運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)拉布拉多犬血液皮質(zhì)醇和生化指標(biāo)的影響

朱騫，秦海斌，溫海，高一龍，賀星亮，宋珍華，李剛，張匯東

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運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)拉布拉多犬血液皮質(zhì)醇和生化指標(biāo)的影響

朱騫，秦海斌，溫海，高一龍，賀星亮，宋珍華，李剛，張匯東通信作者

（公安部南京警犬研究所 警犬技術(shù)公安部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210012）

為探討運(yùn)輸對(duì)犬的影響，本試驗(yàn)以拉布拉多犬為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，運(yùn)輸前和運(yùn)輸2 h后分別采血，應(yīng)用放射免疫、生化等方法測定血液皮質(zhì)醇、促腎上腺皮質(zhì)激素和生化指標(biāo)。結(jié)果顯示，運(yùn)輸后皮質(zhì)醇（COR）濃度和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）比運(yùn)輸前顯著增高（＜0.05），肌酸激酶（CK）活性極顯著增高（＜0.01），促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、 乳酸脫氫酶（LDH）、葡萄糖（GLU）無明顯差異（＞0.05）。結(jié)果表明，2 h運(yùn)輸可引起拉布拉多犬血液皮質(zhì)醇、谷草轉(zhuǎn)氨酶和肌酸激酶水平的變化。

運(yùn)輸應(yīng)激；拉布拉多犬；生化指標(biāo)；皮質(zhì)醇

應(yīng)激是機(jī)體對(duì)外界或內(nèi)部的各種刺激所產(chǎn)生的非特異性應(yīng)答的總和，可以引起組織損傷甚至疾病的發(fā)生。各種異常環(huán)境如高溫、噪聲、過度疲勞、長途運(yùn)輸、心理緊張等均會(huì)嚴(yán)重影響動(dòng)物健康狀況、生產(chǎn)性能。

隨著大型活動(dòng)的日益增加，警犬的大規(guī)模集結(jié)更為常見。運(yùn)輸引起的應(yīng)激是造成警犬應(yīng)激綜合征的重要因素之一，有可能使犬免疫力下降，發(fā)病率升高，從而影響警犬的工作性能，使警犬使用受到影響。

目前對(duì)運(yùn)輸應(yīng)激的研究對(duì)象多為豬、小鼠等，對(duì)犬的研究較少。本試驗(yàn)以拉布拉多犬為研究對(duì)象，探討2 h運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)犬的影響，旨在為進(jìn)一步研究采取措施減少運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)警犬的影響提供理論依據(jù)，從而優(yōu)化警犬使用。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用犬由公安部南京警犬研究所提供，選取8頭體況良好、體重相近、12～18月齡的成年拉布拉多犬，飼喂全價(jià)配合成年犬飼料。全價(jià)配合成年犬飼料由公安部南京警犬研究所動(dòng)物食品廠提供，每日飼喂兩次，自由飲水。

1.1.2 主要試劑

皮質(zhì)醇（Cortisol，COR）和促腎上腺皮質(zhì)激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）放射免疫試劑盒購自北京北方生物技術(shù)研究所，生化檢測試劑盒購自南京澳林科技股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

以60 km/h的速度進(jìn)行2 h運(yùn)輸試驗(yàn)。運(yùn)輸期間，試驗(yàn)犬禁止喂食和飲水。分別于運(yùn)輸前和運(yùn)輸結(jié)束后采血，分離血清，-20 ℃保存待用。利用全自動(dòng)生化分析儀檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine transaminase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic oxalacetic transaminase，AST）、堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、肌酸激酶（Creatine Kinase，CK）、乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase，LDH）、葡萄糖（Glucose，GLU）共6項(xiàng)指標(biāo)。使用放射免疫法檢測血清中COR和ACTH。操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±）表示。SPSS軟件獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果分析

2.1 內(nèi)分泌指標(biāo)

如圖1所示，運(yùn)輸后COR濃度顯著高于運(yùn)輸前（＜0.05）。運(yùn)輸后ACTH濃度有升高的趨勢(shì)，但不顯著（＞0.05）。

圖1 血液內(nèi)分泌指標(biāo)

注：*表示差異顯著

2.2 血液生化指標(biāo)

如表1所示，運(yùn)輸后AST活性顯著高于運(yùn)輸前（＜0.05），運(yùn)輸后CK活性極顯著高于運(yùn)輸前（＜0.01）。ALP、ALT、LDH和GLU各組均不顯著（＞0.05）。

表1 血液生化指標(biāo)

注：*表示差異顯著，**表示差異極顯著

3 討論

對(duì)許多動(dòng)物來說，運(yùn)輸導(dǎo)致應(yīng)激，包括身體上的應(yīng)激和心理應(yīng)激[1-3]。運(yùn)輸應(yīng)激錯(cuò)綜復(fù)雜，如饑、渴、運(yùn)動(dòng)、溫度、濕度等，尤其運(yùn)輸中的裝載過程和噪音嚴(yán)重引起運(yùn)輸應(yīng)激[4]。過度持久的運(yùn)輸應(yīng)激可使機(jī)體內(nèi)分泌發(fā)生變化、免疫功能下降，同時(shí)也通過影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)中與行為相關(guān)的神經(jīng)元形態(tài)和功能導(dǎo)致動(dòng)物行為異常。

