非小細胞肺癌治療中EGFR與VEGFR—2的臨床意義及相關(guān)性分析

顧晶晶 李珂珂

摘要 目的：探討非小細胞肺癌治療中EGFR與VEGFR-2的臨床意義及相關(guān)性。方法：收治非小細胞癌癥患者60例，記錄其年齡、性別、吸煙史、分化程度、病理類型等信息，通過液相芯片技術(shù)分析基因突變及VEGFR-2和EGFR水平。結(jié)果：EGFR基因19外顯因子突變和患者吸煙史有關(guān)，而EGFR基因21外顯因子突變和患者的病理類型、分化程度均有關(guān)，EGFE基因和VEGFR-2基因表達水平與患者病理類型、分化程度相關(guān)，EGFR和VEGFR-2表達水平有顯著相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論：對非小細胞肺癌治療中EGFR和VEGFR-2的相關(guān)性研究，對臨床治療和借鑒有非常重要的意義。

關(guān)鍵詞 非小細胞肺癌；EGFR；VEGFR-2；相關(guān)性

非小細胞肺癌有其特有的性質(zhì)與特征，有諸多的相關(guān)因素，對其展開的臨床治療也應(yīng)該從各個相關(guān)因素分析研究而攻破，對癥下藥，才能提高整體的治療效果以達到預(yù)期目標[1]。

資料與方法

2015年1月-2016年6月收治非小細胞肺癌患者60例。所有患者均沒有接受過靶向治療或放化療等抗癌治療，有完整的入院診斷資料，無其他合并腫瘤疾病情況。其中男33例，女27例，年齡<60歲者39例，>60歲者21例；16例患者有吸煙史；包括腺癌51例，鱗癌5例，腺鱗癌2例，大細胞癌l例和神經(jīng)內(nèi)分泌癌l例；有7例腫瘤細胞低分化患者，35例中分化患者以及18例高分化患者；根據(jù)2009年美國癌癥聯(lián)合委員會及國際抗癌聯(lián)盟聯(lián)合制定的分期標準判定TNM分期I期39例，Ⅱ期7例，Ⅲ期14例。

研究方法：①提取DNA：采用DNA提取試劑盒，提取組織切片標本基因組DNA，再采用分光廣度定量DNA濃度，確保樣本的濃度> 20ng/υL且總量>200ng。②聚合酶鏈式反應(yīng)預(yù)擴增：委托相關(guān)單位合成引物，進行聚合酶鏈式反應(yīng)預(yù)擴增，得到目標基因片段。具體過程為在95℃條件下預(yù)變性3min，94℃條件下變性30s，56℃條件下退火30s，72℃條件下反復(fù)延伸35次30s，最終保持72℃條件下延伸10min，存放于4℃條件環(huán)境下。③消化處理：通過核酸外切酶酶切和堿性磷酸酶水解，將多余引物與核苷酸消除，預(yù)防與其他物質(zhì)結(jié)合。加入PCR擴增產(chǎn)物到PCR管內(nèi)，對應(yīng)反應(yīng)參數(shù)為37℃條件下持續(xù)30min，80℃條件下持續(xù)20min，存放4℃環(huán)境中[2]。④等位基因特異引物延伸反應(yīng)：根據(jù)特定性序列能特異識別方法對等位基因型進行識別，確保延伸引物能與酶切產(chǎn)物結(jié)合并形成延伸產(chǎn)物。具體步驟：96℃條件下預(yù)變性2min，打開DNA雙鏈，94℃條件下變陛30s，52℃條件下退火lmin，74℃條件下延伸2min，依次進行40次。⑤雜交反應(yīng)：混合微球與雜交液混合液30s，確保其充分混合后放入96孔板當(dāng)中，加入ASPE產(chǎn)物產(chǎn)生雜交反應(yīng)，再加入SA-PE孵育，確保引物的Tag序列標簽和聚苯乙烯微球的Anti-Tag序列互補配對。⑥讀取數(shù)據(jù)：采用Lummex閱讀儀讀取和分析數(shù)據(jù)，根據(jù)樣品中位熒光值確定基因突變的情況。最后還要采用分支-DNA液相芯片法檢測組織樣品的基因表達水平。

統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理分析，建立并錄入數(shù)據(jù)信息到數(shù)據(jù)庫，采用X2檢驗基因突變與臨床因素之間的關(guān)系，基因表達關(guān)系系數(shù)通過R表示，分析與各因素間的相關(guān)程度，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

EGFR基因、VEGFR-2基因表達水平和患者的關(guān)系：ECFE基因和VECFR-2基因表達水平與患者病理類型、分化程度相關(guān)（P<0.05），見表l。

EGFR基因和VEGFR-2基因表達水平相關(guān)性分析：EGFR和VEGFR-2表達水平有顯著相關(guān)性（P<0.05），見表2。

討論

從相關(guān)性因素方面來看，有研究結(jié)果顯示發(fā)生EGFR突變在性別和病理類型方面差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義[3]，有女性突變高于男性的結(jié)論，非吸煙者的突變率比吸煙者的概率更高。在本研究顯示的數(shù)據(jù)為無吸煙史的患者發(fā)生基因突變的概率接近35%，而吸煙者僅6%，差距明顯，證實兩者之間存在相關(guān)性（P<0.05）。此外，突變因子還與患者的病理類型及分化程度有關(guān)（P<0.05），均在本研究中證實，但卻與患者性別無關(guān)，這是與其他研究者研究結(jié)果不相符的方面，原因可能與統(tǒng)計對象的基因突變亞型相關(guān)。

VECF即血管內(nèi)皮細胞生長因子在腫瘤血管生成過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。VECFR-2是受體VEGFR家族五大成員之一，其由激酶插入?yún)^(qū)受體基因編碼，于患者血管內(nèi)皮細胞與淋巴內(nèi)皮細胞中存在。不少研究均顯示其在介導(dǎo)VEGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致的腫瘤血管生成中發(fā)揮主導(dǎo)作用，此外還能對血管內(nèi)皮細胞增殖、誘導(dǎo)血管平滑肌細胞遷移以及血管構(gòu)建、加速基底膜水解等進行調(diào)控。此外，臨床還發(fā)現(xiàn)靶向藥物在其中應(yīng)用的重要性，為癌癥患者的治療提供了新的方向，將分子靶向藥物進行合理的聯(lián)用或許能為臨床帶來更好的效果，有所期待。

綜上所述，對于腫瘤生長而言，ECFR與VEGF信號通路都有著非常重要的作用，能為其臨床治療提供重要的借鑒價值和意義。

參考文獻

[1]肖旺.早期非小細胞肺癌ECFR/KRAS/BRAF突變的初步臨床研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2015.

[2]石丹.非小細胞肺癌EGFR突變與CST-π高表達與臨床參數(shù)的關(guān)系及預(yù)后[D].南昌大學(xué)，2013.

[3] 白曉燕.Hedgehog信號通路在EGFR-TKI敏感和耐藥非小細胞肺癌細胞中的作用機制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2013.