運(yùn)動(dòng)干預(yù)通過減緩紋狀體多巴胺丟失改善帕金森病模型大鼠行為功能的研究

劉曉莉 陳平，2 林湘明 喬德才 姜啟凡

1北京師范大學(xué)體育與運(yùn)動(dòng)學(xué)院（北京 100875）

2呂梁學(xué)院體育系（山西呂梁 033000）

3陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（陜西西安 710119）

帕金森?。≒arkinson's disease，PD）是以中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元選擇性丟失和紋狀體多巴胺（dopamine，DA）神經(jīng)遞質(zhì)減少為特征的一種漸進(jìn)性、不可逆轉(zhuǎn)性神經(jīng)功能障礙性疾病[1，2]。該病的主要臨床表現(xiàn)為行為功能障礙，如運(yùn)動(dòng)遲緩、肌肉僵直、靜止性震顫、步態(tài)異常和身體姿勢不穩(wěn)等。模型動(dòng)物及尸檢研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PD運(yùn)動(dòng)癥狀開始出現(xiàn)時(shí)，紋狀體內(nèi)DA減少80%以上，且運(yùn)動(dòng)障礙癥狀與DA含量減少成顯著正相關(guān)[3]。使用DA替代療法可顯著改善PD患者的行為功能障礙，但該類藥物持續(xù)使用又會(huì)引發(fā)“異動(dòng)癥”，嚴(yán)重影響患者的自主活動(dòng)行為和生存質(zhì)量[4]。流行病學(xué)和臨床調(diào)查數(shù)據(jù)表明，早期從事規(guī)律體育運(yùn)動(dòng)的人群PD發(fā)病率顯著低于普通人群[5]；不同形式的身體活動(dòng)（如跑臺(tái)訓(xùn)練、抗阻訓(xùn)練、平衡訓(xùn)練、拉伸訓(xùn)練、氣功、太極拳、舞蹈、拳擊等）對改善PD患者行為功能均具有一定的作用[6]。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，4周跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)干預(yù)可有效改善PD模型大鼠行為功能障礙，且這種改善作用與運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間之間存在依賴關(guān)系[7]。故本研究推測：運(yùn)動(dòng)介入后PD模型大鼠行為功能出現(xiàn)“時(shí)序性”變化特征可能與減緩紋狀體DA丟失有關(guān)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

健康雄性清潔級SD大鼠，體重240±10 g（6周齡），由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證批號(hào)：SCXK（京）2009-0007。大鼠分籠飼養(yǎng)（3～4只/籠），12/12h晝夜循環(huán)，室溫20～25℃，自由進(jìn)食和飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予關(guān)懷。正式實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行為期1周的環(huán)境適應(yīng)及強(qiáng)迫跑臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練，剔除無法完成預(yù)設(shè)跑臺(tái)訓(xùn)練方案的大鼠。實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)安靜組（Control組，n=6）、假手術(shù)運(yùn)動(dòng)組（Control+Ex組，n=6）、6-OHDA安靜組（PD組，n=9）、6-OHDA運(yùn)動(dòng)組（PD+Ex組，n=9）。

1.2 PDPD模型制備與評價(jià)

大鼠術(shù)前禁食24 h，自由飲水，腹腔注射麻醉（0.35 ml/100 g，10%水合氯醛配制液），手術(shù)開顱后固定于腦立體定位儀，使前、后囟保持在同一水平面上。參照Paxinos大鼠腦定位圖譜[8]，將6-羥基多巴胺（6-OHDA）（2μg/μL，含0.02%抗壞血酸與0.9%生理鹽水）注入右腦內(nèi)側(cè)前腦束（medial forebrain bundle，MFB）（AP：-4.3 mm，R：1.5 mm，H：7.6～7.8 mm），以0.5 μl/min速度注射4μl，注射完畢后留針5～10 min，緩慢退針。縫合傷口并敷青霉素以預(yù)防感染。假手術(shù)組以相同的方法注射4μl 0.9%生理鹽水（含0.02%抗壞血酸）。

