清肺平喘口服液對大鼠長期毒性試驗(yàn)研究

董惠峰 ，朱國霞 ，李源 ，王立紅 ，張鳳洪 ，劉鼎闊 ，4，

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清肺平喘口服液對大鼠長期毒性試驗(yàn)研究

董惠峰1，2，朱國霞3，李源1，2，王立紅1，2，張鳳洪1，2，劉鼎闊1，2，4，通信作者

（1. 鼎正動物藥業(yè)（天津）有限公司，天津 300383；2. 天津市飼用微生物制劑企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300383；3. 天津農(nóng)學(xué)院 天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；4. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，北京 100094）

為了解清肺平喘口服液長期用藥的安全性，本試驗(yàn)研究清肺平喘口服液連續(xù)灌服情況下對SD 大鼠的長期毒性情況。將雌雄各半的120只SD大鼠，隨機(jī)分為對照組和清肺平喘口服液2.52 g/kg、5.04 g/kg和10.08 g/kg劑量組，每組30只，連續(xù)給藥90 d，以SD大鼠的體重、攝食量、血液生化指數(shù)及臟器系數(shù)檢查作為檢查指標(biāo)，全面評價連續(xù)灌服對大鼠的毒性作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組大鼠灌胃給藥直至90 d均無死亡，各給藥組大鼠毛發(fā)光潤，攝食、糞便均正常。給藥觀察期間，3個試驗(yàn)組大鼠的體重、攝食量、血液生化指標(biāo)、臟器系數(shù)與對照組相比均無顯著差異（＞0.05）。結(jié)果提示，清肺平喘口服液在2.52 g/kg、5.04 g/kg和10.08 g/kg劑量下連續(xù)灌服對SD大鼠無不良影響。

清肺平喘口服液；大鼠；長期毒性

呼吸系統(tǒng)疾病是動物養(yǎng)殖過程中最為常見、危害極為嚴(yán)重的疾病之一。引發(fā)呼吸系統(tǒng)疾病的原因多種多樣，既包括細(xì)菌、病毒、免疫性抑制等常見因素，又包括混合感染、非典型病原等復(fù)雜因素[1-2]。因此，疾病控制難度也逐漸增大，一些傳統(tǒng)的抗生素藥物由于動物體內(nèi)產(chǎn)生具有耐藥性甚至多重耐藥性的病原微生物而難以奏效。有研究顯示，多數(shù)病原菌可耐受15～20 種抗生素[3]。而中草藥具有毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性、藥物殘留低等優(yōu)點(diǎn)[4]。因此，越來越多用于治療呼吸系統(tǒng)疾病的新型中獸藥被研發(fā)出來。清肺平喘口服液是一種用于治療呼吸系統(tǒng)疾病的中獸藥制劑。桂枝、麻黃、苦杏仁、桔梗及黃芪為該藥的主要組成成分。本試驗(yàn)通過觀察清肺平喘口服液連續(xù)灌胃對大鼠的長期毒性，評價清肺平喘口服液長期用藥的安全性，為臨床提供無毒性反應(yīng)劑量提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

清肺平喘口服液（生藥1 g/mL），批號：20170521，由鼎正動物藥業(yè)（天津）有限公司提供。

實(shí)驗(yàn)前將清肺平喘口服液用蒸餾水配制成不同濃度的混懸液備用。實(shí)驗(yàn)時按1 mL/100g體重的灌服量，每天灌服給藥一次。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

4周清潔級SD大鼠120只，體重在120～150 g之間，平均分為4組，每組動物30只，雌雄各半。組內(nèi)動物個體體重相差不超過平均體重的10%，組間平均體重相差不超過5%。

1.3 染毒劑量的選擇及分組

試驗(yàn)設(shè)3個染毒劑量組，根據(jù)《中藥、天然藥物長期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，低劑量組原則上應(yīng)高于同種動物藥效學(xué)試驗(yàn)的有效劑量。小鼠藥效學(xué)試驗(yàn)的有效劑量為2.4 g生藥/kg體重、高劑量為4.8 g生藥/kg體重，取其中間劑量值3.6 g生藥/kg體重作為長期毒性的低劑量組，折算成大鼠（200 g）的劑量為2.52 g生藥/kg體重。因此設(shè)置清肺平喘口服液大鼠長期毒性試驗(yàn)的低劑量組劑量為2.52 g生藥/kg體重、中劑量組為5.04 g生藥/kg體重、高劑量組為10.08 g生藥/kg體重。另設(shè)一組生理鹽水對照組。

