富硒乳酸菌對肉雞新城疫病毒抗體影響的研究

林耀瑋，劉燕霏，楊建德，秦順義

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富硒乳酸菌對肉雞新城疫病毒抗體影響的研究

林耀瑋，劉燕霏，楊建德通信作者，秦順義

（天津農(nóng)學院 動物科學與動物醫(yī)學學院，天津 300384）

本研究旨在探究富硒乳酸菌對肉雞新城疫病毒（NDV）抗體的影響。在靜?？h某雞場抽選1日齡AA肉仔雞1 000只，隨機分2組，一組為基礎日糧組，另一組為富硒乳酸菌組。單個試驗組在組內(nèi)隨機分為5個重復試驗組，每個重復組100只雞?；A日糧組選用玉米豆粕型日糧作為飼料，富硒乳酸菌組日糧將2%富硒乳酸菌添加到玉米豆粕型日糧中。試驗中雛雞自由飲食和飲水，免疫方法參照常規(guī)免疫程序。試驗期為42 d，分別在試驗第14 d、28 d和42 d隨機從每個重復組中選取2只肉雞進行撲殺，采集血清，進行新城疫病毒抗體效價檢測。結(jié)果表明，富硒乳酸菌能明顯提高新城疫病毒血清抗體效價。

富硒乳酸菌；新城疫病毒；血凝抑制試驗；抗體效價

近年來，科學家對硒元素和乳酸菌的研究越來越廣，從單一生物活性到其復合物的生物活性都有研究。微量元素硒在我國許多城市都缺乏，養(yǎng)殖業(yè)往往更需要重視硒。雞缺乏硒元素會導致免疫力下降、食欲下降或廢絕、甚至死亡[1]。微量元素硒的生物學活性主要以抗氧化和促進生長為主[2-3]，乳酸菌能輔助機體消化吸收食物，抑制有害菌的生長[4-5]，富硒乳酸菌也因具有兩者共同的優(yōu)勢而被大量研究。在飼料中直接添加含硒化物（亞硒酸鈉），在不控制飲食的狀態(tài)下易出現(xiàn)硒中毒，通過乳酸菌進行生物轉(zhuǎn)換后，能有效補充硒元素且不易中毒。富硒乳酸菌是新型飼料，在養(yǎng)殖業(yè)的應用中需先進行測試，主要針對肉用及有生產(chǎn)性能的動物。有相關研究表明，日糧中添加富硒乳酸菌能有效減弱黃曲霉毒素B1對肉雞的毒害[6]，增重且有效降低料肉比，提高肉雞抗氧化功能[7]，增加蛋雞的產(chǎn)蛋量及含硒量[8]。

新城疫病毒（NDV）主要危害家雞和火雞，對養(yǎng)殖業(yè)危害巨大。在不同地區(qū)，新城疫病毒毒株所引起疾病的癥狀不同，同種動物表現(xiàn)出的臨床癥狀也不同，常常伴有免疫失敗現(xiàn)象，有時常規(guī)免疫也不能避免強毒株感染[9]。本試驗探究富硒乳酸菌對肉雞NDV抗體的影響作用，為闡明富硒益生菌提高機體免疫力提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

一日齡AA肉仔雞1 000只、健康成年雞1只、玉米豆粕型日糧及NDV弱毒疫苗均由大成萬達天津有限公司提供。富硒乳酸菌活菌數(shù)不少于5×1011cfu /L，硒含量為10.00 mg/L；標準硒[GBW（E）080215]由國家標準物質(zhì)研究中心提供。NDV抗原由天津農(nóng)學院預防獸醫(yī)學實驗室提供。

雞0.5%紅細胞，按文獻[10]提供的方法制備。

1.2 方法

1.2.1 動物飼喂及血清采集

1 000只1日齡雛雞并隨機分為兩個試驗組，第一組為基礎日糧組，第二組為富硒乳酸菌組，每個試驗組組內(nèi)隨機分為5個重復對照組?；A日糧組選擇玉米豆粕型日糧作為飼料，富硒乳酸菌組飼料在玉米豆粕型飼料中添加2%富硒乳酸菌。雛雞在7日齡采用NDV弱毒苗滴鼻免疫，總的試驗天數(shù)42 d。分別于第14、28、42 d隨機從每個重復對照組中選取2只雛雞進行撲殺，采集血清并保存于冰箱中冷藏待用。