在手術(shù)完成后第7、14、28天，分別對各組大鼠進(jìn)行阿樸嗎啡（apomorphine，APO）誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)于安靜環(huán)境下進(jìn)行，按照0.1 mg/100 g體重劑量將APO溶液注射于大鼠頸部皮下，計(jì)數(shù)30 min內(nèi)旋轉(zhuǎn)次數(shù)（大鼠以左側(cè)后肢為軸，進(jìn)行首尾相接的旋轉(zhuǎn)行為）。本研究篩選凈旋轉(zhuǎn)圈數(shù)（逆時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)圈數(shù)減去順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)圈數(shù)）＞100 r/30min作為PD大鼠模型制備成功的標(biāo)準(zhǔn)[9]，不符合PD模型標(biāo)準(zhǔn)的大鼠剔除。

1.3 運(yùn)動(dòng)干預(yù)方案

在術(shù)后1周，采用Tajiri等[10]建立的運(yùn)動(dòng)方案，對Control+Ex與PD+Ex組進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)干預(yù)。訓(xùn)練方案為：11 m/min，30 min/day，5 day/week，（周六、日休息），持續(xù)4周。運(yùn)動(dòng)干預(yù)時(shí)間于每個(gè)訓(xùn)練日下午16：00～18：00進(jìn)行。Control組與PD組在相同時(shí)間段內(nèi)同樣置于跑臺(tái)內(nèi)，但不進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，使其處于自然安靜狀態(tài)。

1.4 大鼠自主活動(dòng)能力評價(jià)

采用曠場實(shí)驗(yàn)（open field test，OFT）評價(jià)大鼠的自主活動(dòng)能力。曠場實(shí)驗(yàn)箱高40 cm，邊長100 cm，內(nèi)壁不透明，正上方1.5 m處架一數(shù)碼攝像頭，其視野可覆蓋整個(gè)曠場內(nèi)部。實(shí)驗(yàn)前，將大鼠置于曠場箱中適應(yīng)5 min，然后開始記錄，記錄時(shí)間為30 min。整個(gè)測試過程中保持環(huán)境安靜，測試結(jié)束后采用系統(tǒng)自帶軟件SMART3.0對每只大鼠所記錄的視頻進(jìn)行分析。

1.5 紋狀體微透析樣品液采集與DADA濃度測定

1.5.1 微透析套管埋藏手術(shù)和樣品采集

在6-OHDA或生理鹽水注射完畢后，將微透析探針套管尖端植入右側(cè)紋狀體（AP：0.2 mm，R：3.5 mm，V：3.5 mm），并用不銹鋼小螺絲和牙科水泥固定，放置鼠籠中單獨(dú)飼養(yǎng)。微透析樣品采集前，移去導(dǎo)引管針芯后將探針緩慢插入套管內(nèi)并固定，大鼠置于清醒活動(dòng)裝置中，探針輸入端與微量注射泵相連，輸出端連接冷凍收集器。微量注射泵內(nèi)充滿人工腦脊液，以0.2μl/min的速率持續(xù)灌注。灌注平衡30 min后，打開冷凍收集器收集微透析液，采樣頻率為15 min/管，1次/周，連續(xù)4周，樣品收集后.80℃冰箱保存待測。

1.5.2 大鼠腦組織學(xué)定位

微透析樣品采集完畢后，10%水合氯醛麻醉大鼠（0.35 ml/100 g），剪開胸腔，暴露心臟，4%多聚甲醛溶液進(jìn)行常規(guī)灌注固定，剝離腦組織，置于30%蔗糖的多聚甲醛溶液中過夜至沉底。對腦組織行連續(xù)冠狀冰凍切片（40μm），用尼氏染色驗(yàn)證微透析套管所在位置（圖1A），并與腦立體定位圖譜進(jìn)行對比（圖1B），以剔除套管埋藏位置不在紋狀體的透析樣品液。

