凱氏定氮-氣相色譜法測定藍(lán)莓利口酒中微量甲醇的含量

◎ 熊建軍，楊 坤，張建煬，鄒大維

（貴州省黔東南苗族侗族自治州食品藥品檢驗檢測中心，貴州 凱里 556000）

隨著人們生活水平的不斷提高，果酒為越來越多的人所喜愛，成為人們提高生活品味的消費(fèi)品。藍(lán)莓利口酒用新鮮的濃縮藍(lán)莓汁，加入茅臺優(yōu)質(zhì)的醬香基酒等后，經(jīng)特殊工藝制成，營養(yǎng)豐富，呈天然寶石紅色，澄清透明，酒香濃郁，甘甜醇厚，具有野生漿果的獨(dú)特風(fēng)格。藍(lán)莓利口酒成分復(fù)雜，除含有水、乙醇、蛋白質(zhì)、糖、無機(jī)鹽、有機(jī)酸、果膠和微量元素外，還存在一定量的有毒有害甲醇。因此，甲醇是飲料酒中重要的衛(wèi)生質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

甲醇對人體的危害在于甲醇在人體中隨新陳代謝氧化成毒性更強(qiáng)的甲酸和甲醛，主要危害人體的神經(jīng)系統(tǒng)。輕度中毒表現(xiàn)為胸悶、惡心等，中度中毒表現(xiàn)為神志模糊、失明等，重度中毒表現(xiàn)為雙目失明、昏迷甚至因呼吸衰竭而死亡[1-5]。國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.266-2016中規(guī)定用蒸餾瓶方法蒸餾發(fā)酵酒和配制酒操作復(fù)雜，蒸餾速度慢，重復(fù)性差等，不適用于大批量酒樣分析[6]。本文研究采用凱氏定氮儀蒸餾藍(lán)莓利口酒，用白酒專用柱CP-WAX57CB柱分離，經(jīng)氣相色譜儀分析摸索出快速檢測藍(lán)莓利口酒中甲醇含量的條件，為果酒、配制酒大批量分析甲醇提供檢測參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：悠蜜藍(lán)莓利口酒（酒精度12%vol），貴州茅臺（集團(tuán)）生態(tài)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司生產(chǎn)。

儀器設(shè)備：GC-2010plus型氣相色譜儀，（配FID氫火焰離子檢測器，自動進(jìn)樣器，氫氣發(fā)生器）日本島津公司；CP-Wax57CB毛細(xì)管分析柱（50 m×0.25 mm×0.2 μm），美國安捷倫公司；Milli-Q型純水系統(tǒng)，美國Millipore公司；KDN-103F型自動定氮儀，上海纖檢儀器有限公司。

試劑：甲醇（色譜純，99.7%），中國計量科學(xué)研究院；叔戊醇（色譜純，99.5%），Dr.Ehrenstorfer GmbH；無水乙醇（色譜純99.7%），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；去離子水，電阻率＞18.0 MΩ·cm。

1.2 色譜條件

色譜柱：CP-Wax57CB（50 m×0.25 mm×0.2 μm）；載氣N2；柱流速：1.20 mL/min；進(jìn)樣口溫度220 ℃，柱溫35 ℃，程序升溫：35 ℃，保持4 min；5 ℃/min升至80 ℃；25 ℃/min升至200 ℃，保持3 min，檢測器溫度260 ℃?？刂颇Ｊ剑壕€速；分離比：50∶1；進(jìn)樣量：1.0 μL。

1.3 甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.3.1 甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制

準(zhǔn)確吸取0.5 g（精確至0.000 1 g）甲醇至100 mL容量瓶中，用40%的乙醇溶液定容至刻度，混勻，在0～4 ℃低溫冰箱密封保存。

1.3.2 甲醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

分別吸取0.5、1.0、2.0、4.0 mL和5.0 mL甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于5個25 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，依次配制成甲醇含量為100、200、400、800 mg/L和1 000 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻。

1.4 內(nèi)標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取2.0 g（精確至0.000 1 g）叔戊醇至100 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至100 mL，混勻，0～4 ℃低溫冰箱密封保存。

1.5 樣品的測定

準(zhǔn)確吸取100.0 mL試樣于250 mL消化管中，用少量去離子水清洗容量瓶后倒入消化管中蒸餾5 min，接口用冷水浴的100 mL容量瓶接收，當(dāng)接近刻度時，取下容量瓶，待溶液冷卻至室溫后，用去離子水定容至刻度，混勻。吸取10.0 mL蒸餾后的溶液于試管中，準(zhǔn)確加入100 μL叔戊醇內(nèi)標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，上機(jī)分析，結(jié)果見圖1。

圖1 藍(lán)莓利口酒色譜分析圖

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的線性方程和檢出限

準(zhǔn)確吸取甲醇標(biāo)準(zhǔn)使用液各10.0 mL于試管中，準(zhǔn)確加入100 μL叔戊醇內(nèi)標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻，分別進(jìn)樣1.0 μL，測得標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖，結(jié)果見圖2。以甲醇與叔戊醇峰面積比為縱坐標(biāo)，甲醇濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖3），用Orign7.5軟件對標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行線性回歸得甲醇（100.0～1 000.0 mg/L）的回歸方程為Y=3.42×10-3X-4.152×10-2，R=0.999 37，結(jié)果表示該方法的線性非常好。以3倍信噪比對應(yīng)的含量定義方法檢出限，以10倍信噪比相對應(yīng)的含量定義為定量限，該方法的檢出限為1.2 mg/L，定量限為4.0 mg/L。

圖3 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法分析甲醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2 方法的精密度和加標(biāo)回收實驗

在樣品中加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，通過和樣品完全相同的前處理方法上機(jī)測試，測得的值減去原樣品的值后與理論加標(biāo)的比值的百分?jǐn)?shù)為加標(biāo)回收率?；厥章?（加標(biāo)后測量值-樣品中的含量值）/理論加標(biāo)量×100%。

本實驗通過添加3個不同濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)品，每個水平重復(fù)測試6次，測得甲醇的回收率范圍和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。實驗結(jié)果表明，該方法的加標(biāo)回收率為88.72%～96.99%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為0.65%～3.24%，具體數(shù)據(jù)見表1。這表明所建立的分析方法的準(zhǔn)確度均滿足檢測要求。

表1 加標(biāo)回收實驗結(jié)果表

2.3 樣品檢測

本次研究一共對62批次藍(lán)莓利口酒進(jìn)行分析檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其按100%酒精度擇算甲醇含量在0.4～0.5 g/L，均小于國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2757-2012規(guī)定的限量值2.0 g/L。

3 結(jié)論

本實驗通過優(yōu)化藍(lán)莓利口酒蒸餾處理環(huán)節(jié)，減少能源消耗，降低實驗過程中操作的復(fù)雜性，大大節(jié)約了樣品處理過程時間，為大批量發(fā)酵酒和配制酒檢測提供了技術(shù)方案。該方法準(zhǔn)確可靠，完全適用于藍(lán)莓利口酒中微量甲醇的測定。