馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性監(jiān)測及替代藥劑防治效果

路粉，趙建江，劉曉蕓，孟潤杰，吳杰，韓秀英，王文橋

（1河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所/河北省農(nóng)業(yè)有害生物綜合防治工程技術(shù)研究中心/農(nóng)業(yè)部華北北部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗室，河北保定 071000；2保定職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河北保定 071051）

0 引言

【研究意義】致病疫霉（Phytophthora infestans）是引起晚疫病的專性寄生菌，可侵染馬鈴薯等多種茄科植物[1]。晚疫病是馬鈴薯生產(chǎn)上一種最具毀滅性的病害，在病害大暴發(fā)年份可以造成絕產(chǎn)[2]。目前，國內(nèi)外對馬鈴薯晚疫病的防治方法仍以化學(xué)農(nóng)藥為主[3-7]。以甲霜靈為代表的苯基酰胺類殺菌劑是一類對多種卵菌病害具有優(yōu)異防治效果、良好保護(hù)和治療作用的內(nèi)吸性殺菌劑[8]。明確我國北方單茬種植區(qū)馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈抗性發(fā)展動態(tài)及含苯基酰胺類殺菌劑混劑的防治效果，篩選高效藥劑，研究不同作用機(jī)理的高效藥劑交替使用對晚疫病的防治效果，對有效防治馬鈴薯晚疫病具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】馬鈴薯晚疫病菌是一種異宗配合病原菌，存在A1和A2兩種交配型，這兩種交配型在全球多數(shù)地區(qū)同時存在[9]。一旦該菌對某些藥劑產(chǎn)生抗性，抗性可穩(wěn)定遺傳，也可通過抗性菌株和敏感菌株之間以及不同交配型的抗性菌株之間雜交產(chǎn)生有抗性的A2交配型后代，使群體變得更加復(fù)雜，給病害防治帶來困難[10]。甲霜靈等苯基酰胺類殺菌劑曾被廣泛用于馬鈴薯晚疫病的防治，在其被商業(yè)化使用后不久，就檢測到馬鈴薯晚疫病菌、瓜類霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）、煙草黑脛病菌（Peronospora tabacina）和葡萄霜霉病菌（Plasmpopara viticola）的抗性菌株[10]。甲霜靈主要影響卵菌菌絲生長和吸器與孢子囊形成[11]，其作用機(jī)理是通過抑制RNA聚合酶活性干擾核糖體RNA合成。在大豆疫霉（Phytophthora sojae）菌絲體內(nèi)，核糖體RNA合成的聚合酶Ⅰ復(fù)合體被認(rèn)為是甲霜靈最初作用位點(diǎn)[12]。大多數(shù)情況下，辣椒疫霉（Phytophthora capcisi）、大豆疫霉和萵苣霜霉病菌（Bremia lactucae）對甲霜靈的抗性為不完全顯性單基因控制[13-17]，伴隨著藥劑防治效果的下降。而歐洲和墨西哥馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈抗性菌株與敏感菌株雜交一代的敏感性呈連續(xù)分布，表明抗性由一個不完全顯性基因和幾個微效連鎖基因控制[18]，對苯基酰胺類殺菌劑的抗性基因和基因組中的突變位點(diǎn)還不清晰。苯基酰胺類殺菌劑被認(rèn)為具有高度抗性風(fēng)險[19]，但經(jīng)過30年的大量使用，并未完全消滅敏感亞群體[20]。馬鈴薯晚疫病菌和葡萄霜霉病菌對甲霜靈的抗性菌株比率逐年和隨季節(jié)波動[21]。在一個生長季節(jié)內(nèi)，使用苯基酰胺類殺菌劑田間的抗性菌株比在未使用該類藥劑的田間增長更快，在季節(jié)末開始下降，下一個生長季節(jié)初的比率更低[10]。自2003年以來，西北歐（英國、法國、德國、比利時、荷蘭和瑞士）對苯基酰胺類殺菌劑的抗性菌株比率增至該類藥劑使用幾年后的65%—85%[22]，而在北歐（丹麥、瑞典、挪威、芬蘭）、以色列[23]、日本[24]抗性菌株比率很低。在我國，甲霜靈、精甲霜靈或 霜靈等苯基酰胺類殺菌劑與代森錳鋅等藥劑的混劑在河北、內(nèi)蒙古和吉林等北方一季作區(qū)被廣泛用于馬鈴薯晚疫病的防治。王文橋等[25]報道指出，2007—2009年河北、內(nèi)蒙古、遼寧、吉林和黑龍江等北方一季作區(qū)馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性普遍發(fā)生，發(fā)生區(qū)域廣，抗性水平高，導(dǎo)致苯基酰胺類殺菌劑與其他不同作用機(jī)理殺菌劑的混劑防治效果下降[26-28]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】隨著銀法利等更多新型殺菌劑的推廣應(yīng)用，我國北方地區(qū)馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性有何變化，抗性如何影響這類藥劑對馬鈴薯晚疫病防治效果，均未見研究報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】檢測2011—2016年河北、內(nèi)蒙古和吉林3個地區(qū)馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的敏感性，通過抗性頻率、抗性倍數(shù)、抗性指數(shù)及分布綜合分析抗性發(fā)展動態(tài)；通過田間藥效試驗，篩選可替代甲霜靈等苯基酰胺類殺菌劑的高效藥劑；評估高效藥劑交替使用對苯基酰胺類殺菌劑抗性普遍發(fā)生地區(qū)馬鈴薯晚疫病的防治效果，為制定馬鈴薯晚疫病菌抗藥性治理策略及馬鈴薯晚疫病的高效防治技術(shù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試馬鈴薯 馬鈴薯感病品種“費(fèi)烏瑞它”用于田間藥效試驗。