圖1 微透析探針定位腦片圖

1.5.3 紋狀體DADA濃度檢測

用高效液相色譜-電化學(xué)檢測法對收集到的樣品進(jìn)行檢測。色譜條件：流動(dòng)相A：將0.09 mol·L-1二水合磷酸二氫鈉溶液、0.0017 mol·L-1辛烷基磺酸鈉、0.05 mol·L-1一水合檸檬酸、50 μmol·L-1EDTA混合之后，磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.00；流動(dòng)相B：純甲醇（10%恒流洗脫），使用前經(jīng)0.22 μm有機(jī)膜過濾，超聲波震蕩脫氣，設(shè)置流速為0.2 ml/min。采用Quattro3 C18（2.1×150 mm）色譜柱，柱溫箱溫度30℃，工作電極為玻璃碳電極，參比電極為銀/氯化銀（Ag/AgCl）電極，工作電壓為0.52 V，檢測靈敏度為0.1 nA。

DA標(biāo)準(zhǔn)液的配置：精確稱取DA標(biāo)準(zhǔn)品，采用人工腦脊液配制成 10、1、0.1、0.01、0.001 μmol·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液。根據(jù)5個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品所對應(yīng)的峰面積在LC-Solution軟件中繪制濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，以峰面積作為縱坐標(biāo)Y，標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo)X，得到DA標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=1011715.53+62，055.34（r2=0.9995）。根據(jù)DA出峰的保留時(shí)間對樣品色譜峰進(jìn)行定性；應(yīng)用LC-Solution軟件求得與標(biāo)準(zhǔn)品具有相同保留時(shí)間（±0.1）的色譜峰的峰面積，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線可對樣品濃度進(jìn)行定量分析（圖2）。

圖2 DA標(biāo)準(zhǔn)品和紋狀體微透析樣品液高效液相色譜圖

1.6 紋狀體酪氨酸羥化酶陽性纖維免疫組織化學(xué)檢測

最后1周行為學(xué)測試結(jié)束后，大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.35 ml/100 g）麻醉，用生理鹽水（250 ml）和4%多聚甲醛溶液（250 ml）經(jīng)左心室-升主動(dòng)脈插管灌流，并迅速取出腦組織置于30%蔗糖的多聚甲醛溶液中固定保存24 h。將腦組織取出后進(jìn)行脫水、修塊、包埋，連續(xù)冠狀切片，片厚7 μm。從每只大鼠紋狀體的連續(xù)切片中每隔5張選取1張片子，每個(gè)腦組織平均選擇6張片子進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色、脫水、透明、封片，用Olympus-DP72型顯微鏡對紋狀體背側(cè)區(qū)域拍照。采用Image-Pro Plus 6.0軟件對紋狀體TH免疫陽性纖維光密度（optical density，OD）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用Sigmaplot12.5軟件作圖，各指標(biāo)的結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各指標(biāo)的組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），選擇student′st檢驗(yàn)對均值差異進(jìn)行比較；各指標(biāo)的組內(nèi)比較采用重復(fù)測量雙因素方差分析（repeated measure two-way ANOVA）；相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PDPD模型大鼠可靠性評價(jià)

APO誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)行為測試結(jié)果表明，6-OHDA大鼠18只，旋轉(zhuǎn)次數(shù)＞100 r/30 min的共計(jì)12只，其中PD組6只，PD+Ex組6只，成模率達(dá)67%，未達(dá)到模型評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的大鼠剔除。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，Control組雙側(cè)紋狀體紋狀體酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）陽性纖維表達(dá)均勻、密集、對稱（圖3A）。APO誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)行為符合PD模型標(biāo)準(zhǔn)的大鼠，損毀側(cè)（右側(cè)）紋狀體TH陽性纖維出現(xiàn)嚴(yán)重丟失，雙側(cè)出現(xiàn)明顯不對稱（圖3B）。與PD組健側(cè)相比，PD組損毀側(cè)紋狀體TH陽性纖維表達(dá)顯著降低（P＜0.01）；與Control組大鼠相比，PD組損毀側(cè)紋狀體TH陽性纖維表達(dá)顯著降低（P＜0.01）（圖3C）。

