不同因素對(duì)胚胎生產(chǎn)效率的影響

奧旭東 ，陳大勇 ，石新宇 ，何杰輝 ，馬云慧 ，李建慧 ，王建國

（1.內(nèi)蒙古大學(xué)省部共建草原家畜生殖調(diào)控與繁育國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010021；2.內(nèi)蒙古賽諾草原羊業(yè)有限公司，內(nèi)蒙古 集寧區(qū) 011800；3.翁牛特旗農(nóng)牧業(yè)局，內(nèi)蒙古 翁牛特旗 024500）

現(xiàn)代繁殖生物技術(shù)是提高優(yōu)質(zhì)肉用種羊的利用率、縮短生產(chǎn)周期、加速良種肉羊擴(kuò)繁、促進(jìn)肉羊產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的必經(jīng)之路。超數(shù)排卵、腹腔鏡人工輸精、子宮角沖胚和胚胎移植等技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中得到了一定的推廣應(yīng)用，但目前還沒有完全達(dá)到產(chǎn)業(yè)化階段，這是因?yàn)樯鲜黾夹g(shù)比較復(fù)雜，影響因素比較多[1]。供、受體的個(gè)體和遺傳差異、生理生殖狀況、環(huán)境及營養(yǎng)狀況、不同超數(shù)排卵方案、不同的藥物和操作者的技術(shù)水平等[2-3]都可能影響胚胎移植的整個(gè)過程。

表1 供體羊手術(shù)沖胚次數(shù)不同對(duì)胚胎生產(chǎn)效率的影響 次，只，個(gè)

該研究選取2～3歲繁殖性能正常的經(jīng)產(chǎn)純種杜泊母羊作為供體，統(tǒng)一飼養(yǎng)管理，并使用相同的超數(shù)排卵和腹腔鏡輸精方案，系統(tǒng)地比較不同的操作人員、不同種公羊及不同手術(shù)沖胚次數(shù)（供體重復(fù)沖胚經(jīng)歷的手術(shù)次數(shù)）對(duì)供體羊胚胎生產(chǎn)效率的影響。通過對(duì)這些因素的比較分析為提高杜泊羊母羊的胚胎生產(chǎn)效率提供試驗(yàn)依據(jù)和經(jīng)驗(yàn)，同時(shí)也為提高企業(yè)胚胎移植規(guī)?；a(chǎn)效率及完善胚胎移植體系建設(shè)提供一些實(shí)踐指導(dǎo)。

1 材料

1.1 供體羊

選取2～3歲繁殖性能正常的經(jīng)產(chǎn)純種杜泊羊母羊作為供體羊，供體羊由內(nèi)蒙古賽諾草原羊業(yè)有限公司提供。

1.2 藥品

注射用血促性素（孕馬血清，PMSG）購自寧波第二激素廠；氯前列烯醇購自上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所；陰道海綿栓、胚胎保存液、O-FSH超數(shù)排卵藥、沖胚液全部為新西蘭進(jìn)口。

1.3 器械

主要器械有外科手術(shù)器械、手術(shù)保定架、體視顯微鏡、沖卵管、檢卵針、移植管等。

2 方法

2.1 供體羊超數(shù)排卵處理

在放置陰道海綿栓的第12天開始對(duì)供體羊進(jìn)行超數(shù)排卵處理。超數(shù)排卵處理采用遞減法連續(xù)肌肉注射超數(shù)排卵藥物O-FSH 4 d，每天上、下午肌肉注射各1次，總劑量為10 mL。超數(shù)排卵處理的第4天，即放置陰道海綿栓的第15天取出陰道海綿栓，同時(shí)用加雙抗（8×105IU青霉素+1×106IU鏈霉素）的生理鹽水沖洗供體羊的陰道。

2.2 供體羊試情、配種

取栓的第2天對(duì)供體羊進(jìn)行試情，對(duì)發(fā)情母羊于發(fā)情當(dāng)天進(jìn)行腹腔鏡輸精。

2.3 沖胚

沖胚操作由5位操作熟練的沖胚操作人員（A、B、C、D、E） 進(jìn)行。 于供體羊腹腔鏡輸精后 6～7.5 d采用手術(shù)法收集胚胎：將子宮暴露于創(chuàng)口表面后，用套有膠管的腸鉗夾在子宮角分叉處；使用注射器吸入預(yù)熱的沖卵液20～30 mL（每側(cè)用液50～60 mL），將鈍形沖卵針頭從子宮角尖端插入，確認(rèn)針頭在管腔內(nèi)且進(jìn)退通暢時(shí)，將硅膠管連接于注射器上，推注沖卵液；當(dāng)子宮角膨脹時(shí)，將回收卵針頭從腸鉗夾基部的上方迅速扎入，將沖卵液經(jīng)硅膠管收集于杯內(nèi)；最后用拇指和食指將子宮角捋一遍。另一側(cè)子宮角用同樣方法沖洗。

2.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和顯著性檢驗(yàn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 供體羊手術(shù)沖胚次數(shù)對(duì)胚胎生產(chǎn)效率的影響