1.1.2 供試菌株 于 2011—2016年在河北省圍場縣、沽源縣、內(nèi)蒙古自治區(qū)錫盟、赤峰和呼倫貝爾以及吉林省松原、敦化等馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)的田塊采集新鮮馬鈴薯晚疫病病葉。每個樣本由3—5片病葉組成。將病葉夾入健康的馬鈴薯（感病品種）塊莖切口中，放入保溫箱帶回實(shí)驗室，置于光照培養(yǎng)箱18—20℃培養(yǎng)7—10 d。待塊莖切口處長出白色晚疫病菌霉層，在無菌操作條件下，用接種針挑取塊莖切口處的白色霉?fàn)钗?，接種至選擇性黑麥蔗糖瓊脂培養(yǎng)基上，再對菌株進(jìn)行單孢分離純化。每個?。ㄗ灾螀^(qū)）選2—3個市縣，每個市縣選擇3—5個馬鈴薯集中種植區(qū)，每個種植區(qū)至少間隔10 km，每個種植區(qū)從5個不同的地塊采集20—40個病樣。6年間共采集、分離到634個單孢菌株，其中從河北省圍場縣、沽源縣采集分離到237個單孢菌株，從內(nèi)蒙古采集分離到201個菌株，從吉林采集分離到196個菌株，10℃保存于指行管中的無菌黑麥粒上6個月。

1.1.3 供試藥劑 97%甲霜靈原藥，由沈陽化工研究院提供。將其用少量丙酮溶解，加入無菌水將甲霜靈制備成5 g·L-1母液，母液中丙酮含量不超過2%，置于 4℃冰箱中保存，用于馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈敏感性測定。25%甲霜靈SC，甘肅華實(shí)農(nóng)業(yè)科技有限公司；80%代森錳鋅WP（大生），美國陶氏益農(nóng)化工有限公司；68%精甲·錳鋅 WG（金雷）、64% 霜·錳鋅WP（殺毒礬）、26%氟噻唑吡乙酮·雙炔酰菌胺懸浮劑、16%氟噻唑吡乙酮·嘧菌酯 SC、440 g·L-1雙炔酰菌胺·百菌清 SC，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司；250 g·L-1嘧菌酯SC，先正達(dá)（蘇州）作物保護(hù)有限公司；50%氟醚菌酰胺WG（卡諾滋），山東省聯(lián)合農(nóng)藥工業(yè)有限公司；50%烯酰嗎啉WP（阿克白），巴斯夫歐洲公司；687.5 g·L-1氟菌·霜霉威SC（銀法利），德國拜耳作物科學(xué)公司；10%氟噻唑吡乙銅 OD（增威贏綠）、72%霜脲·錳鋅 WP（克露），美國杜邦公司；20%氟嗎啉WP，沈陽科創(chuàng)化學(xué)品有限公司。用于田間藥效試驗。1.1.4 供試培養(yǎng)基 黑麥蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（rye sucrose agar，RSA）：黑麥60 g，蔗糖20 g，瓊脂粉12 g，蒸餾水定容至1 L。選擇性黑麥蔗糖瓊脂培養(yǎng)基：將RSA溶化后冷卻至約50℃加入5 mg·L-1的利福平和100 mg·L-1的五氯硝基苯，混合均勻后潑碟。

