農(nóng)藥原藥和制劑的分析方法
——CIPAC分析手冊 O卷的分析方法

吳進(jìn)龍，武 鵬，姜宜飛，宋俊華，王勝翔，張宏軍

(農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(huì)于2017年出版了CIPAC手冊O(shè)卷。為使中國農(nóng)藥分析工作者便于了解、參考和采用國際標(biāo)準(zhǔn)分析方法，筆者將CIPAC手冊O(shè)卷中20種農(nóng)藥分析方法(涉及17種原藥和27種制劑)以方法概要的形式作了綜合性翻譯。力求篇幅短小，分析參數(shù)詳盡。本文內(nèi)容按此書卷的農(nóng)藥排列順序編號(hào)，并標(biāo)注農(nóng)藥中英文名稱、CIPAC代碼和分析方法。

1 吲唑磺菌胺(Amisulbrom，789)-HPLC法

稱取約含100mg吲唑磺菌胺的試樣于100mL容量瓶中，加入90mL流動(dòng)相溶液超聲溶解1min，再用流動(dòng)相溶液定容，混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=254nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈+0.01%磷酸溶液=75+25(v/v)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，經(jīng)過250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填YMC Pack Pro C18的5μm色譜柱分離，柱溫40℃。保留時(shí)間：9min。

2 溴鼠靈(Brodifacoum，370)-HPLC法

稱取約含15～25mg溴鼠靈的試樣于100mL容量瓶中，加入80mL乙腈超聲溶解5min，冷卻至室溫，用乙腈定容，再用乙腈稀釋2倍待用。采用紫外檢測器檢測(λ=266nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈/0.1%磷酸溶液(v/v)的程序淋洗液(表1)為流動(dòng)相，流速1.5mL/min，經(jīng)過50mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Zorbax Eclipse XDB-C18的1.8μm色譜柱分離，柱溫50℃。保留時(shí)間：cis異構(gòu)體5.0和trans異構(gòu)體5.2min。

表1 溴鼠靈程序淋洗液

3 溴蟲腈(Chlorfenapyr，570)-HPLC法

稱取約含25±5mg溴蟲腈的試樣于50mL容量瓶中，加入30mL乙腈超聲溶解10min，冷卻至室溫，用乙腈定容至刻線。采用紫外檢測器檢測(λ=300nm)，外標(biāo)法定量測定。以0.5mL/L乙酸乙腈溶液/0.5mL/L乙酸水溶液(v/v)的程序淋洗液(表2)為流動(dòng)相，流速2.0mL/min，經(jīng)過50mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填HALO C18的2.7μm色譜柱分離，柱溫25℃。保留時(shí)間：10min。

表2 溴蟲腈程序淋洗液

4 氰霜唑(Cyazofamid，653)-HPLC法

稱取約含85mg氰霜唑的試樣于50mL容量瓶中，加入40mL乙腈超聲溶解5min，冷卻至室溫，再用乙腈定容至刻線，混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=280nm)，外標(biāo)法定量測定。以甲醇+乙腈+pH4乙酸溶液=25+32+43(v/v/v)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，經(jīng)過250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填C18的5μm色譜柱分離，柱溫40℃。保留時(shí)間：23min。

5 溴氰菊酯(Deltamethrin，333)-HPLC法手性拆分

稱取約含40～60mg溴氰菊酯的試樣于50mL容量瓶中，加入流動(dòng)相溶解，冷卻至室溫，再用流動(dòng)相定容至刻線。采用紫外檢測器檢測(λ=230nm)，外標(biāo)法定量測定。以正己烷+異丙醇=95+5(v/v)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，經(jīng)過4mm×3mm(i.d)、內(nèi)填Phenomenex Security Guard的預(yù)柱和250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Phenomenex LUX Cellulose-1的手性色譜柱分離，柱溫25℃。保留時(shí)間：αR,1R-cis 0.93min；αS,1R-cis 1.00min；αS,1R-trans 1.07min；αS,1S-trans 1.13min；αR,1R-trans 1.19min；αR,1S-cis 1.35min；αS,1S-cis 1.46min；αR,1S-trans 1.63min。

6 醚菌胺(Dimoxystrobin，739)-GC法

稱取約含25mg醚菌胺的試樣于25mL容量瓶中，準(zhǔn)確移入1.0mL鄰苯二甲酸二丁酯丙酮溶液(內(nèi)標(biāo)濃度，10mg/mL)，用丙酮定容至刻線，超聲溶解5min。采用FID檢測器檢測，進(jìn)樣口溫度280℃，檢測器溫度280℃，柱溫程序升溫：從60℃開始，保持0.5min，以20℃/min升溫至260℃，保持9.5min。內(nèi)標(biāo)法定量測定。以氦氣為載氣(流速2.0mL/min)，經(jīng)過30m×0.32mm(i.d)、膜厚0.25μm、DB-1毛細(xì)管色譜柱分離。保留時(shí)間：內(nèi)標(biāo)9.3min，醚菌胺11.1min。

