LRRC3B對(duì)食管癌細(xì)胞Eca109遷移、侵襲及PI3K/Akt信號(hào)通路的影響

曹燕飛，任 睿，楊 曄，羅向暉，王水利

1.陜西省人民醫(yī)院胸外科，陜西 西安 710068；2.陜西省新安中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710048；3.陜西省人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，陜西 西安 710068

LRRC3B對(duì)食管癌細(xì)胞Eca109遷移、侵襲及PI3K/Akt信號(hào)通路的影響

曹燕飛1，任 睿2，楊 曄1，羅向暉1，王水利3

1.陜西省人民醫(yī)院胸外科，陜西 西安 710068；2.陜西省新安中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710048；3.陜西省人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，陜西 西安 710068

背景與目的：先前的研究已經(jīng)證實(shí)富含亮氨酸重復(fù)序列3B蛋白(leucine-rich repeatcontaining 3B，LRRC3B)在多種癌癥中低表達(dá)，并且與癌細(xì)胞的遷移侵襲密切相關(guān)。該研究旨在探討LRRC3B在食管癌發(fā)展中的作用機(jī)制。方法：免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)LRRC3B在60例食管癌組織及60例癌旁組織中的表達(dá)情況，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)和蛋白[質(zhì)]印跡法(Western blot)分別檢測(cè)食管癌細(xì)胞Eca109和食管正常上皮細(xì)胞系HEEC中LRRC3B的mRNA和蛋白表達(dá)。處理食管癌細(xì)胞Eca109并分3組：正常對(duì)照組、陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染對(duì)照空pCMV6質(zhì)粒)和過(guò)表達(dá)LRRC3B組(轉(zhuǎn)染pCMV6-LRRC3B過(guò)表達(dá)質(zhì)粒)。采用Transwell法檢測(cè)各組Eca109細(xì)胞遷移和侵襲的變化。采用Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表達(dá)以及p-Akt蛋白水平。結(jié)果：LRRC3B在食管癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)明顯低于癌旁組織和食管正常上皮細(xì)胞。過(guò)表達(dá)LRRC3B明顯抑制Eca109細(xì)胞的遷移和侵襲能力，上調(diào)上皮因子E-cadherin表達(dá)，抑制間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin表達(dá)，同時(shí)降低細(xì)胞內(nèi)p-Akt水平。結(jié)論：LRRC3B在食管癌中低表達(dá)，上調(diào)LRRC3B能夠抑制食管癌細(xì)胞的EMT過(guò)程，可能與抑制PI3K/Akt信號(hào)通路有關(guān)。

富含亮氨酸重復(fù)序列3B蛋白；食管癌；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化；PI3K/Akt

食管癌是世界上高發(fā)惡性腫瘤之一。在我國(guó)，食管癌發(fā)病率位居第5位，死亡率位居第4位，且呈不斷上升趨勢(shì)［1］。分子靶向治療是繼手術(shù)治療、放療和化療之后腫瘤患者的又一選擇，增強(qiáng)腫瘤抑制基因的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，目前已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外腫瘤研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。富含亮氨酸重復(fù)序列3B蛋白(leucine rich repeat-containing 3B，LRRC3B)是具有保守亮氨酸序列的跨膜蛋白，該蛋白參與動(dòng)植物細(xì)胞黏附、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因表達(dá)調(diào)控及細(xì)胞凋亡等過(guò)程［2］。已有研究證實(shí)LRRC3B基因在非小細(xì)胞肺癌［3］、乳腺癌［4］、腎細(xì)胞癌［5］和胃癌［6］中低表達(dá)，作為腫瘤抑制基因，上調(diào)其表達(dá)能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖。但是目前LRRC3B在食管癌中的表達(dá)以及生物學(xué)作用尚不明確。本研究探索了LRRC3B在食管癌組織和食管癌細(xì)胞中的表達(dá)變化，分析其在食管癌發(fā)展中的作用機(jī)制，從而為食管癌的靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 組織標(biāo)本來(lái)源及處理

收集2014年10月—2015年5月期間本院消化科經(jīng)手術(shù)治療的食管癌患者60例，其中女性25例、男性35例，平均年齡為(49.5+4.6)歲。所有患者均已知情同意，且術(shù)前均未行放、化療或分子靶向治療。取材部分為癌灶組織和遠(yuǎn)端正常食管黏膜組織，癌旁組織取材于腫瘤邊緣肉眼觀察為正常黏膜組織，制備組織石蠟切片，備用。

