• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    馬鈴薯枯萎病拮抗菌的篩選與鑒定

    2018-08-01 08:09:14李彩虹楊志輝趙冬梅朱杰華
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年13期

    李彩虹, 楊志輝, 張 岱, 趙冬梅, 潘 陽, 朱杰華

    (河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院,河北保定 071000)

    馬鈴薯枯萎病是由茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌、雪腐鐮刀菌、接骨鐮刀菌5種不同的鐮刀菌寄生所引起的一種真菌土傳病害[1],分布廣泛,在我國各種植區(qū)均有發(fā)生,發(fā)病率達15%~45%[2]。近年來,隨著馬鈴薯主糧化戰(zhàn)略的實施,馬鈴薯種植面積逐年擴大,由此帶來的連作重茬導(dǎo)致馬鈴薯枯萎病日益加重,一般造成減產(chǎn)30%,嚴重時可造成78%的植株死亡,直接影響了馬鈴薯產(chǎn)量及其經(jīng)濟效益,嚴重制約了我國馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[2-3]。

    目前,馬鈴薯枯萎病的防治措施主要以農(nóng)業(yè)防治和化學(xué)藥劑拌種為主,但由于該病為土傳病害,其病原菌抗逆性強且對植株為系統(tǒng)性侵染,使用藥劑防治效果較差,使用藥劑進行大面積的土壤處理可行性較小[3]。在缺乏有效化學(xué)藥劑和抗病品種的前提下,利用拮抗菌防治枯萎病是防治途徑之一,并且生防菌對環(huán)境、生態(tài)和人類健康安全,具有改善環(huán)境、獲得長期效益作用,符合現(xiàn)階段植物病害控制的發(fā)展方向[4]。

    芽孢桿菌可以形成耐高溫、輻射、高酸堿等逆境的芽孢,能夠產(chǎn)生脂肽類和蛋白類等抗真菌物質(zhì),具有廣譜抗真菌活性和良好的穩(wěn)定性,越來越為人們所關(guān)注。普遍認為芽孢桿菌生防機制主要有營養(yǎng)和空間位點競爭、抗菌物質(zhì)產(chǎn)生、溶菌作用、誘導(dǎo)植物抗病性等[5]。目前,利用芽孢桿菌有益菌株拮抗植物鐮刀菌病害的研究已有較多報道,如黃瓜枯萎病[6]、香蕉枯萎病[7]、西瓜枯萎病[8]以及馬鈴薯干腐病[9]等,但針對馬鈴薯枯萎病開展的拮抗芽孢桿菌篩選的研究尚不多見,因此,進一步篩選出適合我國不同區(qū)域的芽孢桿菌菌株對于防治馬鈴薯枯萎病具有重要意義。

    本研究從16個馬鈴薯枯萎病發(fā)生地塊的健康植株根際分離篩選出6株對馬鈴薯枯萎病病原菌有極強抗性的芽孢桿菌菌株,并對其中NZ-4菌株的抑菌譜進行了測定,旨在為馬鈴薯枯萎病的生物防治以及生防菌劑的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 土樣采集

    從河北省保定、承德、張家口、秦皇島以及內(nèi)蒙古自治區(qū)、貴州省的馬鈴薯枯萎病發(fā)病田塊中采集健康植株的根際土壤,采集深度范圍為10~20 cm,用無菌自封袋封好后帶回實驗室,暫保存于4 ℃,用于分離拮抗菌。

    1.2 靶標(biāo)病原菌

    1株尖鐮孢馬鈴薯?;途?Fusariumoxysporumf.sp. tuberosi,Y10-2),由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)實驗室提供。

    1.3 培養(yǎng)基

    細菌為LB培養(yǎng)基[10],真菌為PDA培養(yǎng)基[11]。

    1.4 芽孢桿菌菌株的分離和純化

    采用熱處理土壤稀釋法[12]分離芽孢桿菌,連續(xù)劃線培養(yǎng)至純,以體積比1 ∶1混合于70%甘油中,-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.5 拮抗菌的篩選

    采用平板對峙法[13]測定芽孢桿菌對尖孢鐮刀菌Y10-2的拮抗作用。初篩采用抑菌帶法,將接種平皿置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),以只接種病原菌的PDA平板為對照,待對照長滿平皿時,測量抑菌帶寬度并篩選出抑菌效果較好的菌株,采用抑菌圈法進行復(fù)篩試驗。