7 啶嘧磺隆(Flazasulfuron，595)-HPLC法

稱取約含40mg啶嘧磺隆的試樣于100mL容量瓶中，加入75mL乙腈超聲溶解5min，冷卻至室溫，再用乙腈定容至刻線，混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=260nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈+0.05%乙酸溶液=55+45(v/v)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，經(jīng)過250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Zorbax Eclipse XDB C18的5μm色譜柱分離，柱溫40℃。保留時(shí)間：6min。

8 氟啶胺(Fluazinam，521)-HPLC法

稱取約含120mg氟啶胺的試樣于50mL容量瓶中，加入40mL乙腈超聲溶解至少5min，冷卻至室溫，用乙腈定容至刻線，再用乙腈稀釋12.5倍待用。采用紫外檢測器檢測(λ=240nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈/0.2%(v/v)三乙胺溶液(pH3.0，用磷酸調(diào)pH值)(v/v)的程序淋洗液(表3)為流動(dòng)相，流速0.75mL/min，經(jīng)過250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Cosmosil C18的5μm色譜柱分離，柱溫50℃。保留時(shí)間：36min。

表3 氟啶胺程序淋洗液

9 丙炔氟草胺(Flumioxazin，578)-HPLC法

稱取約含50mg丙炔氟草胺的試樣于100mL容量瓶中，加入80mL乙腈超聲溶解10min，冷卻至室溫，再用乙腈定容至刻線，混勻備用。采用紫外檢測器檢測(λ=288nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈+水=50+50(v/v)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，經(jīng)過250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Phenomenex Gemini C18的5μm色譜柱分離，柱溫40℃。保留時(shí)間：11min。

10 噻唑磷(Fosthiazate，585)-HPLC法

稱取約含100mg噻唑磷的試樣于100mL容量瓶中，準(zhǔn)確移入5.0mL鄰苯二甲酸二甲酯丙酮溶液(內(nèi)標(biāo)濃度，12mg/mL)，加入60mL丙酮超聲至完全溶解，冷卻至室溫，再用丙酮定容至刻線，混勻，再用乙腈稀釋10倍待用。采用紫外檢測器檢測(λ=220nm)，內(nèi)標(biāo)法定量測定。以乙腈/乙腈+水=1+2(v/v)溶液(v/v)的程序淋洗液(表4)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，經(jīng)過125mm×4.0mm(i.d)、內(nèi)填Hypersil ODS C18的5μm色譜柱分離，柱溫25℃。保留時(shí)間：內(nèi)標(biāo)4.7min，噻唑磷6.4min。

表4 噻唑磷程序淋洗液

11 煙嘧磺隆(Nicosulfuron，709)-HPLC法

稱取約含70±5mg煙嘧磺隆的試樣于100mL容量瓶中，準(zhǔn)確移入10mL DMPU(3-甲基-1,1-二苯基脲)乙腈溶液(內(nèi)標(biāo)濃度，5mg/mL)，再加入80mL乙腈超聲溶解10min，冷卻至室溫，再用乙腈定容至刻線，混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=245nm)，內(nèi)標(biāo)法定量測定。以乙腈+磷酸溶液(pH2.5)=30+70(v/v)為流動(dòng)相，流速1.5mL/min，經(jīng)過75mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Zorbax SB-C18的3.5μm色譜柱分離，柱溫40℃。保留時(shí)間：煙嘧磺隆1.9min, 內(nèi)標(biāo)3.5min。

12 氯菊酯(Permethrin，331)-HPLC法手性拆分

稱取約含40～60mg氯菊酯的試樣于50mL容量瓶中，流動(dòng)相溶解，冷卻至室溫，再用流動(dòng)相溶液定容至刻線。采用紫外檢測器檢測(λ=235nm)，外標(biāo)法定量測定。以正己烷+異丙醇(各含0.1%水)=95+5(v/v)為流動(dòng)相，流速1.2mL/min，經(jīng)過4mm×3mm(i.d)、內(nèi)填Phenomenex Security Guard的預(yù)柱和250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Phenomenex LUX Cellulose-3的手性色譜柱分離，柱溫40℃。保留時(shí)間：1S-cis 4.3min，1R-cis 5.0min，1S-trans 5.3min，1R-trans 6.2min。

13 增效醚(Piperonyl butoxide，33)-GC法

稱取約含160±10mg增效醚的試樣于100mL容量瓶中，準(zhǔn)確移入10mL鄰苯二甲酸二丁酯丙酮溶液(內(nèi)標(biāo)濃度，20mg/mL)，用正己烷溶解定容至刻線。采用FID檢測器檢測，進(jìn)樣口溫度250℃，檢測器溫度300℃，柱溫程序升溫：從120℃開始，保持2min，以5℃/min升溫至285℃，保持10min。內(nèi)標(biāo)法定量測定。以氦氣為載氣(流速22cm/s)，經(jīng)過25m×0.32mm(i.d)、膜厚0.25μm、填充二甲基聚硅氧烷的毛細(xì)管色譜柱分離。保留時(shí)間：內(nèi)標(biāo)21.6min，增效醚29.3min。