1.2.2 血凝試驗（HA）及血凝抑制試驗（HI）

NDV抗原效價檢測采用常規(guī)的HA方法，抗體效價的檢測采用HI方法，參照文獻[11-12]進行。

HA在96孔微量反應板上進行，自左至右各孔加50 μL生理鹽水；于左側(cè)第1孔加50 μLNDV病毒液，混合均勻后，吸50 μL至第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，吸棄50 μL；第12孔為紅細胞對照；自右至左依次向各孔加入0.5%雞紅細胞懸液50 μL，在振蕩器上振蕩，室溫下靜置后觀察結(jié)果。

HI在96孔微量反應板上進行，用固定病毒稀釋血清的方法，自第1孔至第11孔各加50 μL生理鹽水；第1孔加被檢雞血清50 μL，吹吸混合均勻，吸50 μL至第2孔，依此倍比稀釋至第10孔，吸棄50 μL，稀釋度分別為：1∶2、1∶4、1∶8……；第12孔加新城疫陽性血清50 μL，作為血清對照；自第1孔至12孔各加50 μL 4個血凝單位的新城疫病毒液，其中第11孔為4單位新城疫病毒液對照，振蕩混合均勻，置室溫中作用10 min；自第l孔至12孔各加0.5% 雞紅細胞懸液50 μL，振蕩混合均勻，室溫下靜置后觀察結(jié)果。

1.2.3 統(tǒng)計學分析

對普通日糧組與富硒乳酸菌組的HI效價，采用Excel中檢驗進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果

2.1 NDV抗原效價的測定

經(jīng)3次重復試驗，血凝試驗檢測NDV抗原的HA效價為29，見圖1。根據(jù)測定的NDV抗原效價，制備4單位的病毒應對抗原稀釋27倍。

圖1 NDV抗原效價測定結(jié)果

2.2 富硒乳酸菌對肉雞NDV抗體的影響

經(jīng)HI檢測，飼喂基礎日糧肉雞體內(nèi)NDV抗體效價在14 d處于21和22之間，在28 d處于21和26之間，在35 d處于23和27之間。試驗結(jié)果見表1。飼喂富硒乳酸菌組肉雞體內(nèi)NDV抗體效價在14 d處于21和24之間，在28 d處于23和27之間，在35 d處于24和28之間，試驗結(jié)果見表2。

表1 基礎日糧組效價范圍及所占比例 （log2，%）

表2 富硒乳酸菌組效價范圍及所占比例 （log2，%）

比較數(shù)據(jù)得出，添加富硒乳酸菌肉雞組抗體效價范圍高于基礎日糧組，更趨于穩(wěn)定。從圖2得出，富硒乳酸菌組NDV抗體效價比基礎日糧組高，兩組試驗抗體效價均呈現(xiàn)上升趨勢。通過對抗體水平測定和統(tǒng)計學分析，富硒乳酸菌組NDV抗體顯著高于普通日糧組（＜0.01）。