    1.6 拮抗菌株的鑒定

    采用菌落形態(tài)、革蘭氏染色與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法對篩選到的拮抗菌株進行鑒定。

    gyrB基因的序列分析:正向引物gyrB-F為5′-TTGRCGGHRGYGGHTATAAAGT-3′;反向引物gyrB-R為5′-TCCDCCSTCAGARTCWCCCTC-3′[14]。PCR擴增程序:95 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃變性30 s,55 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min,35個循環(huán);最后72 ℃延伸10 min,4 ℃ 終止反應(yīng)。PCR產(chǎn)物于1.5%瓊脂糖凝膠電泳上檢測后,送生工生物工程(上海)有限公司進行測序。將所測序列通過NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLAST比對,利用Clustalx和MEGA 6.0[15]軟件對分離芽孢桿菌及模式菌進行系統(tǒng)發(fā)育分析。

    1.7 拮抗菌抑菌譜測定

    采用對峙培養(yǎng)法測定拮抗菌株對馬鈴薯炭疽病、馬鈴薯瘡痂病、小麥根腐病菌、梨黑斑病菌、蘋果斑點落葉病菌、番茄早疫病菌、紅腐病菌以及煙草疫霉菌等重要的農(nóng)業(yè)病害病原真菌的抑菌效果。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 芽孢桿菌的分離及拮抗菌株的篩選

    從16份根際土壤中分離純化到對馬鈴薯枯萎病菌具有潛在拮抗作用的芽孢桿菌有288株。通過平板對峙法初篩獲得抑菌帶寬度≥3 mm的拮抗菌株188株,占所有菌株的 65.3%。其中,20株拮抗菌抑菌帶寬度達到5.7 mm以上。利用抑菌圈法繼續(xù)對20株拮抗菌進行復(fù)篩,獲得抑菌圈直徑>20.0 mm的拮抗菌6株(表1、圖1)。

    2.2 芽孢桿菌的種類鑒定

    2.2.1 形態(tài)學(xué)特征 拮抗菌菌落呈圓形、乳白色,菌落邊緣不整齊、表面有突起或褶皺,具有一定的粘附性,直徑為5 mm左右;4 d后可產(chǎn)生棕褐色色素。6株拮抗菌根據(jù)其菌落形態(tài)具體又可分為3類:NZ-4菌株為第1類,菌落中間為突起狀,邊緣褶皺明顯,顏色較暗;NZ-5、NZ-6、HC-Z-18為第2類,菌落中間突起部分有凹陷,似噴泉狀,邊緣較為整齊;HC-Y-5、HC-Y-16為第3類,菌落中間凹陷,似魚嘴狀,邊緣褶皺明顯,不整齊。6株拮抗菌菌體均為桿狀,長約 2 μm,單生,革蘭氏染色結(jié)果為陽性(圖2)。

    表1 芽孢桿菌對尖孢鐮刀菌的抑制作用

    注:同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。表2同。

    2.2.2 拮抗菌gyrB基因序列分析 測定了NZ-4等6個芽孢桿菌菌株的gyrB基因序列,其序列相同,為1個haplotype,長度為964~999 bp。將該序列在GenBank數(shù)據(jù)庫中進行Blast,并下載相似性高于98%的序列8條。以Bacillussubtilis(枯草芽孢桿菌)等為外群,同源序列比對后,獲得長度為 892 bp 的gyrB基因數(shù)據(jù)組,利用鄰接法構(gòu)建了6個未知芽孢桿菌的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)。該樹形成1個大分支,即解淀粉芽孢桿菌復(fù)合種,該大分支可分為3個末端分支,從上到下分別為Bacillusvelezensis、Bacillusamyloliquefaciens和解淀粉芽孢桿菌中的另外1個隱藏種。本研究中的6條序列均聚在第1個分支,將其鑒定為Bacillusvelezensis。

    2.3 拮抗菌NZ-4的抑菌譜

    將菌株NZ-4對8株病原菌株進行抑菌譜測定。結(jié)果顯示,菌株NZ-4對馬鈴薯炭疽病、瘡痂病的抑菌效果最好,抑菌圈直徑達到35 mm; 對小麥根腐病菌、梨黑斑病菌、蘋果斑點落葉病菌、番茄早疫病菌的抑菌圈直徑均在24 mm以上;對紅腐病菌也有一定的拮抗作用;但對煙草疫霉菌的拮抗作用不明顯(表2、圖4)。表明菌株NZ-4有比較廣的抑菌譜,可以考慮將其應(yīng)用于除馬鈴薯枯萎病外的其他作物病害的生防研究。