1.4 染毒方法及時間

采用經(jīng)口染毒，連續(xù)染毒90 d。

1.5 試驗(yàn)期間臨床觀察

每天觀察健康狀況、采食及飲水變化、體重變化等。分別于第2、4、6、8、10、12、13、15周稱量體重，并于給藥結(jié)束后及停藥2周后計算平均攝食量和飼料利用率（動物每食入100 g飼料所增長的體重克數(shù)）。將染毒劑量組與對照組加以比較和統(tǒng)計學(xué)處理。及時記錄和分析大鼠的中毒癥狀及出現(xiàn)各癥狀的先后次序、時間。

1.6 血液生化檢測

染毒90天結(jié)束后和停藥2周后，各組各撲殺一半大鼠（雌雄各半）。采血進(jìn)行血項(xiàng)和肝、腎功能的檢測：血項(xiàng)檢測包括紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)和分類、血紅蛋白定量等，肝、腎功能常規(guī)指標(biāo)包括谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST或SGOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT或SGPT）、總蛋白（TP）、血清白蛋白（Alb）、血糖（Glu）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、總膽固醇（TCH）和甘油三脂（TG）等。

1.7 大鼠剖檢及臟器稱重

90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束，各組取20只大鼠進(jìn)行剖檢，停藥2周后對剩余大鼠（雌、雄各半）進(jìn)行剖檢（可結(jié)合采血進(jìn)行），及時做好記錄。

剖檢試驗(yàn)大鼠的同時，稱取大鼠體重及各主要臟器（包括心、肝、脾、肺、腎、胸腺、睪丸及卵巢等）重量，做好記錄。計算各臟器的相對重量（臟器重與體重的比值），即臟器系數(shù)。

1.8 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 臨床表現(xiàn)

大鼠灌胃給藥直至90 d各組均無死亡，低、中、高劑量組大鼠毛發(fā)光潤，攝食、飲水、糞便均正常。給藥觀察期間，3個試驗(yàn)組大鼠的體重、攝食量及飼料利用率與對照組相比均無顯著差異（＞0.05）（見表1和表2）。

表1 清肺平喘口服液對大鼠體重的影響

續(xù)表1

體重/g性別10.08 g/kg組5.04 g/kg組2.52 g/kg組對照組 用藥10周體重♂♀296.33±16.80223.39±12.50294.15±14.29222.69±13.46296.66±15.28224.90±12.24295.12±12.61223.34±13.19 用藥12周體重♂♀309.90±17.75230.22±15.54309.28±18.15232.14±17.36310.58±14.42230.75±14.85311.52±15.22231.61±12.54 用藥13周體重♂♀317.24±16.52235.19±14.28316.69±19.85231.82±16.98318.26±13.48237.62±14.61319.91±17.62234.67±13.95 用藥15周體重♂♀344.77±15.59241.37±11.58340.58±14.49243.11±14.80343.12±11.97244.70±12.91346.78±14.29246.69±13.33

表2 清肺平喘口服液對大鼠攝食量及飼料利用率的影響

2.2 血液生化參數(shù)

大鼠連續(xù)染毒90 d及停藥2周后的血液學(xué)和血液生化參數(shù)測定結(jié)果分別見表3和表4。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，與對照組相比清肺平喘口服液各劑量組的血液生化參數(shù)之間差異均不顯著（＞0.05）。

表3 清肺平喘口服液連續(xù)染毒90 d時大鼠的血液生化參數(shù)