1.2 細(xì)胞和主要試劑

人食管癌細(xì)胞系Eca109和正常食管上皮細(xì)胞系HEEC均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞庫(kù)。免疫組織化學(xué)染色試劑盒和DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，免疫組織化學(xué)LRRC3B抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，胎牛血清、青霉素、鏈霉素、胰酶及DMEM培養(yǎng)液均購(gòu)自美國(guó)Gibaco公司，RPMI-1640培養(yǎng)液購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time f l uorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)有關(guān)試劑均購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司，LipofectamineTM2000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，Matrigel基質(zhì)膠購(gòu)自購(gòu)自美國(guó)Omega公司。LRRC3B、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，p-Akt和Akt單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling公司，pCMV6-LRRC3B質(zhì)粒和對(duì)照空pCMV6質(zhì)粒購(gòu)自美國(guó)Origene公司，兔抗大鼠β-actin抗體和HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)組織切片中LRRC3B表達(dá)

分別隨機(jī)選取3張食管癌組織和癌旁組織石蠟切片，依次經(jīng)過(guò)脫蠟、水化、抗原修復(fù)、封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，滴加一抗，4 ℃溫育過(guò)夜，滴加山羊抗鼠的二抗，37 ℃溫育30 min，DBA顯色、蘇木精復(fù)染、鹽酸分化、脫水封片，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)以上高倍鏡視野，觀察LRRC3B陽(yáng)性表達(dá)的情況。LRRC3B在食管癌細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒，因此按陽(yáng)性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比對(duì)組織進(jìn)行染色分級(jí)：0～10%的細(xì)胞質(zhì)染色為陰性(-)，10%～50%的細(xì)胞質(zhì)染色為陽(yáng)性(+)，大于50%的細(xì)胞質(zhì)染色為強(qiáng)陽(yáng)性(++)。以上所有切片染色均與正常食管組織陽(yáng)性對(duì)照樣品相對(duì)比。

1.4 采用RTFQ-PCR檢測(cè)Eca109和HEEC細(xì)胞中LRRC3B的mRNA表達(dá)

分別提取正常培養(yǎng)的食管癌細(xì)胞Eca109和正常試管上皮細(xì)胞HEEC中的總RNA，嚴(yán)格按照Prime ScriptRTreagent kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，采用cDNA的第1鏈作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。使用ABI7500快速RTFQ-PCR系統(tǒng)，用2-ΔΔCt法分析待測(cè)基因的相對(duì)表達(dá)水平。目的基因LRRC3B的mRNA表達(dá)量檢測(cè)是以β-actin為內(nèi)參基因。上海英駿生物技術(shù)有限公司合成擴(kuò)增目的基因LRRC3B，其上游引物為：5’-TCCAATCATGAGACAGCCCAC-3’，下游引物為：5’-TCTGCCAGCATGTTCATCCAA-3’；內(nèi)參基因β-actin上游引物為：5’-ATAGCACAGCCTGGATAGCAACGTAC-3’，下游引物為：5’-CACCTTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3’。

1.5 食管癌細(xì)胞Eca109轉(zhuǎn)染與分組

將Eca109細(xì)胞接種于含有10%的胎牛血清及青霉素100 U/mL和鏈霉素100 g/mL的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置于37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5%培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)期時(shí)根據(jù)LipofectamineTM2000試劑盒說(shuō)明書轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒。根據(jù)不同處理，細(xì)胞分為3組：正常對(duì)照組(不作任何處理，正常培養(yǎng))、陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染對(duì)照空質(zhì)粒pCMV6)和過(guò)表達(dá)LRRC5B組(轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pCMV6-LRRC3B)。轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.6 采用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組Eca109細(xì)胞的遷移能力

用無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液調(diào)整各組細(xì)胞濃度為1×105個(gè)/mL，在Transwell下室加入1 mL含有5%FBS的DMEM培養(yǎng)基，上室加入0.5 mL濃度為1×105個(gè)/mL的待測(cè)細(xì)胞。培養(yǎng)24 h，去除上室的細(xì)胞，用4%多聚甲醛溶液固定黏附在Transwell小室膜下表面細(xì)胞15 min，再用0.05%結(jié)晶紫染色40 min，然后使用Leica DC 300F正置顯微鏡隨機(jī)選取10個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞個(gè)數(shù)，求其平均值。