    3 討論

    采用gyrB序列對比方法對NZ-4等6株芽孢桿菌菌株進行了系統(tǒng)發(fā)育分析,并結(jié)合傳統(tǒng)的形態(tài)觀察將它們鑒定為貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)。系統(tǒng)發(fā)育分析主要依據(jù)與6株拮抗菌gryB基因序列同源性為99%的 DQ903176(GenBank登錄號),該菌株同KY315726、KM603514和KR605463單獨聚為1個分支。貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)是2005年由Ruiz-García等新命名的芽孢桿菌種[16],DQ903176菌株屬于Bacillusvelezensis,該菌之前被認定為Bacillusamyloliquefaciens的后異形同義詞[17],2015年,Dunlap等通過對BacillusvelezensisNRRL B-41580T進行比較基因組學(xué)和DNA-DNA雜交分析,否定了Bacillusvelezensis為Bacillusamyloliquefaciens的后異形同義詞,即Bacillusvelezensis為不同于Bacillusamyloliquefaciens的一個種[18]。因此,本研究將登錄號為DQ903176的菌株所在的分支界定為Bacillusvelezensis種群,并將6株拮抗菌鑒定為Bacillusvelezensis。

    表2 拮抗菌株NZ-4對不同病原菌拮抗效果

    貝萊斯芽孢桿菌是一種新型生防細菌,有關(guān)它的研究日益增多。有研究發(fā)現(xiàn),該菌對棉花黃萎病病原菌大麗輪枝菌[19]、番茄灰霉病灰葡萄孢菌[20]等具有拮抗活性,該菌產(chǎn)生的β-葡聚糖酶可抑制楊樹紫紋羽病菌[21],還有研究者將該菌制成生物制劑,可有效降低赤霉病和DON積累[22]。本研究從16個馬鈴薯種植地塊分離篩選得到6株貝萊斯芽孢桿菌,它們對馬鈴薯枯萎病病原菌尖孢鐮刀菌都具有很強的拮抗活性,為貝萊斯芽孢桿菌在馬鈴薯枯萎病的生物防治上提供了新的科學(xué)依據(jù)。

    芽孢桿菌的拮抗機制通常是由于它能產(chǎn)生生物活性物質(zhì)[23-24]。芽孢桿菌產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)主要有細菌素、抗生素、細胞壁溶解酶、其他抑菌蛋白及揮發(fā)性抗菌物質(zhì)等[25]。相關(guān)研究表明,芽孢桿菌產(chǎn)生的fengycin類和iturin類家族的脂肽類化合物在抑制真菌病害中起著重要作用,這些物質(zhì)中的一些只抗相同或相近的有特異受體位點的種類[26]。Lee等研究發(fā)現(xiàn),貝萊斯芽孢桿菌產(chǎn)生的bacillomycin D、fengycin和(oxy) difficidin等活性物質(zhì)抑制病原菌[27]。本研究結(jié)果表明,NZ-4菌株對除馬鈴薯枯萎病以外的其他多種重要農(nóng)業(yè)病害病原菌也能產(chǎn)生較強的拮抗作用,由此推測,NZ-4菌株可能產(chǎn)生多種不同的抑菌物質(zhì),亦或該菌株產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)有較廣的抑菌能力,具體活性物質(zhì)成份還有待于進一步研究,以期為該菌株在生產(chǎn)實踐中更廣泛的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