供體羊的手術(shù)沖胚次數(shù)對(duì)于胚胎生產(chǎn)效率具有明顯的影響。第5次手術(shù)沖胚，供體羊所獲的平均沖胚數(shù)和平均可用胚數(shù)顯著（P＜0.05）低于其他組（見表 1）。

3.2 種公羊?qū)ε咛ドa(chǎn)效率的影響

由表2可以看出，種公羊不同對(duì)于胚胎生產(chǎn)效率是有影響的。種公羊317的平均沖胚數(shù)為4.38個(gè)，平均可用胚數(shù)為4.11個(gè)；而種公羊D1402的平均沖胚數(shù)為5.44個(gè)，平均可用胚數(shù)為3.88個(gè)。同一種公羊配種不同手術(shù)沖胚次數(shù)的杜泊母羊?qū)ε咛ドa(chǎn)效率的影響與供體羊不同手術(shù)沖胚次數(shù)對(duì)胚胎生產(chǎn)效率的影響相同：第5次手術(shù)沖胚供體羊所獲得的平均沖胚數(shù)和平均可用胚數(shù)顯著低于其他組（P＜0.05）。

表2 種公羊不同對(duì)供體胚胎生產(chǎn)效率的影響 次，只，個(gè)

表3 沖胚操作人員不同對(duì)胚胎生產(chǎn)效率的影響 只，個(gè)

3.3 沖胚操作人員對(duì)胚胎生產(chǎn)效率的影響

由表 3 可以看出，A、B、C、D、E 5 位操作熟練的沖胚操作人員所獲得的平均沖胚數(shù)和平均可用胚數(shù)沒有顯著性差異（P＞0.05）。

4 討論與結(jié)論

超數(shù)排卵、人工輸精、胚胎移植等現(xiàn)代繁殖技術(shù)應(yīng)用于肉羊的規(guī)?；a(chǎn)，不僅提高了種畜的使用效率，縮短了優(yōu)良種畜擴(kuò)繁的周期，而且極大地提高了企業(yè)生產(chǎn)效率，同時(shí)也為企業(yè)帶來了豐厚的收益。

對(duì)優(yōu)良種母畜進(jìn)行重復(fù)超數(shù)排卵，是充分挖掘良種母畜的遺傳潛力和向肉羊產(chǎn)業(yè)提供大量優(yōu)質(zhì)胚胎的重要手段[4]。該研究對(duì)杜泊羊母羊進(jìn)行重復(fù)超數(shù)排卵處理并進(jìn)行手術(shù)沖胚，結(jié)果表明，第5次手術(shù)沖胚處理的杜泊羊母羊所獲的平均回收胚胎數(shù)和平均可用胚數(shù)顯著低于其他組 （P＜0.05），這與 Ptak 等[5]報(bào)道的羊卵巢卵泡的反應(yīng)能力隨超數(shù)排卵重復(fù)次數(shù)增加而下降相一致。通常，供體羊經(jīng)過手術(shù)沖胚后，會(huì)發(fā)生一定比例的手術(shù)粘連，而粘連不但影響羊的生理狀況，還會(huì)對(duì)供體的排卵和盆腔環(huán)境造成一定的影響而影響其生殖性能[6-7]。該研究結(jié)果也在提示手術(shù)次數(shù)過高的供體，應(yīng)該積極淘汰，不能再用于沖胚，否則會(huì)增加生產(chǎn)成本和降低生產(chǎn)效率。

種公羊不同也會(huì)對(duì)胚胎生產(chǎn)效率造成很大的影響[6]，因此，通過對(duì)不同種公羊沖胚結(jié)果的統(tǒng)計(jì)，可以對(duì)種公羊的繁殖機(jī)能進(jìn)行評(píng)估，對(duì)之后的生產(chǎn)起到很重要的指導(dǎo)作用。這也提示，在規(guī)?；a(chǎn)中，需要對(duì)不同種公羊進(jìn)行評(píng)估，選取優(yōu)良種公羊利用，可以在很大程度上提高生產(chǎn)效率和收益。

胚胎移植過程中的每一個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)，與最后得到的結(jié)果都息息相關(guān)，因此，需要對(duì)生產(chǎn)過程中的細(xì)節(jié)做到嚴(yán)格把控。對(duì)企業(yè)的規(guī)?；a(chǎn)來說，需要大量的胚胎操作人員，他們對(duì)胚胎移植技術(shù)的掌握程度，直接關(guān)系到胚胎移植的成敗[6-7]。因此，在規(guī)?；纳a(chǎn)過程中，通過對(duì)不同人員的胚胎移植操作情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有助于了解操作人員的技術(shù)水平，并區(qū)分不同的操作水平。該研究中，5名操作人員所獲得的沖胚數(shù)和平均可用胚數(shù)沒有顯著差別，技術(shù)水平相當(dāng)，并且比較穩(wěn)定，都可以參與到今后的生產(chǎn)中。除此之外，供體羊的生理、生殖狀況也是影響胚胎移植的關(guān)鍵因素。

該研究以企業(yè)為依托，研究了不同操作人員、不同種公羊、不同手術(shù)沖胚次數(shù)等對(duì)供體羊胚胎生產(chǎn)效率的影響，不僅有助于企業(yè)自身規(guī)?；a(chǎn)效益的提高，也為羊胚胎移植技術(shù)體系的完善提供一定參考。