應(yīng)激通常是對(duì)擾亂機(jī)體正常生理功能作出的反應(yīng)，激素的變化被認(rèn)為是衡量應(yīng)激反應(yīng)的一個(gè)重要指標(biāo)。Srithunyarat等研究報(bào)道，心理應(yīng)激使犬血清皮質(zhì)醇濃度顯著升高[5]。用卡車運(yùn)輸比格犬，發(fā)現(xiàn)運(yùn)輸后血清皮質(zhì)醇濃度顯著增加，到達(dá)目的地并過夜之后，回復(fù)到基礎(chǔ)水平[6]。將比格犬從加拿大多倫多空運(yùn)到蒙特利爾，之后再通過公路運(yùn)輸?shù)侥康牡?，采取血樣和唾液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，運(yùn)輸后血液和唾液皮質(zhì)醇濃度均顯著升高[7]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，運(yùn)輸后COR濃度顯著高于運(yùn)輸前，與報(bào)道的研究結(jié)果一致。應(yīng)激對(duì)于激素的作用機(jī)制較為復(fù)雜，除了HPA軸的作用，兒茶酚胺等也會(huì)調(diào)節(jié)ACTH水平，并同時(shí)受到糖皮質(zhì)激素的負(fù)反饋調(diào)節(jié)。本試驗(yàn)運(yùn)輸后ACTH濃度有升高的趨勢(shì)，但不顯著，可能受到COR負(fù)反饋調(diào)節(jié)的影響。

CK主要分布于心肌纖維中，當(dāng)心肌纖維出現(xiàn)病理性損傷時(shí)，心肌纖維內(nèi)的代謝酶即可釋放入血液，表現(xiàn)為血液中CK活性增強(qiáng)。因此，通常用血清中CK活性作為檢測心肌損傷的指標(biāo)之一[8]。另外，血清中CK的活性通常也用來衡量機(jī)體所受應(yīng)激以及肌肉損傷的程度[9-10]。血清AST存在于肝臟、心肌、骨骼肌、腎、腦等組織，血清AST水平對(duì)肝臟疾病較特異[11]。黃麗波等研究表明，冷應(yīng)激時(shí)雛雞CK活性明顯增加[12]。Miranda-de la Lama等研究報(bào)道，長途運(yùn)輸之后，羊血漿皮質(zhì)醇濃度和CK活性均明顯增加[13]。有研究發(fā)現(xiàn)，長途運(yùn)輸初期（1～2 h），豬血液中AST和CK含量均顯著升高[14]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過2 h的運(yùn)輸后，犬血清中AST活性顯著高于運(yùn)輸前，CK活性極顯著升高。結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致，說明2 h的運(yùn)輸可以使犬發(fā)生應(yīng)激，且會(huì)導(dǎo)致犬出現(xiàn)心臟和肝臟組織的應(yīng)激性損傷。

Ochi等將比格犬從中國北京運(yùn)輸?shù)饺毡敬筅?，研究運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)犬血清生化指標(biāo)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，到達(dá)后犬血清ALP顯著升高，后來逐步降低，而其他的生化指標(biāo)，如紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、平均細(xì)胞數(shù)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白、血小板、白細(xì)胞數(shù)、ALT、AST、GLU等，均沒有顯著變化，暗示ALP可以作為評(píng)價(jià)運(yùn)輸應(yīng)激的指標(biāo)[15]。但在本試驗(yàn)中，ALP未有明顯變化，可能存在種屬差異，在拉布拉多犬的運(yùn)輸應(yīng)激過程中，ALP并非特異性指標(biāo)。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，成年拉布拉多犬經(jīng)過2 h運(yùn)輸后，產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)，血液COR濃度明顯升高；血液生化指標(biāo)也有變化，犬心臟和肝臟組織也出現(xiàn)應(yīng)激性損傷，為下一步研究緩解應(yīng)激的物質(zhì)提供理論基礎(chǔ)。

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責(zé)任編輯：張愛婷

Effect of transport stress on serum cortisol and biochemical indices of Labrador retriever

ZHU Qian, QIN Hai-bin, WEN Hai, GAO Yi-long, HE Xing-liang, SONG Zhen-hua, LI Gang, ZHANG Hui-dongCorresponding Author

（Nanjing Policedog Research Institute of MPS, Policedog Technology Key Laboratory of MPS, Nanjing 210012, China）

In order to study the effect of transport on dogs, Labrador retrievers were chosen and blood was collected before transport andafter 2-hour transport. Then serum cortisol, adrenocorticotropic hormone and biochemical indices were determined. The results showed: the concentration of cortisol and the activity of glutamic oxalacetic transaminase (AST) were significantly increased after transport (＜0.05). The activity of Creatine kinase (CK) was significantly increased (＜0.01). Adrenocorticotropic hormone (ACTH), alanine transaminase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), lactate dehydrogenase (LDH), glucose (GLU) had no significant difference (＞0.05). In conclusion, 2-hour transport stress can induce the change of serum cortisol, AST and CK of Labrador retriever.

transport stress; Labrador retriever; biochemical indices; cortisol

S852.21

A

1008-5394（2018）02-0039-03

10.19640/j.cnki.jtau.2018.02.010

2018-02-24

公安部重點(diǎn)研究計(jì)劃項(xiàng)目（2011ZDYJNJGQ011）

朱騫（1980-），女，副研究員，碩士，主要從事動(dòng)物分子生物學(xué)研究。E-mail：zq.zh@163.com。

張匯東（1962-），男，研究員，碩士，主要從事動(dòng)物分子生物學(xué)研究。E-mail：zhhuido@163.com。