圖3 各組大鼠紋狀體TH陽性纖維表達(dá)比較

2.2 運(yùn)動(dòng)干預(yù)對PDPD模型大鼠行為能力的影響

2.2.1 APOAPO誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)行為

旋轉(zhuǎn)行為實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，第1、2周時(shí)PD+Ex組旋轉(zhuǎn)次數(shù)較PD組無顯著差異（P＞0.05），第4周時(shí)PD+Ex組旋轉(zhuǎn)次數(shù)較PD組顯著降低（P＜0.01）（圖4）。

圖4 PD組與PD+Ex組APO誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)次數(shù)比較

2.2.2 自主活動(dòng)能力

曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與Control組相比，Control+Ex組移動(dòng)距離有升高趨勢，但不具有顯著性差異（P＞0.05）；PD組與PD+Ex組移動(dòng)距離均顯著降低（P＜0.01）；與PD組相比，第3、4周PD+Ex組移動(dòng)距離顯著增加（P＜0.05，P＜0.01）。各組大鼠自主活動(dòng)能力動(dòng)態(tài)檢測結(jié)果表明，PD組移動(dòng)距離呈逐漸下降趨勢，第4周移動(dòng)距離較第0周顯著減少（P＜0.05）；PD+Ex組移動(dòng)距離呈逐漸增加趨勢，第3，4周移動(dòng)距離較第0周顯著增加（P＜0.05，P＜0.01）（圖5A、B）。

圖5 各組大鼠移動(dòng)距離及其隨時(shí)間變化趨勢

2.3 運(yùn)動(dòng)干預(yù)對PDPD模型大鼠紋狀體神經(jīng)元胞外DADA濃度的影響

與Control組相比，Control+Ex組紋狀體DA濃度未見顯著改變（P＞0.05）；PD和PD+Ex組紋狀體DA濃度均顯著降低（P＜0.01）；與PD組相比，第2、3、4周PD+Ex組紋狀體DA濃度顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。各組大鼠紋狀體DA濃度連續(xù)動(dòng)態(tài)測試結(jié)果表明，PD組紋狀體DA濃度隨時(shí)間變化出現(xiàn)逐漸下降趨勢，第2，3，4周均顯著低于第0周水平（P＜0.01）；PD+Ex組紋狀體DA濃度隨時(shí)間變化也呈逐漸下降，但總體下降趨勢較PD組平緩（圖6A、B）。

圖6 各組大鼠紋狀體DA濃度及其隨時(shí)間變化趨勢

2.4 紋狀體DADA濃度與自主活動(dòng)能力的相關(guān)性分析

本研究將各組大鼠紋狀體DA濃度與自主活動(dòng)能力測試結(jié)果進(jìn)行事件相關(guān)性檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，Control與Control+Ex組紋狀體DA濃度與自主活動(dòng)能力的相關(guān)性沒有顯著性差異（P＞0.05）；而PD與PD+Ex組紋狀體DA濃度與自主活動(dòng)能力的相關(guān)性均具有顯著性差異（P＜0.05）（圖7）。