    日本三级黄在线观看| 亚洲av免费在线观看| 欧美日韩乱码在线| 午夜激情福利司机影院| 久久国产精品人妻蜜桃| 在线观看66精品国产| 久久人人精品亚洲av| 床上黄色一级片| 午夜福利在线观看吧| 亚洲av电影不卡..在线观看| 一本精品99久久精品77| 一个人看视频在线观看www免费 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品久久视频播放| av黄色大香蕉| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 久久亚洲真实| 国产久久久一区二区三区| 日韩国内少妇激情av| 午夜福利在线在线| 欧美日韩乱码在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 岛国在线免费视频观看| 黄片大片在线免费观看| 在线免费观看不下载黄p国产 | 在线观看舔阴道视频| 日韩国内少妇激情av| 黄色成人免费大全| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| av欧美777| 亚洲av免费在线观看| 久久久久久久午夜电影| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 长腿黑丝高跟| 亚洲性夜色夜夜综合| 狠狠狠狠99中文字幕| 国模一区二区三区四区视频 | 国产99白浆流出| 精品电影一区二区在线| 久久人人精品亚洲av| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 听说在线观看完整版免费高清| 最近最新免费中文字幕在线| 99久久成人亚洲精品观看| 免费无遮挡裸体视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品女同一区二区软件 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 一本久久中文字幕| 国产1区2区3区精品| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产高清视频在线观看网站| 久久久国产成人免费| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美中文日本在线观看视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产欧美日韩一区二区三| 麻豆av在线久日| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产一区二区在线av高清观看| av女优亚洲男人天堂 | 欧美日韩乱码在线| 午夜影院日韩av| 国产三级黄色录像| av片东京热男人的天堂| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产一区在线观看成人免费| 十八禁人妻一区二区| 观看免费一级毛片| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人鲁丝片一二三区免费| 又黄又粗又硬又大视频| 免费av毛片视频| 国产成人影院久久av| 亚洲人成网站高清观看| 午夜福利在线在线| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲七黄色美女视频| 成人亚洲精品av一区二区| 国产黄片美女视频| 97超视频在线观看视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲一区二区三区不卡视频| 日本 av在线| 麻豆av在线久日| 真实男女啪啪啪动态图| 好男人电影高清在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 黄色成人免费大全| 88av欧美| 精品熟女少妇八av免费久了| 免费看光身美女| 国产不卡一卡二| 最近最新免费中文字幕在线| 看片在线看免费视频| 国产三级在线视频| 又大又爽又粗| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲精品在线观看二区| 午夜福利在线观看吧| 国产精品一区二区免费欧美| 日本五十路高清| 搡老妇女老女人老熟妇| 观看免费一级毛片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 精品久久久久久久末码| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国模一区二区三区四区视频 | 免费大片18禁| 级片在线观看| 男人舔奶头视频| 国产黄色小视频在线观看| 国产久久久一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影 | 精品熟女少妇八av免费久了| 韩国av一区二区三区四区| 搡老岳熟女国产| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久亚洲精品不卡| 国产真实乱freesex| 久久久久久久久中文| 午夜福利18| 国产成人精品无人区| 亚洲avbb在线观看| 亚洲电影在线观看av| 国产一区二区激情短视频| 在线看三级毛片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产精品,欧美在线| 国产真实乱freesex| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲,欧美精品.| 国产美女午夜福利| 一个人看的www免费观看视频| 香蕉av资源在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 中文字幕av在线有码专区| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲国产精品成人综合色| 级片在线观看| 国产男靠女视频免费网站| cao死你这个sao货| 一级毛片高清免费大全| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 日本成人三级电影网站| 国产精品av久久久久免费| 午夜福利成人在线免费观看| 日韩免费av在线播放| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国模一区二区三区四区视频 | 欧美zozozo另类| 男女那种视频在线观看| 午夜免费成人在线视频| 欧美成狂野欧美在线观看| netflix在线观看网站| 亚洲国产看品久久| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 成人永久免费在线观看视频| 国产私拍福利视频在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 99热这里只有精品一区 | 日韩欧美精品v在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 高清毛片免费观看视频网站| 99久国产av精品| 91九色精品人成在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲激情在线av| 老鸭窝网址在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲无线观看免费| 一本精品99久久精品77| 少妇熟女aⅴ在线视频| 美女大奶头视频| 国产精品av久久久久免费| 日本黄色片子视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 99热这里只有精品一区 | 十八禁人妻一区二区| 99久久99久久久精品蜜桃| av欧美777| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲av美国av| 最新在线观看一区二区三区| 999久久久精品免费观看国产| 舔av片在线| 级片在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 很黄的视频免费| 亚洲专区国产一区二区| 香蕉丝袜av| 