1.2 菌株對藥劑敏感性測定及敏感型劃分

采用菌絲生長速率法測定馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的敏感性[25]。在無菌操作條件下，將保存在指行管中無菌黑麥粒上的菌株取出，接種在RSA培養(yǎng)基平板上，18—20℃黑暗培養(yǎng)至菌落長滿平板備用，用打孔器打取直徑0.5 cm的菌餅。將制備好的母液用無菌水進(jìn)行系列稀釋后，定量加入溶化后冷卻至約 50℃的RSA培養(yǎng)基中，混勻后倒入直徑6 cm的培養(yǎng)皿，每皿 10 mL，制成含甲霜靈1 000、500、250、125、62.5、31.25、15.6、7.8、3.9 mg·L-1的 RSA 培養(yǎng)基平板。以只含等量丙酮無菌水的RSA平板作為溶劑對照，以只含有等量無菌水的RSA平板作為空白對照。每個處理3皿，每皿中央接種1個菌餅后，置于18℃黑暗培養(yǎng)7—10 d，至無菌水對照菌落長滿培養(yǎng)皿時測量菌落直徑（cm）。采用十字交叉法測量菌落直徑，計算各藥劑濃度對菌絲生長抑制率，抑制率（%）=（對照菌落生長直徑-處理菌落生長直徑）/（對照菌落生長直徑-0.5）×100。通過DPS 7.05數(shù)據(jù)分析軟件，進(jìn)行藥劑濃度對數(shù)值（x）與抑制率轉(zhuǎn)對應(yīng)的機(jī)率值（y）之間的線性回歸分析，求出毒力回歸方程y=bx+a、相關(guān)系數(shù)（r）及有效抑制中濃度（EC50）。按照“馬鈴薯晚疫病菌抗藥性檢測技術(shù)規(guī)程（DB13FF1420—2011）”的分級標(biāo)準(zhǔn)[29]劃分晚疫病菌各菌株對供試藥劑的抗性等級，并參照該標(biāo)準(zhǔn)中公布的馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的敏感基線（0.0052±0.0024 μg·mL-1）計算抗性倍數(shù)，參考ZHAO等[30]的方法計算抗性指數(shù)（RI）。將菌株劃分成1級，敏感菌株：抗性倍數(shù)≤敏感基線的 95%置信限上限/敏感基線；2級，低抗菌株：敏感基線的 95%置信限上限/敏感基線＜抗性倍數(shù)≤100；3級，中抗菌株：100＜抗性倍數(shù)≤500；4級，高抗菌株：抗性倍數(shù)＞500?？剐员稊?shù)=敏感性（EC50）/敏感基線（EC50）；抗性菌株頻率（%）=（抗性菌株數(shù)/供試菌株數(shù)）×100；抗性指數(shù)（RI）=∑（不同抗性菌株所占百分率×相對級數(shù)）/（最高級數(shù)×100）。

1.3 田間藥效試驗篩選甲霜靈高效替代藥劑

2016—2017年在河北省圍場滿族蒙古族自治縣克勒溝鎮(zhèn)狍子溝村，進(jìn)行不同殺菌劑防治馬鈴薯晚疫病的田間藥效試驗。在晚疫病零星發(fā)生時開始按照試驗1和試驗2的用藥流程用藥，間隔期7—10 d，共用藥4次。采用3WBD-20型電動噴霧器葉面噴霧，噴霧要均勻，施藥量900 L·hm-2。每個試驗的每個處理設(shè)4次重復(fù)。小區(qū)面積為100 m2，采用隨機(jī)區(qū)組排列。