1.7 采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組Eca109細(xì)胞的侵襲能力

與遷移實(shí)驗(yàn)不同的是，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)需要在接種細(xì)胞之前，用100 μL 濃度為1 mg/mL的Matrigel包埋小室1 h，其余步驟同Transwell遷移實(shí)驗(yàn)。

1.8 采用蛋白［質(zhì)］印跡法(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞中LRRC3B、EMT相關(guān)蛋白及PI3K/Akt相關(guān)蛋白的表達(dá)

消化、離心收集各組細(xì)胞，加入裂解液重懸細(xì)胞，離心，收集含有總蛋白的上清液，采用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒進(jìn)行蛋白定量(離心速率15 000×g，r=3 cm)。調(diào)整加樣量25 μg，10% SDS-PAGE后轉(zhuǎn)移蛋白至PVDF膜，新鮮配制的含5%BSA的TBST液室溫封閉1 h，加入一抗(LRRC3B 1∶1 000，E-cadherin 1∶ 1 500，N-cadherin 1∶2 000，Vimentin 1∶1 500，p-Akt 1∶1 000，Akt 1∶1 500)過(guò)夜，TBST液洗膜3次，每次5 min，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗溫育1 h，ECL顯影，Band Scan 5.0凝膠電泳圖像分析軟件進(jìn)行條帶灰度掃描，β-actin為內(nèi)參對(duì)目的蛋白進(jìn)行灰度值半定量分析。每個(gè)樣本重復(fù)3次，取均值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用表示，多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析，組間數(shù)據(jù)兩兩比較采用 LSD-t法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 癌灶組織和癌旁組織中LRRC3B免疫組織化學(xué)染色比較

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，60例食管癌的癌組織中，LRRC3B在細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)不明顯，45例(90%)呈現(xiàn)陰性表達(dá)；60例食管癌的癌旁組織中，LRCC3B在細(xì)胞質(zhì)中彌漫表達(dá)，40例(66.7%)呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，20例(33.3%)呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(圖1)。

圖1 食管癌組織和癌旁組織中LRRC3B免疫組織化學(xué)染色Fig. 1 The immunohistochemistry of LRRC3B in cancer tissues and adjacent non-neoplastic tissues

2.2 LRRC3B在食管癌組織中的表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

隨著臨床分期的增加，食管癌組織中LRRC3B表達(dá)降低，Ⅱ、Ⅲ期的陽(yáng)性表達(dá)程度低于Ⅰ期(P<0.05)；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中LRRC3B表達(dá)高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織(P<0.05)。LRRC3B在不同年齡、性別患者食管癌組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

2.3 食管癌細(xì)胞Eca109和正常細(xì)胞HEEC中LRRC3B表達(dá)量比較

與正常食管癌上皮細(xì)胞HEEC相比，食管癌細(xì)胞Eca109中LRRC3B的mRNA相對(duì)表達(dá)和蛋白相對(duì)表達(dá)分別為(0.35+0.04)和(0.31+0.05)，分別明顯小于HEEC細(xì)胞中LRRC38的mRNA相對(duì)表達(dá)()和蛋白相對(duì)表達(dá)量()，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖2)。

2.4 轉(zhuǎn)染pCMV6-LRRC3B質(zhì)粒對(duì)食管癌細(xì)胞Eca109遷移能力的影響

與正常對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)LRRC3B組Transwell小室膜下附著的細(xì)胞數(shù)為，明顯小于正常對(duì)照組細(xì)胞的遷移數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖3)。

2.5 轉(zhuǎn)染pCMV6-LRRC3B質(zhì)粒對(duì)食管癌細(xì)胞Eca109侵襲能力的影響

與正常對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)LRRC3B組細(xì)胞侵襲穿過(guò)Transwell小室底膜的數(shù)量為，明顯小于正常對(duì)照組的98.7+5.3，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖4)。

2.6 轉(zhuǎn)染pCMV6-LRRC3B質(zhì)粒對(duì)食管癌細(xì)胞Eca109中LRRC3B以及EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