男女那种视频在线观看| 最新中文字幕久久久久 | 中文亚洲av片在线观看爽| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲美女黄片视频| 国产真实乱freesex| 国产精品国产高清国产av| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲第一电影网av| 国产男靠女视频免费网站| 俺也久久电影网| 香蕉久久夜色| 五月玫瑰六月丁香| svipshipincom国产片| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲欧美日韩高清专用| 日韩精品中文字幕看吧| 听说在线观看完整版免费高清| 中文在线观看免费www的网站| 日本五十路高清| 男插女下体视频免费在线播放| 一本综合久久免费| 天堂√8在线中文| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲性夜色夜夜综合| 日本一本二区三区精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产乱人伦免费视频| 亚洲无线在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品无人区乱码1区二区| 中文亚洲av片在线观看爽| av在线天堂中文字幕| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美在线黄色| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲电影在线观看av| 国产高清有码在线观看视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 午夜免费观看网址| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲欧美日韩高清专用| 一级黄色大片毛片| 国产成人精品久久二区二区91| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲精品456在线播放app | 色综合欧美亚洲国产小说| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 性色avwww在线观看| 日本熟妇午夜| 日韩欧美免费精品| netflix在线观看网站| 一二三四社区在线视频社区8| 人妻久久中文字幕网| 男人舔奶头视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美日韩精品网址| 岛国在线免费视频观看| 一个人看视频在线观看www免费 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 日韩欧美 国产精品| 日本 欧美在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久香蕉国产精品| 怎么达到女性高潮| 免费av毛片视频| 欧美一级毛片孕妇| 99国产极品粉嫩在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| av天堂中文字幕网| 夜夜爽天天搞| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产精品精品国产色婷婷| 精品国内亚洲2022精品成人| 丰满的人妻完整版| 国产精品久久电影中文字幕| 97人妻精品一区二区三区麻豆| bbb黄色大片| 亚洲精品在线美女| 桃红色精品国产亚洲av| 午夜两性在线视频| 国模一区二区三区四区视频 | 真人一进一出gif抽搐免费| 黄色成人免费大全| 亚洲精华国产精华精| 日韩国内少妇激情av| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 啦啦啦韩国在线观看视频| 1024香蕉在线观看| 国产高清videossex| 99re在线观看精品视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久这里只有精品19| 免费在线观看影片大全网站| 久久久色成人| 黄色 视频免费看| 日本一二三区视频观看| 亚洲中文字幕日韩| 青草久久国产| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日本熟妇午夜| 国产成人精品久久二区二区91| 无限看片的www在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久成人免费电影| 91麻豆av在线| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲美女黄片视频| 亚洲精品456在线播放app | 色尼玛亚洲综合影院| 少妇丰满av| 性欧美人与动物交配| av中文乱码字幕在线| 三级毛片av免费| 亚洲成人久久性| 国产精华一区二区三区| 国产午夜福利久久久久久| 男人的好看免费观看在线视频| 黄色成人免费大全| 久久久久九九精品影院| 亚洲电影在线观看av| a在线观看视频网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲五月天丁香| 国产毛片a区久久久久| 国产黄色小视频在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品99久久久久久久久| 男女之事视频高清在线观看| 成人国产综合亚洲| 老鸭窝网址在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 欧美在线一区亚洲| 国产精品久久视频播放| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产成人影院久久av| 精品不卡国产一区二区三区| 免费观看的影片在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲国产欧美一区二区综合| 在线观看66精品国产| 麻豆av在线久日| 在线观看66精品国产| 色精品久久人妻99蜜桃| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 禁无遮挡网站| 悠悠久久av| 成人av在线播放网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 99热6这里只有精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 在线免费观看不下载黄p国产 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品久久电影中文字幕| 国产91精品成人一区二区三区| 国产 一区 欧美 日韩| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产高清videossex| 宅男免费午夜| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 男女床上黄色一级片免费看| 成人欧美大片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美乱码精品一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 又黄又爽又免费观看的视频| 免费看十八禁软件| 成年女人看的毛片在线观看| 国产成人aa在线观看| 国产三级中文精品| 免费在线观看成人毛片| 啦啦啦免费观看视频1| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 草草在线视频免费看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一级毛片精品| 久久中文字幕一级| 免费无遮挡裸体视频| 在线观看午夜福利视频| 1000部很黄的大片| 老司机午夜十八禁免费视频| 啦啦啦免费观看视频1| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品国产美女av久久久久小说| 