圖7 各組大鼠紋狀體DA濃度與自主活動(dòng)能力的相關(guān)性分析

3 討論

基底神經(jīng)節(jié)由一群坐落于端腦前側(cè)深處的灰質(zhì)核團(tuán)構(gòu)成。紋狀體是皮層向基底神經(jīng)節(jié)信息輸入的主要核團(tuán)，其細(xì)胞構(gòu)筑95%為中等多棘神經(jīng)元（moderate multiple spine neurons，MSNs）[11]。生理狀態(tài)下，由皮層錐體細(xì)胞發(fā)出的軸突與紋狀體MSNs的樹突棘頭部構(gòu)成突觸聯(lián)系，形成皮層-紋狀體谷氨酸（glutamic acid，Glu）能神經(jīng)通路；而來自中腦黑質(zhì)致密區(qū)的DA能神經(jīng)投射則作用于MSNs樹突棘頸部，形成黑質(zhì)-紋狀體DA能神經(jīng)通路[12]。經(jīng)典假設(shè)認(rèn)為，紋狀體表達(dá)DA 1型受體（D1–type receptors，D1R）和2型（D2–type receptors，D2R）兩種不同類型的MSNs向下游核團(tuán)發(fā)出的纖維投射，分別形成直接通路（STR-GPi/SNr）和間接通路（STR-GPe-STN-GPi/SNr），兩條通路均參與軀體運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)[13]。PD病理狀態(tài)下，由于黑質(zhì)致密區(qū)DA能神經(jīng)元的漸進(jìn)性死亡，導(dǎo)致紋狀體內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)DA耗竭，黑質(zhì)-紋狀體通路調(diào)節(jié)作用減弱，結(jié)果引起D1DR的激活不足造成直接環(huán)路活性下降，而D2DR作用減弱引起間接環(huán)路的活動(dòng)增強(qiáng)，從而引發(fā)直接通路與間接通路調(diào)節(jié)功能紊亂及行為功能障礙。盡管PD的病因和發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，但黑質(zhì)和紋狀體DA神經(jīng)遞質(zhì)水平低下被認(rèn)為是該病的主要分子機(jī)制之一。

TH是催化生物體自身合成DA系列反應(yīng)的第一步反應(yīng)的限速酶。其功能的缺失或表達(dá)不足直接影響DA的合成與分泌。隨著PD患者黑質(zhì)DA能神經(jīng)元的漸進(jìn)性丟失，TH的活性也逐漸降低[14]。TH免疫組織化學(xué)是被廣泛應(yīng)用于檢測DA能纖維和胞體損傷或者死亡的重要方法。Jia等[15]研究表明，6-OHDA損傷大鼠模型5周后，黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞數(shù)量和紋狀體TH陽性纖維終末含量均顯著降低，且紋狀體DA濃度降低90%以上；大鼠行為功能顯著降低，表現(xiàn)為旋轉(zhuǎn)次數(shù)顯著增加，在轉(zhuǎn)棒上停留的時(shí)間以及在曠場內(nèi)的總運(yùn)動(dòng)距離、總運(yùn)動(dòng)時(shí)間和總運(yùn)動(dòng)速度均顯著降低。Guo等[16]的研究表明，6-OHDA損傷大鼠模型黑質(zhì)-紋狀體DA能神經(jīng)元顯著損傷，大鼠行為能力顯著降低，表現(xiàn)為移動(dòng)距離、移動(dòng)速度、后肢站立次數(shù)（曠場試驗(yàn)）和左側(cè)前肢觸壁次數(shù)比例（圓桶試驗(yàn)）均顯著降低。Bernheimer[17]和Mori等[18]的研究表明，臨床上表現(xiàn)出典型運(yùn)動(dòng)功能障礙的PD患者黑質(zhì)TH標(biāo)記的神經(jīng)元丟失達(dá)60%～70%，紋狀體DA濃度顯著降低。本研究結(jié)果表明，6-OHDA損毀模型大鼠在曠場內(nèi)的移動(dòng)距離顯著降低，紋狀體DA含量顯著降低，且紋狀體DA濃度與自主活動(dòng)能力之間存在高度相關(guān)性。與前人的研究結(jié)果一致。同時(shí)本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，PD組紋狀體DA濃度及自主活動(dòng)行為的變化隨時(shí)間的延長呈現(xiàn)“時(shí)序性”變化特征，提示6-OHDA神經(jīng)毒素對黑質(zhì)-紋狀體DA能神經(jīng)通路產(chǎn)生持續(xù)性損傷，且損傷程度隨時(shí)間推移出現(xiàn)逐漸加重的特點(diǎn)。