試驗1：64% 霜·錳鋅WP（殺毒礬）864、1 152、1 440 g a.i./hm2；80%代森錳鋅WP（大生）1 920 g a.i./hm2；68%精甲·錳鋅WG（金雷）1 224 g a.i./hm2；25%甲霜靈SC 300 g a.i./hm2；50%氟醚菌酰胺WG（卡諾滋）180 g a.i./hm2；10%氟噻唑吡乙酮OD（增威贏綠）25 g a.i./hm2；50%烯酰嗎啉WP（阿克白）300 g a.i./hm2；687.5 g·L-1氟菌·霜霉威 SC（銀法利）1 031 g a.i./hm2。設(shè)清水對照。

試驗 2：64% 霜·錳鋅 WP（殺毒礬）1 440 g a.i./hm2；68%精甲·錳鋅WG（金雷）1 224 g a.i./hm2；80%代森錳鋅WP（大生）1 920 g a.i./hm2；10%氟噻唑吡乙酮OD 25 g a.i./hm2；16%氟噻唑吡乙酮·嘧菌酯SC 136、161.5、187 g a.i./hm2；250 g·L-1嘧菌酯 SC（阿米西達(dá)）150 g a.i /hm2；26%氟噻唑吡乙酮·雙炔酰菌胺 SC 126、147、168 g a.i /hm2；440 g·L-1雙炔酰菌胺·百菌清SC 825 g a.i /hm2。設(shè)清水對照。

1.4 田間交替施藥方法

根據(jù)抗藥性監(jiān)測及田間藥效試驗結(jié)果，確定苯基酰胺類殺菌劑的替代藥劑，制定替代藥劑交替使用防控晚疫病的流程。2017年在河北省圍場縣銀窩溝鄉(xiāng)銀鎮(zhèn)村和圍場縣腰站鄉(xiāng)下三合義村分別按照表1和表2中兩種流程進(jìn)行交替施藥。

高效替代藥劑交替使用區(qū)：在馬鈴薯晚疫病發(fā)生前用代森錳鋅和嘧菌酯進(jìn)行預(yù)防。在晚疫病零星發(fā)生時即發(fā)病中心初現(xiàn)后，選擇氟嗎啉、銀法利、烯酰嗎啉和增威贏綠等作用機(jī)理不同于甲霜靈的高效內(nèi)吸劑交替施用。共用藥5—6次，間隔期7—10 d，視天氣情況和田間發(fā)病程度而調(diào)整。

常規(guī)藥劑交替使用區(qū)：在馬鈴薯晚疫病發(fā)生前用保護(hù)劑代森錳鋅和金雷進(jìn)行預(yù)防。發(fā)病中心初現(xiàn)后用金雷或殺毒礬等苯基酰胺類殺菌劑與 72%霜脲·錳鋅WP（克露）進(jìn)行交替噴施，共用藥6次，間隔期7 d。

清水對照區(qū)：選擇用清水進(jìn)行噴施。

表1 河北省圍場縣銀窩溝鄉(xiāng)銀鎮(zhèn)村馬鈴薯晚疫病交替用藥防控流程Table 1 Fungicide application programs for potato late blight in Yinzhen Village, Yinwogou Town, Weichang County, Hebei Province

表2 河北省圍場縣腰站鄉(xiāng)下三合義村馬鈴薯晚疫病交替用藥防控流程Table 2 Fungicide application programs for potato late blight in Sanheyi Village, Yaozhan Town, Weichang County, Hebei Province