正常對(duì)照組Eca109細(xì)胞中LRRC3B、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白相對(duì)表達(dá)量依次為、、和，過(guò)表達(dá)LRRC3B組細(xì)胞中LRRC3B、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白相對(duì)表達(dá)量依次為、、和，與正常組相比，過(guò)表達(dá)LRRC3B組細(xì)胞中LRRC3B和E-cadherin表達(dá)量顯著增加，N-cadherin和Vimentin表達(dá)量顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖5)。

表1 患者臨床病理參數(shù)與LRRC3B表達(dá)的關(guān)系Tab. 1 The relationship between patient characteristics and LRRC3B expression

2.7 轉(zhuǎn)染pCMV6-LRRC3B質(zhì)粒對(duì)食管癌細(xì)胞Eca109中PI3K/Akt信號(hào)通路的影響

正常對(duì)照組Eca109細(xì)胞中p-Akt和Akt蛋白水平分別為和，過(guò)表達(dá)LRRC3B組細(xì)胞中p-Akt和Akt蛋白相對(duì)水平分別為和，與正常對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)LRRC3B組細(xì)胞中p-Akt蛋白相對(duì)水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而Akt總蛋白無(wú)明顯變化(圖6)。

圖2 Western blot檢測(cè)HEEC細(xì)胞和Eca109細(xì)胞中LRRC3B表達(dá)Fig. 2 The expression of LRRC3B in HEEC cells and Eca109 cells were measured by Western blot

圖3 各組細(xì)胞遷移能力比較Fig. 3 The comparison of cell migration in di ff erent groups

圖4 各組細(xì)胞侵襲能力比較Fig. 4 The comparison of invasion in di ff erent groups

圖5 Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞LRRC3B以及EMT相關(guān)蛋白表達(dá)Fig. 5 The expression of LRRC3B and EMT related proteins in groups were measured by Western blot

圖6 Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞PI3K/Akt相關(guān)蛋白表達(dá)Fig. 6 The related proteins of PI3K/Akt in groups were measured by Western blot

3 討 論

LRRC3B是一種具有分泌和跨膜功能并包含亮氨酸重復(fù)序列的分泌性蛋白［6］。富含亮氨酸重復(fù)序列蛋白參與動(dòng)植物體內(nèi)許多重要的過(guò)程，包含免疫調(diào)節(jié)、受體間相互作用、細(xì)胞黏附、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因表達(dá)和細(xì)胞凋亡等等［5,7］。先前研究已經(jīng)在胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌及透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)LRRC3B基因由于啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化和組蛋白去乙?；瘜?dǎo)致的失活和表達(dá)下調(diào)，表明LRRC3B參與了癌癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程［8-10］。本研究發(fā)現(xiàn)，LRRC3B在食管癌患者癌變組織部位的表達(dá)明顯低于癌旁組織，同時(shí)與正常食管上皮細(xì)胞相比，食管癌細(xì)胞Eca109中LRRC3B顯著減少。這表明LRRC3B也可能參與了食管癌的發(fā)生過(guò)程，進(jìn)一步將食管癌細(xì)胞Eca109轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)LRRC3B質(zhì)粒，研究LRRC3B在食管癌生物學(xué)行為中的作用機(jī)制。

已有研究證實(shí)，LRRC3B能夠抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖和侵襲［11］，在胃癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LRRC3B能夠抑制集落形成［6］，同時(shí)LRRC3B能夠有效抑制卵巢癌細(xì)胞活性［12］。本研究通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)得知，過(guò)表達(dá)LRRC3B明顯抑制食管癌細(xì)胞Eca109的遷移和侵襲。EMT被認(rèn)為是癌細(xì)胞遷移和侵襲過(guò)程中最關(guān)鍵的步驟［13］，一般來(lái)說(shuō)，鈣黏蛋白表達(dá)的減少或缺失及間質(zhì)標(biāo)志物的誘導(dǎo)上調(diào)是EMT發(fā)生的主要標(biāo)志［14］。因此，本研究采用Western blot分析轉(zhuǎn)染LRRC3B后細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表達(dá)量變化。Western blot結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)LRRC3B明顯抑制N-cadherin和Vimentin表達(dá)，同時(shí)上調(diào)E-cadherin表達(dá)。因此，LRRC3B能夠通過(guò)抑制EMT過(guò)程，從而能抑制細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

