整合素α5β1、HPA在PSTT和絨癌中的表達(dá)及意義*

齊潔敏，白興武，石曉虹

（1.承德醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河北承德 067000；2.承德護(hù)理職業(yè)學(xué)院）

研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞粘附力的改變，以及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)、基底膜(BM)的破壞是腫瘤惡性發(fā)展過(guò)程中的首要步驟[1]。因此，能夠破壞ECM和BM的乙酰肝素酶(HPA)及作為細(xì)胞粘附分子的整合素α5β1在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的功能非常重要。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于整合素α5β1、HPA在胎盤原位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤（PSTT）和絨癌組織中的表達(dá)情況未見(jiàn)報(bào)道。為此，本研究采用蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)了絨癌組織、PSTT組織和正常絨毛組織中整合素α5β1和HPA蛋白的表達(dá)水平，以探討二者在PSTT和絨癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年7月-2016年12月，承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、承德市中心醫(yī)院、中國(guó)人民解放軍第266醫(yī)院、秦皇島人民醫(yī)院等多家醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)術(shù)后病理確診的正常絨毛40例、PSTT 15例、絨癌20例。所有患者臨床資料完整，在術(shù)前均未接受放療、化療。

1.2 主要試劑 兔抗人整合素α5β1、HPA單克隆抗體，美國(guó)Abcam公司；PageRuler預(yù)染蛋白Ladder，美國(guó)Thermo公司；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型)，中國(guó)上海碧云天生物技術(shù)有限公司；RIPA組織/細(xì)胞裂解液，中國(guó)北京索萊寶生物科技有限公司；PVDF轉(zhuǎn)印膜，美國(guó)Millipore公司；兔抗β-actin多克隆抗體，美國(guó)Bioworld公司；羊抗兔IgG二抗，美國(guó)KPL公司。

1.3 Western blot法檢測(cè)整合素α5β1和HPA蛋白的表達(dá)情況 提取正常絨毛組織、PSTT組織和絨癌組織中的總蛋白，BCA法測(cè)定總蛋白濃度。12% SDS-PAGE凝膠電泳，蛋白上樣量為40μg，濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜，采用ECL化學(xué)發(fā)光法觀察。一抗工作濃度：整合素α5β1(1：300)，HPA(1：300)，β-actin(1：2000)。應(yīng)用Image-J軟件對(duì)目的條帶和內(nèi)參條帶的灰度值進(jìn)行分析，計(jì)算目的蛋白與內(nèi)參蛋白灰度值的比，作為目的蛋白的相對(duì)含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果用（±s ）表示，組間比較采用單因素方差分析和q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 整合素α5β1蛋白在正常絨毛、PSTT及絨癌組織中的表達(dá)情況 絨癌組織中整合素α5β1蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯高于正常絨毛組織和PSTT組織(P＜0.05)；PSTT組織中整合素α5β1蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯高于正常絨毛組織（P＜0.05）。見(jiàn)附圖，附表：

附表 整合素α5β1和HPA蛋白的表達(dá)情況（±s ）

附表 整合素α5β1和HPA蛋白的表達(dá)情況（±s ）

與正常絨毛組織比較：aP＜0.05；與PSTT組織比較：bP＜0.05

例數(shù) 整合素α5β1 HPA正常絨毛組織 40 0.840±0.033 3.602±0.001 PSTT組織 15 0.900±0.048a 3.775±0.072a絨癌組織 20 0.989±0.070ab 4.227±0.155ab

2.2 HPA蛋白在正常絨毛、PSTT及絨癌組織中的表達(dá)情況絨癌組織中HPA蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯高于正常絨毛組織和PSTT組織(P＜0.05)；PSTT組織中HPA蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯高于正常絨毛組織（P＜0.05）。見(jiàn)附圖，附表。