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

按照“《農(nóng)藥田間藥效試驗準(zhǔn)則（一）殺菌劑防治馬鈴薯晚疫病》（GB/T17980.34—2000）”的標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查病情：0級（無病斑）；1級（病斑面積 5%以下）；3級（病斑面積6%—10%）；5級（病斑面積11%—25%）；7級（病斑面積26%—50%）；9級（病斑面積50%以上）分級。首次施藥前未發(fā)病，病情基數(shù)記為零。根據(jù)以上分級方法記錄各處理病情，計算病情指數(shù)與防治效果。對高效藥劑交替施藥區(qū)、常規(guī)藥劑交替施藥區(qū)及清水對照區(qū)分別取樣測產(chǎn)，2016—2017年9月15日收獲時每種施藥區(qū)或清水對照區(qū)均5點(diǎn)取樣，每點(diǎn)收獲2株馬鈴薯，5點(diǎn)共收獲10株馬鈴薯，占地2.2 m2，稱量薯重，計算畝產(chǎn)量及增產(chǎn)率。數(shù)據(jù)采用DPS 7.05軟件進(jìn)行分析，采用最小顯著性差異法（LSD）對田間試驗各處理防治效果之間進(jìn)行差異顯著性檢驗。

病葉率（%）＝（病葉數(shù)/調(diào)查總?cè)~數(shù)）×100；病情指數(shù)=[∑（各級病葉數(shù)×相應(yīng)病級數(shù)）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高發(fā)病級數(shù)）]×100；防治效果（%）=[（對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對照病情指數(shù)]×100；畝產(chǎn)量（kg）=調(diào)查馬鈴薯產(chǎn)量×667 m2/調(diào)查面積；增產(chǎn)率（%）=[（處理畝產(chǎn)量-對照畝產(chǎn)量）／對照畝產(chǎn)量]×100。

2 結(jié)果

2.1 馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的敏感性檢測

2011—2016年自河北、吉林和內(nèi)蒙古采集分離的634株晚疫病菌中，對甲霜靈抗性菌株占100%，平均抗性倍數(shù)為34 934，抗性指數(shù)為0.97。2011年和2012年檢測的菌株為中抗菌株或高抗菌株，2013—2016年檢測的菌株均為高抗菌株。就監(jiān)測年份而言，2011年馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性指數(shù)為0.89，2012年升至0.94，2013—2016年升至1.00。2011年檢測的菌株對甲霜靈的平均抗性倍數(shù)為25 358，2012年升至31 285，2013年升至38 419，2014年略降至38 038，2015年升至41 406，2016年降至35 125，表明不同年份的平均抗性倍數(shù)均很高，有波動但幅度未超過一倍（表3）。就地區(qū)而言，河北地區(qū)在2011年和2012年檢測到的高抗菌株比率分別為 40.0%和 67.7%，明顯低于內(nèi)蒙和吉林地區(qū)的高抗菌株比率，2013—2016年3個地區(qū)檢測的菌株均為高抗菌株。這種地區(qū)差異可能是由于河北省壩上地區(qū)使用苯基酰胺類殺菌劑較少，抗藥性選擇壓較低引起的。

表3 2011—2016年不同地區(qū)馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性動態(tài)Table 3 The dynamics of resistance to metalaxyl of P. infestans from 2011-2016 in different regions

2.2 可替代甲霜靈防治馬鈴薯晚疫病的高效藥劑篩選

按照推薦劑量進(jìn)行田間藥劑噴施的藥效試驗結(jié)果表明，25%甲霜靈 SC對馬鈴薯晚疫病的防治效果很差（僅 37%）。68%精甲·錳鋅 WG（金雷）及 64% 霜·錳鋅WP（殺毒礬）的防治效果顯著低于80%代森錳鋅 WP（大生）的防治效果。其中甲霜靈和 霜靈的防治作用很差，主要由代森錳鋅起作用。50%氟醚菌酰胺WG（卡諾滋）、10%氟噻唑吡乙酮OD（增威贏綠）、50%烯酰嗎啉WP（阿克白）和687.5 g·L-1氟菌·霜霉威SC（銀法利）對晚疫病具有80%以上的防治效果，顯著高于 68%精甲·錳鋅 WG（金雷）、64% 霜·錳鋅WP（殺毒礬）和25%甲霜靈SC這3種苯基酰胺類殺菌劑的田間防治效果（表4）。16%氟噻唑吡乙酮·嘧菌酯SC、26%氟噻唑吡乙酮·雙炔酰菌胺SC、250 g·L-1嘧菌酯 SC（阿米西達(dá)）和 440 g·L-1雙炔酰菌胺·百菌清SC的防治效果均達(dá)到80%以上，顯著高于68%精甲·錳鋅WG（金雷）、64% 霜·錳鋅WP（殺毒礬）及80%代森錳鋅WP（大生）等常規(guī)防治藥劑的防治效果（表5）。