癌細(xì)胞中調(diào)控EMT的信號(hào)通路有多種，包含有Notch信號(hào)通路、Ras/EMK信號(hào)通路、Hedgehog信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路及PI3K/Akt信號(hào)通路［15-17］。PI3k/Akt被認(rèn)為是食管癌起始和發(fā)展過(guò)程中至關(guān)重要的一條信號(hào)通路，并且也被認(rèn)為與EMT密切相關(guān)。據(jù)報(bào)道，上皮細(xì)胞中激活的Akt水平導(dǎo)致細(xì)胞間黏附力缺失，細(xì)胞極性的缺失并且誘導(dǎo)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，改變上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)和分布［16，18］。本研究發(fā)現(xiàn)，LRRC3B明顯抑制細(xì)胞中Akt的磷酸化水平，表明LRRC3B可能通過(guò)抑制PI3K/Akt信號(hào)通路而抑制食管癌細(xì)胞的遷移和EMT轉(zhuǎn)化。

綜上可知，我們推斷LRRC3B基因在食管癌中是非常重要的腫瘤抑制基因，上調(diào)LRRC3B表達(dá)能夠有效抑制食管癌細(xì)胞的EMT發(fā)生過(guò)程，這可能與抑制PI3K/Akt信號(hào)通路有關(guān)。因此，LRRC3B可能成為食管癌預(yù)防和治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。

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The influence of LRRC3B on esophageal cancer cell Eca109 migration, invasion and PI3K/Akt signaling pathway

CAO Yanfei1, REN Rui2, YANG Ye1, LUO Xianghui1, WANG Shuili3

(1. Department of Thoracic Surgery, Shaanxi Provincial People’s Hospital, Xi’an 710068, Shaanxi Province, China; 2 Department of Obstetrics and Gynecology, Shaanxi Xin’an Central Hospital, Xi’an 710048, Shaanxi Province, China; 3. Department of respiratory internal, Shaanxi Provincial People’s Hospital, Xi’an 710068, Shaanxi Province, China)

REN Rui E-mail: huiqingguohn@163.com

Background and purpose: Previous studies have confirmed that the expression of leucine-rich repeat-containing 3B (CLRRC3B) was significantly decreased in different human cancers, which was also associated with the migration and invasion of cancer cells. The aim of this study was to explore the potential mechanism of LRRC3B in the development of esophageal cancer. Methods: The LRRC3B expression was detected in 60 cancer tissues and 60 adjacent non-neoplastic tissues by immunohistochemistry. The mRNA and protein expression of LRRC3B in Eca109 and HEECs were detected using real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (RTFQ-PCR) and Western blot, respectively. Eca109 cells with different treatments were divided into three groups: normal group, negative control group (transfected with pCMV6 plasmid), overexpression LRRC3B group (transfected with pCMV6-LRRC3B plasmid). Transwell assay was used to measure the migration and invasion of Eca109 cells in different groups. The protein levels of E-cadherin, N-cadherin, Vimentin and p-Akt were determined by Westernblot. Results: The expression of LRRC3B in esophageal cancer tissues was lower than that of non-cancerous tissues, as well as the expression of LRRC3B in Eca109 was decreased compared with that of normal esophageal epithelial cell line HEEC. Overexpression of LRRC3B significantly inhibited Eca109 cells migration and invasion, upregulated the expression of E-cadherin and decreased the expression of N-cadherin and Vimentin. Moreover, overexpression of LRRC3B significantly inhibited the phosphorylation of Akt in Eca109 cells. Conclusion: The expression of LRRC3B was decreased in esophageal cancer. Overexpression of LRRC3B can efficiently inhibit the EMT progression in esophageal cancer cells by suppressing PI3K/Akt signaling pathway.

Leucine-rich repeat-containing 3B; Esophageal cancer; Epithelial-mesenchymal transition; PI3K/ Akt

10.19401/j.cnki.1007-3639.2017.05.005

R735.1

A

1007-3639(2017)05-0345-08

2016-11-05

2016-12-20）

陜西省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(2014JM2-8166)。

任 睿 E-mail：huiqingguohn@163.com