观看免费一级毛片| 成年女人永久免费观看视频| 韩国av一区二区三区四区| 观看美女的网站| 亚洲国产精品合色在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 12—13女人毛片做爰片一| 美女 人体艺术 gogo| 村上凉子中文字幕在线| 午夜成年电影在线免费观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 波多野结衣巨乳人妻| 偷拍熟女少妇极品色| 日韩精品中文字幕看吧| 桃红色精品国产亚洲av| 91字幕亚洲| av片东京热男人的天堂| 精品国产三级普通话版| 制服人妻中文乱码| 久久久水蜜桃国产精品网| 午夜日韩欧美国产| 久久久久久久精品吃奶| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 三级毛片av免费| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 88av欧美| netflix在线观看网站| 91在线精品国自产拍蜜月 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久久国产a免费观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲精华国产精华精| 国产一级毛片七仙女欲春2| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久国产成人免费| 久久香蕉精品热| 精品一区二区三区视频在线 | 国产精品精品国产色婷婷| 少妇熟女aⅴ在线视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日本免费一区二区三区高清不卡| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 男女那种视频在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 又紧又爽又黄一区二区| 午夜精品久久久久久毛片777| 最好的美女福利视频网| 日韩欧美在线二视频| 国产高清视频在线观看网站| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产精品 国内视频| 我的老师免费观看完整版| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 99热这里只有是精品50| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲色图av天堂| 国产亚洲av嫩草精品影院| 精品电影一区二区在线| 老司机福利观看| 99热只有精品国产| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲精华国产精华精| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久草成人影院| 国产欧美日韩一区二区三| 国产精品野战在线观看| 国产成人精品无人区| 成年女人看的毛片在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 国产主播在线观看一区二区| 免费在线观看日本一区| 国产黄色小视频在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 无人区码免费观看不卡| 日本 av在线| 精品国内亚洲2022精品成人| 日本a在线网址| 动漫黄色视频在线观看| 国产97色在线日韩免费| 在线永久观看黄色视频| 中文字幕av在线有码专区| cao死你这个sao货| 一区二区三区高清视频在线| 又爽又黄无遮挡网站| 免费电影在线观看免费观看| 久久久久久久久中文| 夜夜爽天天搞| 18禁观看日本| 亚洲男人的天堂狠狠| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲国产精品久久男人天堂| 成人特级av手机在线观看| 精品福利观看| 熟女人妻精品中文字幕| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 日日夜夜操网爽| 狠狠狠狠99中文字幕| 身体一侧抽搐| 少妇的丰满在线观看| 88av欧美| 超碰成人久久| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久久久久人人人人人| 国产激情久久老熟女| 久久久水蜜桃国产精品网| 国内精品一区二区在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 啦啦啦免费观看视频1| 精品国产乱子伦一区二区三区| 听说在线观看完整版免费高清| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 精品一区二区三区四区五区乱码| 草草在线视频免费看| 一区二区三区国产精品乱码| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久久久亚洲av毛片大全| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 成人特级av手机在线观看| 免费av不卡在线播放| 久久这里只有精品19| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 观看免费一级毛片| 免费观看人在逋| 国产极品精品免费视频能看的| 国产单亲对白刺激| 国产av不卡久久| 国产毛片a区久久久久| 成人性生交大片免费视频hd| 热99在线观看视频| 中文字幕av在线有码专区| 成人无遮挡网站| 日本与韩国留学比较| 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩欧美免费精品| 我的老师免费观看完整版| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产一区二区激情短视频| 婷婷精品国产亚洲av| 99热6这里只有精品| 国产私拍福利视频在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久9热在线精品视频| 国产一区二区在线观看日韩 | 又黄又爽又免费观看的视频| 可以在线观看的亚洲视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美高清成人免费视频www| 一本久久中文字幕| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品久久久久久久电影 | 色老头精品视频在线观看| 久久久色成人| 亚洲片人在线观看| 在线国产一区二区在线| 俺也久久电影网| 亚洲成人中文字幕在线播放| 99久久精品一区二区三区| 免费看十八禁软件| 亚洲成人精品中文字幕电影| 精品国内亚洲2022精品成人| 天天躁日日操中文字幕| 男女午夜视频在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲黑人精品在线| 国产三级中文精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 69av精品久久久久久| 国产精品影院久久| 男女那种视频在线观看| 69av精品久久久久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| xxx96com| av视频在线观看入口| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久人妻av系列| 成人午夜高清在线视频| 97碰自拍视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩av在线大香蕉| 午夜视频精品福利| 中文字幕最新亚洲高清| 狠狠狠狠99中文字幕| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲黑人精品在线| 久久人人精品亚洲av| 成人欧美大片| 一本久久中文字幕| 男人舔女人下体高潮全视频| 91九色精品人成在线观看|