表4 3種苯基酰胺類殺菌劑及其他4種殺菌劑對馬鈴薯晚疫病的防治效果（2016年）Table 4 The control efficacy of three phenylamide fungicides and the other four fungicides against potato late blight (2016)

2.3 高效替代藥劑交替使用的防病效果

在河北省圍場縣銀窩溝鄉(xiāng)銀鎮(zhèn)村和圍場縣腰站鄉(xiāng)下三合義村，分別按照表1和表2中兩種流程不同的殺菌劑交替噴施5—6次。結(jié)果表明，在銀窩溝鄉(xiāng)銀鎮(zhèn)村和腰站鄉(xiāng)下三合義村的未用藥區(qū)，晚疫病發(fā)生顯著重于高效替代藥劑交替用藥區(qū)和常規(guī)藥劑交替使用區(qū)，造成大量葉片干枯和爛薯。病葉率分別為 80.4%和 76.2%，明顯高于高效替代藥劑交替用藥區(qū)和常規(guī)藥劑交替使用區(qū)。塊莖產(chǎn)量顯著低于高效替代藥劑交替用藥區(qū)和常規(guī)藥劑交替使用區(qū)。在使用80%代森錳鋅WP（大生）200 g/667 m2、68%精甲·錳鋅WG（金雷）120 g/667 m2或64% 霜·錳鋅WP（殺毒礬）200 g/667 m2、72%霜脲·錳鋅WP（克露）150 g/667 m2等常規(guī)藥劑交替使用區(qū)發(fā)病顯著重于代森錳鋅、嘧菌酯及氟嗎啉、銀法利、增威贏綠、烯酰嗎啉等與甲霜靈無交互抗性的高效替代藥劑交替用藥區(qū)，防治效果分別為 50.6%和 47.8%。在高效替代藥劑交替用藥區(qū)防治效果（分別為90.5%和88.3%）較高（表6、表 7），病情較輕，爛薯明顯少于常規(guī)藥劑交替用藥區(qū)，有效控制了晚疫病發(fā)展。在銀窩溝鄉(xiāng)銀鎮(zhèn)村和腰站鄉(xiāng)下三合義村，常規(guī)藥劑交替防治區(qū)馬鈴薯畝產(chǎn)量分別為2 106和2 177 kg，比空白對照區(qū)增產(chǎn)36.7%和 40.8%。高效替代藥劑交替用藥區(qū)馬鈴薯畝產(chǎn)量分別為3 755和3 580 kg，比空白對照區(qū)增產(chǎn)143.7%和131.6%，比常規(guī)藥劑交替噴施區(qū)增產(chǎn) 64.4%—78.3%（表6、表7）。

表5 8種殺菌劑對馬鈴薯晚疫病的田間防治效果Table 5 The control efficacy of eight fungicides against potato late blight in the field

表6 交替用藥防治馬鈴薯晚疫病及增產(chǎn)效果（河北省圍場縣銀窩溝鄉(xiāng)銀鎮(zhèn)村）Table 6 The control efficacy and yield increase effect of fungicide alternate application programs for control of potato late blight(Yinzhen Village, Yinwogou Town, Weichang County, Hebei Province)

表7 交替用藥防治馬鈴薯晚疫病及增產(chǎn)效果（河北省圍場縣腰站鄉(xiāng)下三合義村）Table 7 The control efficacy and yield increase effect of fungicide alternate application programs for control of potato late blight(Sanheyi Village, Yaozhan Town, Weichang County, Hebei Province)