圖2 富硒乳酸菌對仔雞NDV抗體的影響

3 討論

近年來，富硒益生菌在食品及飼料方面逐漸得到人們的關注。 硒是人和動物所必需的微量元素，具有提高機體免疫力、抗自由基、延緩衰老、抗癌、拮抗有毒元素等多種功能[2-3]。在許多國家日糧補硒已是養(yǎng)殖業(yè)采取的常規(guī)措施，常用的補硒方法是在日糧中添加亞硒酸鈉，但鑒于其結(jié)合率低、毒性大，而且會對環(huán)境造成潛在污染，因此已被限量使用。益生菌是一類通過改善動物胃腸道微生物區(qū)系平衡而促進動物健康和生長的有益菌。富硒益生菌是利用生物轉(zhuǎn)化的原理，應用益生菌將無機硒轉(zhuǎn)化為有機硒的有機硒制劑，可發(fā)揮有機硒和益生菌的雙重功效[4-5]。秦順義等[6]研究日糧中添加富硒乳酸菌制劑對肉雞生產(chǎn)性能、血清總超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性的影響。結(jié)果表明，飼喂富硒乳酸菌可顯著提高肉雞日增重，顯著降低料肉比，顯著提高肉雞血清GSH-Px和T-SOD活性，MDA水平明顯下降。富硒乳酸菌還能提高小鼠NK細胞活性，降低腸道中致病性大腸桿菌的黏附與定植[13-14]，但尚未見有富硒益生菌對病毒免疫效果的研究。本研究對富硒乳酸菌對肉雞NDV病毒抗體的影響研究發(fā)現(xiàn)，從試驗開始至結(jié)束，普通日糧組和富硒乳酸菌組NDV抗體均處于上升趨勢，富硒乳酸菌組肉雞的NDV抗體效價范圍廣，效價值更高，免疫更趨于穩(wěn)定。試驗中均有偏低與偏高的數(shù)值，可能與自身免疫、免疫程序及采食飲水量等方面因素有關。試驗第42 d基礎日糧組所檢測到最低NDV抗體效價為23，推測屬于免疫水平較差的個體。本研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加富硒乳酸菌能顯著提高肉雞NDV抗體水平，這在富硒益生菌影響病毒免疫方面尚屬首次。推測可能原因是硒元素和乳酸菌共同發(fā)揮作用的結(jié)果。這與Chuang等[15]的研究結(jié)果一致，證實這些滅活乳酸菌能刺激細胞增殖和白細胞介素IL-10、IL-12、IFN-γ的產(chǎn)生，并使Th細胞分泌升高。目前，控制新城疫是養(yǎng)禽業(yè)的首要問題，免疫失敗現(xiàn)象時有發(fā)生。本次試驗發(fā)現(xiàn)富硒乳酸菌添加到飼料日糧中可提高NDV免疫抗體水平1.0～1.3log2滴度，可顯著輔助疫苗產(chǎn)生免疫保護作用，為抵抗該病發(fā)揮重要作用。

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責任編輯：張愛婷

Effect of se-enriched lactobacillus on antibody of NDV of broilers

LIN Yao-wei, LIU Yan-fei, YANG Jian-deCorresponding Author, QIN Shun-yi

（College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China）

The purpose of this experiment is to study the effect of se-enriched lactobacillus on antibody of Newcastle Disease Virus (NDV) of broilers. One thousand day-old AA broiler chicken were selected from a chicken farm of Jinghai country, and the chicken were divided randomly into two groups which respectively had five repeat groups with 100 chickens each, one named basal diet group, and the other named se-enriched lactobacillus group. Corn soybean meal diet was selected for basal diet group, while 2% se-enriched lactobacillus was added into corn soybean meal diet for the other group. In this experiment, method of feeding was free diet, drinking and routine immunization program. This test period was 42 days. Two chicken were selected randomly in each repeat for slaughtering and collecting serums on 14th, 28thand 42ndday. Assessments on the effect of se-enriched lactobacillus in antibody titers of NDV of broilers were made by hemagglutination-inhibition test. The result indicated that antibody titers of NDV was increased significantly by se-enriched lactobacillus.

se-enriched lactobacillus; NDV; hemagglutination-inhibition test; antibody titers

S852.4

A

2018-02-18

國家自然科學基金項目（31101867）；天津農(nóng)學院附屬動物醫(yī)院項目（ZH004903）

林耀瑋（1994-），男，本科在讀，研究方向為預防獸醫(yī)學。E-mail：3111491142@qq.com。

楊建德（1969-），男，教授，博士，研究方向為預防獸醫(yī)學。E-mail：jiandeyang@126.com。

1008-5394（2018）02-0036-03

10.19640/j.cnki.jtau.2018.02.009