14 甲基嘧啶磷(Pirimiphos-methyl，239)-GC法

稱取約含45～55mg甲基嘧啶磷的試樣于30mL容量瓶中，準(zhǔn)確移入10mL 4,4'-二甲氧基二苯酮丙酮溶液(內(nèi)標(biāo)濃度，2mg/mL)，超聲溶解5min。采用FID檢測器檢測，進(jìn)樣口溫度170℃，檢測器溫度310℃，柱溫程序升溫：從60℃開始，保持0min，以25℃/min升溫至100℃，保持0min，以40℃/min升溫至280℃，保持1min。內(nèi)標(biāo)法定量測定。以氦氣為載氣(流速2mL/min)，經(jīng)過15m×0.25mm(i.d)、膜厚0.25μm、DB-1毛細(xì)管色譜柱分離。保留時(shí)間：甲基嘧啶磷4.8min，內(nèi)標(biāo)5.4min。

15 唑菌酯(Pyraoxystrobin，964)-HPLC法

稱取約含40mg唑菌酯的試樣于100mL容量瓶中，加入80mL乙腈超聲溶解1min，冷卻至室溫，再用乙腈定容至刻線，混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=280nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈+水=60+40(v/v)為流動(dòng)相，流速1.3mL/min，經(jīng)過150mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Zorbax SB C18的5μm色譜柱分離，柱溫30℃。保留時(shí)間：6.4min。

16 吡丙醚(Pyriproxyfen，715)-HPLC法

稱取約含90～110mg吡丙醚的試樣于100mL容量瓶中，準(zhǔn)確移入10mL鄰苯二甲酸二環(huán)己酯乙腈溶液(內(nèi)標(biāo)濃度，25mg/mL)，再用乙腈溶解定容至刻線，混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=254nm)，內(nèi)標(biāo)法定量測定。以乙腈+水=70+30(v/v)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，經(jīng)過250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Nucleosil C18的5μm色譜柱分離，柱溫40℃。保留時(shí)間：吡丙醚17min，內(nèi)標(biāo)25min。

17 多殺菌素(Spinosad，636)-HPLC法

稱取約含25mg多殺菌素的試樣于150mL容量瓶中，加入100mL甲醇溶解混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=250nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈+甲醇+乙酸銨溶液(pH5.3，用乙酸調(diào)pH)=40+40+20(v/v/v)為流動(dòng)相，流速1.5mL/min，經(jīng)過150mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填YMC ODS-AQ的5μm色譜柱分離，柱溫35℃。保留時(shí)間：多殺菌素A 9.0min，多殺菌素D 12.0min。

18 噻蟲嗪(Thiamethoxam，637)-HPLC法

稱取約含45～55mg噻蟲嗪的試樣于50mL容量瓶中，加入35mL乙腈和10mL0.1%(v/v)磷酸溶液超聲溶解5min，冷卻至室溫，用乙腈定容至刻線，再用稀釋溶液稀釋4倍待用，稀釋溶液為乙腈+0.1%(v/v)磷酸溶液=4+1(v/v)。采用紫外檢測器檢測(λ=230nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈/0.1%(v/v)磷酸溶液(v/v)的程序淋洗液(表5)為流動(dòng)相，流速1.5mL/min，經(jīng)過75mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Nucleodur C18 ec的3μm色譜柱分離，柱溫40℃。保留時(shí)間：2.6min。

表5 噻蟲嗪程序淋洗液

19 四氟苯菊酯(Transfluthrin，741)-HPLC法手性拆分

稱取約含45～60mg四氟苯菊酯的試樣于50mL容量瓶中，溶解，冷卻至室溫，用流動(dòng)相溶液定容至刻線，混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=230nm)，外標(biāo)法定量測定。以正己烷/異丙醇=97+3(v/v)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，經(jīng)過4mm×3mm(i.d)、內(nèi)填Phenomenex Security Guard的預(yù)柱和250mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Phenomenex LUX Cellulose-1的手性色譜柱分離，柱溫25℃。保留時(shí)間：1S-cis 0.74min，1S-trans 0.79min，1R-trans 1.00min，1R-cis 1.07min。

20 肟菌酯(Trifloxystrobin，617)-HPLC法

稱取約含50mg肟菌酯的試樣于100mL容量瓶中，加入90mL乙腈超聲溶解15min，冷卻至室溫，再用水定容至刻線，混勻待用。采用紫外檢測器檢測(λ=280nm)，外標(biāo)法定量測定。以乙腈/10 mmol/L磷酸溶液(v/v)的程序淋洗液(表6)為流動(dòng)相，以程序流速(表6)淋洗，經(jīng)過50mm×4.6mm(i.d)、內(nèi)填Kinetex C18的2.6μm色譜柱分離，柱溫50℃。保留時(shí)間：1.3min。

表6 肟菌酯程序淋洗液