3 討論

晚疫病是馬鈴薯上的主要病害之一，主要依靠化學(xué)藥劑進(jìn)行防治。除了幾種含苯基酰胺類殺菌劑的混劑外，還有多作用位點(diǎn)保護(hù)劑（代森類、銅制劑）、霜脲氰混劑、羧酸酰胺類殺菌劑、QoI類殺菌劑（嘧菌酯及其混劑、吡唑醚菌酯及其混劑、 唑菌酮混劑）、氟吡菌胺·霜霉威、苯酰菌胺·錳鋅、氟噻唑吡乙酮及其混劑等內(nèi)吸劑。20世紀(jì)80年代以來，甲霜靈、精甲霜靈和 霜靈等苯基酰胺類殺菌劑被普遍用于防治馬鈴薯晚疫病后不久，馬鈴薯晚疫病菌即對其產(chǎn)生抗性，導(dǎo)致該類藥劑防效降低[31]。但是，該藥與代森錳鋅等藥劑的混劑仍在生產(chǎn)中廣泛用于馬鈴薯晚疫病的防治，這可能是因為混劑中含有的代森錳鋅等非苯基酰胺類殺菌劑有效成分掩蓋了晚疫病菌對苯基酰胺類殺菌劑的抗性。本研究也證明了68%精甲·錳鋅WG的防效不如代森錳鋅。王文橋等[25]報道了河北省壩上地區(qū)2007—2009年馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈抗性頻率依次為100%、66.4%和74.2%，內(nèi)蒙古2008年抗性頻率為81.8%，吉林2008年和2009年抗性頻率分別為63%和 90.7%，但沒有從抗性倍數(shù)和抗性指數(shù)兩方面來評估抗性程度。本研究評估了2011—2016年河北、內(nèi)蒙古和吉林馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性頻率、抗性倍數(shù)及抗性指數(shù)，發(fā)現(xiàn)三地每年抗性頻率均高達(dá)100%。平均抗性倍數(shù)從2011年的25 358遞增至2015年的41 406，又降至2016年的35 125，先逐年遞增又略有下降?？剐灾笖?shù)從2011年和2012年的0.89和0.94，遞增至2013—2016年的1.00。以上結(jié)果證明河北、內(nèi)蒙古和吉林抗性菌株頻率有所增加，抗性普遍發(fā)生。苯基酰胺類殺菌劑對馬鈴薯晚疫病防治效果很差，甚至低于代森錳鋅的防治效果，這與王麗等[32]研究結(jié)果一致。與2007—2009年相比，河北、內(nèi)蒙古、吉林馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)晚疫病菌對甲霜靈的抗性依然嚴(yán)重，可能與近些年含精甲·錳鋅、甲霜·錳鋅、 霜·錳鋅等苯基酰胺類殺菌劑仍在普遍使用（每個生長季節(jié)拌種1次、噴施1—2次）及抗性菌株的競爭力強(qiáng)于敏感菌株有關(guān)[23]。

殺菌劑抗性行動委員會（FRAC）將馬鈴薯晚疫病菌認(rèn)定為高抗性風(fēng)險的病原菌[33]。國際上植物病原菌抗藥性治理對策包括：篩選新作用機(jī)理的藥劑，并進(jìn)行交替或混合使用；停止單獨(dú)使用有抗性問題的藥劑；加強(qiáng)田間抗性監(jiān)測，及時掌握田間抗性發(fā)展動態(tài)；在病害預(yù)測預(yù)報及田間病情監(jiān)測的基礎(chǔ)上，將不同作用機(jī)理的殺菌劑進(jìn)行交替或混合使用，選擇合適的殺菌劑品種、施藥時機(jī)、施藥劑量及施藥間隔期，進(jìn)行精準(zhǔn)用藥，以減輕藥劑對病原菌群體的選擇壓力；按照推薦劑量和間隔期施藥，避免在發(fā)病較重時鏟除性施藥；控制一個生育期內(nèi)相同作用機(jī)理藥劑的使用次數(shù)，避免單一重復(fù)用藥；提倡綜合防治，避免抗性問題加重[34]。