續(xù)表3

檢測指標(biāo)性別10.08 g/kg組5.04 g/kg組2.52 g/kg組對照組 血尿素氮/mmol · L-1♂♀7.04±0.246.86±0.857.14±0.256.79±1.087.15±0.398.71±0.387.34±0.718.51±0.89 白蛋白/g · L-1♂♀27.66±1.2428.00±1.1127.57±1.0128.77±0.6028.28±0.8328.23±1.6628.58±0.5028.15±0.55 總蛋白/g · L-1♂♀62.56±2.6560.70±3.2261.38±2.0961.47±1.5962.40±1.8262.70±2.7162.07±2.6959.95±1.68 白蛋白/球蛋白♂♀0.82±0.160.87±0.580.83±0.190.90±0.000.83±0.820.80±0.080.87±0.080.88±0.05 CHOL/mmol · L-1♂♀1.53±0.361.75±0.111.73±0.161.80±0.401.69±0.091.68±0.201.53±0.281.67±0.12 TG/mmol · L-1♂♀0.80±0.360.65±0.360.80±0.360.70±0.321.13±0.180.69±0.100.95±0.190.86±1.00 CRE/μmol · L-1♂♀29.88±1.4829.83±1.5229.10±1.8827.20±1.1528.47±2.0828.18±1.9531.31±3.6631.75±5.93

表4 清肺平喘口服液停藥2周時大鼠的血液生化參數(shù)

續(xù)表4

檢測指標(biāo)性別10.08 g/kg組5.04 g/kg組2.52 g/kg組對照組 CHO/mmol· L-1♂♀1.55±0.131.88±0.081.85±0.442.15±0.091.58±0.122.01±0.171.52±0.162.08±0.28 TG/mmol· L-1♂♀0.92±0.140.81±0.201.16±0.351.20±0.411.17±0.140.87±0.290.90±0.221.53±0.91 CRE/mmol· L-1♂♀28.10±3.2430.55±0.8230.23±2.4029.23±1.5329.88±2.5926.89±1.7129.80±0.6029.40±3.07

2.3 臟器系數(shù)

對經(jīng)口染毒至90 d和停藥后2周宰殺的大鼠剖檢后，均未發(fā)現(xiàn)任何異常和可疑病變。分別將90 d和停藥后2周宰殺的對照組、清肺平喘口服液高劑量組中所有大鼠的心、肝、脾、肺、腎、胸腺、睪丸（♂）及卵巢（♀）組織臟器系數(shù)進(jìn)行檢測，結(jié)果見表5和表6，均未發(fā)現(xiàn)異常。

表5 清肺平喘口服液連續(xù)染毒90 d時對大鼠臟器系數(shù)的影響

表6 清肺平喘口服液停藥2周時對大鼠臟器系數(shù)的影響

3 討論

清肺平喘口服液主要成分包括桂枝、麻黃、苦杏仁、桔梗及黃芪。桂枝、麻黃辛溫輕散，小汗解表，具有抑制動物氣道炎癥和改善哮喘的作用[5]；苦杏仁—桔梗是臨床上用于止咳、平喘、祛痰的經(jīng)典藥對，苦杏仁辛散苦降，以降為主，桔梗既升且降，以升為主，二藥伍用，一升一降，升降調(diào)和，二者在鎮(zhèn)咳作用上具有配伍增效的作用[6]。黃芪培土生金，實(shí)衛(wèi)固表，止咳平喘效果較好[7]。研究表明，桂枝與黃芪屬無毒中草藥[8-9]，但麻黃、苦杏仁、桔梗使用不合理則會對機(jī)體產(chǎn)生毒性。麻黃的毒性對中樞神經(jīng)、肝臟、心臟、心血管等組織器官均易造成損傷[10]，苦杏仁主要毒性表現(xiàn)為惡心嘔吐、腹痛腹瀉、頭痛頭暈、心悸、血壓升高等[11]。研究表明，麻黃-杏仁配伍應(yīng)用會增加苦杏仁的毒性作用[12]。桔梗的主要成分桔梗皂苷有很強(qiáng)的溶血作用，故不宜注射給藥，口服后桔梗皂苷在胃腸道分解，即無溶血作用。但口服大劑量桔梗皂苷，反射性興奮嘔吐中樞，可引起惡心嘔吐[13]。本試驗(yàn)通過研究灌服清肺平喘口服液后大鼠的臨床表現(xiàn)、血液生化參數(shù)變化，評價清肺平喘口服液的長期毒性。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，低、中、高劑量組與對照組大鼠在90 d給藥期間，活動正常、毛發(fā)光潤，未發(fā)現(xiàn)中毒癥狀，動物無一死亡。試驗(yàn)動物的體重變化是反映動物機(jī)體中毒效應(yīng)與毒物毒性的基本指標(biāo)[14]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同劑量給藥組大鼠的體重、攝食量及飼料利用率與對照組均無顯著差異，但上述指標(biāo)雄鼠普遍高于雌鼠，可解釋為性別差異所造成。臟器系數(shù)是毒性試驗(yàn)中檢測受試物對靶器官作用情況的重要參數(shù)。與未使用受試物的動物相比，臟器相對質(zhì)量下降表明該器官可能發(fā)生萎縮、退行性病變或功能減弱，臟器相對質(zhì)量上升則可能是由器官水腫、充血、增生性肥大或功能增強(qiáng)所引起[4，15]。本試驗(yàn)中，各給藥組與對照組比較，各臟器指數(shù)值均無顯著性差異，且均在正常值范圍內(nèi)。清肺平喘口服液連續(xù)染毒90 d時及停藥2周時各給藥組雌、雄大鼠與對照組相比，血液生化參數(shù)測定結(jié)果差異不顯著，均在正常值范圍內(nèi)。

