥后的鹽酸小檗堿放入流動相中，濃度設(shè)置成240.6ug/ml；取0.1g黃連粉末，放置于錐形瓶中，加入流動相（80ml），采取超聲處理，頻率200W，功率40kHz，時間控制35min左右。另外選擇流動相補充丟失情況，保證液體達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)線，混勻過濾后成為供試品。

選取1.0、3.0、5.0以及7.0ml的對照品，放入流動相，并將其定容于10ml。按照上述色譜要求，重復(fù)兩次，10ul/次，觀察峰面積，Y=3.5487624-37.515642（r=.99993），鹽酸小檗堿處于0.2405～1.6840ug之間表示線性較好。

1.5 加樣回收率實驗

取10ul對照品進六次，檢測峰面積為0.2；另選擇相同劑量的供試品于0、2、4、6、8h進樣，檢測峰面積為0.3，說明8h內(nèi)供試品平穩(wěn)；選擇同一區(qū)域的樣品，按照上述色譜要求檢測，峰面積0.8%，鹽酸小檗堿7.0%；選擇其中已知水平的樣品，添加適當(dāng)鹽酸小檗堿，按照色譜要求檢測，峰面積1.1%，平均回收率97.6%。

1.6 不同產(chǎn)地樣品的生物堿鑒定

取不同區(qū)域的樣品，研制成粉末狀，選擇0.1g，按照上述方式檢測其中生物堿水平。

2.結(jié)果

不同區(qū)域黃連中各生物堿水平以及總含量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中總生物堿含量以四川洪雅縣最高，而云南德欽縣最低。見表。

表 比較不同區(qū)域黃連飲片中生物堿含量[n(%)]

3.討論

黃連屬于毛茛科植物黃連、云連或者三角葉黃連的干燥根莖，本品大苦大寒，具有抗氧化、降糖、降脂、抗菌以及解熱等功效，主要分布于四川、貴州、湖南、湖北以及陜西南部等區(qū)域，極易存活于600～2000m的山谷濕陰處，可栽培，其粉末呈現(xiàn)棕黃色。

黃連成分以生物堿為主，其中小檗堿含量較高，其次分別為巴馬汀、表小檗堿以及黃連堿等。臨床上若能夠準(zhǔn)確掌握黃連中有效成分，可直接控制黃連飲片質(zhì)量，并為不同研究目的選擇適宜的黃連[3]。本文展開研究，將單一對照品作為標(biāo)準(zhǔn)參照峰，可明顯減少對照品的使用劑量。同時將鹽酸小檗堿的線性范圍0.2405～1.6840ug，平均回收率97.6%。另外流動相為乙腈-0.1%磷酸液，為黃連中各生物堿的鑒定提供保障，并且具有一定重現(xiàn)性。本文經(jīng)過鑒定后，結(jié)果提示：不同區(qū)域黃連中各生物堿與總含量相比無差異，四川洪雅縣總生物堿含量較高，而云南德欽縣較低，說明黃連的生長環(huán)境與其中生物堿含量息息相關(guān)。若能夠?qū)S連作進一步研究，可發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)地以及加工方式不同，可能導(dǎo)致其化學(xué)成分產(chǎn)生一定差異。

綜上所述，經(jīng)過HPLC法對其生物堿進行鑒定，可有效確定有效成分，在保證飲片質(zhì)量中具有重要意義。

[1]賴先榮，周邦華，杜明勝，等.6種黃連飲片中6種生物堿的RP-HPLC含量測定及與“治消渴”藥效學(xué)的譜-效關(guān)系分析[J].中國中藥雜志，2016，41(24):4579-4586.

[2]崔燦.HPLC法鑒定不同產(chǎn)地黃連飲片中含生物堿的研究[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2017，36(14):132.

[3]霍志鵬，王玉，周水平，等.黃連生物堿成分的HPLC-DAD-MS分析[J].天津藥學(xué)，2016，28(2):8-12.