本研究選擇馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈普遍產(chǎn)生高抗的河北、內(nèi)蒙古和吉林馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)，篩選高效替代藥劑。在發(fā)病前選用保護(hù)劑，在發(fā)病初選擇作用機(jī)理不同的高效內(nèi)吸替代殺菌劑進(jìn)行交替施藥，對抗性菌株為優(yōu)勢亞群體的晚疫病菌具有良好的防治效果。在交替噴施的藥劑中，代森錳鋅為多作用位點(diǎn)殺菌劑；QoI類殺菌劑嘧菌酯為線粒體呼吸抑制劑；羧酸酰胺類殺菌劑烯酰嗎啉為卵菌細(xì)胞壁纖維素合霉抑制劑[35]；新殺菌劑氟噻唑吡乙酮為卵菌氧化固醇結(jié)合蛋白抑制劑[36]；氟吡菌胺對卵菌有較強(qiáng)抑制，為與卵菌細(xì)胞骨架相關(guān)的類血影蛋白抑制劑[37]。目前國內(nèi)外尚無馬鈴薯晚疫病菌對上述藥劑抗性發(fā)生的報道。

為了對甲霜靈抗性嚴(yán)重發(fā)生地區(qū)的馬鈴薯晚疫病進(jìn)行高效防控，建議繼續(xù)監(jiān)測馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈等苯基酰胺類殺菌劑的抗性，在敏感性恢復(fù)前停止單獨(dú)使用苯基酰胺類殺菌劑。在晚疫病預(yù)測預(yù)報基礎(chǔ)上，將代森錳鋅、嘧菌酯、烯酰嗎啉、氟噻唑吡乙酮、氟吡菌胺·霜霉威等藥劑作為甲霜靈替代藥劑進(jìn)行交替使用。對馬鈴薯晚疫病進(jìn)行高效精準(zhǔn)減量綜合防治，應(yīng)結(jié)合利用抗病性品種和晚疫病預(yù)測預(yù)報系統(tǒng)，在發(fā)病前使用代森錳鋅、嘧菌酯等多作用位點(diǎn)保護(hù)藥劑進(jìn)行預(yù)防；在發(fā)病初期，根據(jù)抗藥性監(jiān)測和田間藥效試驗篩選結(jié)果，選擇烯酰嗎啉、氟噻唑吡乙酮、氟吡菌胺·霜霉威等尚未發(fā)生抗藥性問題、具有不同作用機(jī)理的高效內(nèi)吸劑作為苯基酰胺類殺菌劑的替代藥劑交替使用，限制一個生長季節(jié)內(nèi)同種高風(fēng)險內(nèi)吸劑使用不超過2次。50%氟醚菌酰胺WG、16%氟噻唑吡乙酮·嘧菌酯SC和26%氟噻唑吡乙酮·雙炔酰菌胺SC等其他高效藥劑，也可組裝進(jìn)交替用藥流程中。

4 結(jié)論

河北壩上地區(qū)、內(nèi)蒙古錫盟、赤峰、呼倫貝爾和吉林松原、敦化等單茬馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)晚疫病菌對甲霜靈普遍產(chǎn)生抗性且抗性程度和頻率無明顯下降，是甲霜靈、精甲·錳鋅和 霜·錳鋅等苯基酰胺類殺菌劑單劑或混劑防效差的重要原因。250 g·L-1嘧菌酯SC、50%烯酰嗎啉 WP、50%氟嗎啉 WP、10%氟噻唑吡乙酮OD、50%氟醚菌酰胺WG、687.5 g·L-1氟吡菌胺·霜霉威SC、16%氟噻唑吡乙酮·嘧菌酯SC和26%氟噻唑吡乙酮·雙炔酰菌胺SC等內(nèi)吸殺菌劑在馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈抗性嚴(yán)重發(fā)生地區(qū)使用具有良好的防治效果，可作為甲霜靈等苯基酰胺類殺菌劑的替代藥劑。將多作用位點(diǎn)、廣譜、保護(hù)性殺菌劑代森錳鋅與高效內(nèi)吸劑嘧菌酯、烯酰嗎啉或氟嗎啉、氟噻唑吡乙酮、氟吡菌胺·霜霉威等交替噴施，對甲霜靈等苯基酰胺類殺菌劑抗性普遍發(fā)生地區(qū)的馬鈴薯晚疫病也表現(xiàn)出良好的防治效果，且對馬鈴薯塊莖增產(chǎn)效果明顯。