4 結(jié)論

綜上所述，在試驗(yàn)條件下，未發(fā)現(xiàn)清肺平喘口服液對大鼠的生長發(fā)育產(chǎn)生影響，長期重復(fù)應(yīng)用無長期毒性；停藥 2 周未見由蓄積毒性引起的后遺效應(yīng)。表明清肺平喘口服液對靶動物的臨床安全性在可接受范圍內(nèi)。

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責(zé)任編輯：張愛婷

Long-term toxicity of clear away lung-heat to relieve asthma oral liquid in rats

DONG Hui-feng1,2, ZHU Guo-xia3, LI Yuan1,2, WAGN Li-hong1,2, ZHANG Feng-hong1,2, LIU Ding-kuo1,2,4Corresponding Author

（1. S&E Animal Pharmaceutical（Tianjin）Co, Ltd. , Tianjin 300383, China; 2. Enterprise Key Laboratory of Feed Microbial Preparation, Tianjin 300383, China; 3. Tianjin Key Lab of Aqua-Ecology and Aquaculture, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384 , China; 4. College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100094, China）

The long-term toxicity of clear away lung-heat to relieve asthma oral liquid in SD rats was researched by continuous perfusion in order to expose its clinical innocuity. 120 SD rats (males and females) were randomly divvied into control group and clear away lung-heat to relieve asthma oral liquid in 3 different dosage groups (2.52 g/kg, 5.04 g/kg and 10.08 g/kg, 30 in each group). The SD rats were administered with clear away lung-heat to relieve asthma oral liquid by continuous perfusion for 90 days. The body weight, food intake, hematology, blood biochemistry and organ coefficient were measured for the overall toxicity assessment to rats. Results: After 90 days, no death occurred in 120 rats. The appetite and excretion of clear away lung-heat to relieve asthma oral liquid rats were normal and their feathers were sleek. During the administration period, the weight, food intake, hematology, blood biochemistry and organ coefficientof the test group rats had no significant differencefrom the control group(＞0.05). It was concluded that with the dose of 2.52 g/kg, 5.04 g/kg and 10.08 g/kg clear away lung-heat to relieve asthma oral liquid continuous perfusing, there is no harmful effect for SD rats.

clear away lung-heat to relieve asthma oral liquid; rat; long-term toxicity

S859.79

A

2017-12-08

天津市科技支撐計劃項(xiàng)目（13ZCZDNC00700）

董惠峰（1968－），男，工程師，學(xué)士，主要從事獸藥研發(fā)生產(chǎn)工作。E-mail：1247797695@qq.com。

劉鼎闊（1981－），男，高級獸醫(yī)師，碩士，主要從事中獸藥新制劑開發(fā)工作。E-mail：liudingkuo1981@163.com。

1008-5394（2018）02-0030-06

10.19640/j.cnki.jtau.2018.02.008