3 討論

3.1 整合素α5β1與PSTT和絨癌 整合素α5β1高表達(dá)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。遲福生等[2]應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)整合素α5β1 mRNA在賁門癌中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)整合素α5β1 mRNA在癌旁正常黏膜中的表達(dá)顯著低于賁門癌，且與賁門癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期有關(guān)；Arboleda等發(fā)現(xiàn)[3]，整合素α5β1蛋白的高表達(dá)可加強(qiáng)肝癌細(xì)胞的侵襲性；白興武等[4]的研究結(jié)果也顯示，整合素α5β1蛋白及mRNA在胃癌中的高表達(dá)與胃癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；王闖等[5]采用組織芯片結(jié)合免疫組化SP法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，整合素α5β1在宮頸鱗癌中的表達(dá)水平明顯高于宮頸正常黏膜，且與宮頸鱗癌的生物學(xué)行為（分化程度、臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）有密切關(guān)系。此外，整合素α5β1還能調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的分泌和活化，促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[6]；并且整合素α5β1還能加強(qiáng)腫瘤的異質(zhì)性粘附、降低腫瘤的同質(zhì)性黏附，這在腫瘤的發(fā)生發(fā)展，尤其是浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著非常重要的作用。上述研究結(jié)果均表明，整合素α5β1可能參與了胃癌、肝癌、宮頸癌等多種腫瘤發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜過(guò)程，但整合素α5β1在PSTT和絨癌中的表達(dá)變化及意義在國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用蛋白印記技術(shù)從蛋白水平檢測(cè)了整合素α5β1蛋白在絨癌、PSTT及正常絨毛中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示絨癌組織整合素α5β1的表達(dá)明顯高于PSTT和正常絨毛、PSTT明顯高于正常絨毛，說(shuō)明整合素α5β1可能參與了絨癌和PSTT的發(fā)生發(fā)展。

3.2 HPA與PSTT和絨癌 ECM和BM結(jié)構(gòu)的破壞是惡性腫瘤生長(zhǎng)、局部浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移開(kāi)始的一個(gè)重要標(biāo)志。HPA是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種非常重要的功能酶，能破壞BM和ECM的結(jié)構(gòu)、參與ECM和BM結(jié)構(gòu)的降解和重塑，與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移，以及炎癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[7-8]。王新等[9]采用免疫組化法檢測(cè)觀察組（口腔鱗癌組織）和對(duì)照組（正常口腔黏膜組織）HPA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)口腔鱗癌HPA的表達(dá)明顯升高，可能與口腔鱗癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后差有關(guān)；鄭曉東等[10]利用免疫組化法檢測(cè)了HPA在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌和乳腺纖維腺瘤中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中HPA的陽(yáng)性表達(dá)顯著高于乳腺纖維腺瘤，提示HPA可能促進(jìn)乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移；高輝等[11]應(yīng)用SABC免疫組化法檢測(cè)了胰腺癌、癌旁組織和正常胰腺組織HPA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)癌旁及正常胰腺組織HPA的陽(yáng)性表達(dá)明顯低于胰腺癌，且胰腺癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組HPA蛋白的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，說(shuō)明HPA與胰腺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移有關(guān)。上述研究結(jié)果均提示，HPA與口腔鱗癌、乳腺癌、胰腺癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但HPA在PSTT和絨癌中的表達(dá)及意義的研究在國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用蛋白印記技術(shù)檢測(cè)了HPA蛋白在絨癌、PSTT及正常絨毛中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPA在正常絨毛、PSTT及絨癌中的表達(dá)呈逐漸上升趨勢(shì)，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明HPA蛋白與絨癌的發(fā)生密切相關(guān)，且亦有可能參與了PSTT的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，整合素α5β1和HPA在絨癌、PSTT中的異常表達(dá)與絨癌和PSTT的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但由于PSTT組織的例數(shù)有限，本研究得出的只是初步結(jié)論，二者在滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤中發(fā)生過(guò)程中的作用及詳細(xì)機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。