大量研究表明，體力活動(dòng)具有促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生[19]、神經(jīng)細(xì)胞存活[20]，改善神經(jīng)可塑性[21]和防治神經(jīng)退行性疾病的作用[22，23]。臨床和基礎(chǔ)研究結(jié)果證實(shí)，運(yùn)動(dòng)能改善PD患者行為功能障礙，減緩PD病程發(fā)展，提高身體功能和健康相關(guān)的生活質(zhì)量[24-27]；PD模型動(dòng)物研究也發(fā)現(xiàn)，不同形式運(yùn)動(dòng)均對模型動(dòng)物運(yùn)動(dòng)行為和DA能系統(tǒng)神經(jīng)化學(xué)異常產(chǎn)生有益的影響，激活DA能系統(tǒng)并增加紋狀體DA的利用率[28]；更重要的是，運(yùn)動(dòng)能夠促進(jìn)紋狀體損毀的功能恢復(fù)[29]，并刺激模型大鼠或小鼠紋狀體DA的合成[30]。Tajiri[10]和Real等[31]的研究表明，4周跑臺(tái)訓(xùn)練改善6-OHDA損傷大鼠前肢活動(dòng)功能，減輕了黑質(zhì)DA能神經(jīng)元損傷。Yoon等[32]的研究表明，連續(xù)14天跑臺(tái)訓(xùn)練改善了6-OHDA損傷模型大鼠的行為功能，并減輕黑質(zhì)-紋狀體DA能神經(jīng)元損傷，紋狀體TH陽性纖維終末含量顯著增加。本研究結(jié)果表明，4周跑臺(tái)訓(xùn)練可使PD模型大鼠紋狀體神經(jīng)元胞外DA濃度顯著升高，行為功能障礙顯著改善，表現(xiàn)為大鼠在曠場內(nèi)的自主活動(dòng)能力（移動(dòng)距離）顯著增加，且大鼠自主活動(dòng)能力與紋狀體神經(jīng)元胞外DA濃度之間存在高度的正相關(guān)關(guān)系。表明PD模型動(dòng)物行為功能的改善可能與運(yùn)動(dòng)干預(yù)減緩了紋狀體神經(jīng)元胞外DA濃度丟失有關(guān)。

6-OHDA是神經(jīng)遞質(zhì)DA的羥基化衍生物，進(jìn)入中樞后極易被DA能神經(jīng)元的DA轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)輸送到神經(jīng)元胞內(nèi)，通過氧化應(yīng)激途徑誘發(fā)神經(jīng)毒性作用，抑制線粒體呼吸鏈功能，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。因此，當(dāng)6-OHDA被局部注射到黑質(zhì)或者紋狀體后會(huì)特異性的損毀黑質(zhì)-紋狀體DA能神經(jīng)系統(tǒng)。根據(jù)6-OHDA所選擇的注射部位及劑量可以建立不同階段的PD大鼠模型，選擇的損傷位點(diǎn)通常包括黑質(zhì)、黑質(zhì)旁、紋狀體、MFB等；注射形式可采用單點(diǎn)或多點(diǎn)，也可采用雙側(cè)損毀或單側(cè)損毀；其中，單側(cè)損毀引發(fā)的損害呈進(jìn)行性趨勢，可部分模擬PD患者黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元漸進(jìn)性壞死的特點(diǎn)，因此較為常用。研究表明，規(guī)律的運(yùn)動(dòng)能夠增強(qiáng)機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)功能及自由基清除能力[33，34]，阻止炎性因子表達(dá)，抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)[35，36]。此外，運(yùn)動(dòng)通過神經(jīng)營養(yǎng)作用上調(diào)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell derived neurotrophic factor，GDNF）等神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)[37，38]。上述運(yùn)動(dòng)的神經(jīng)保護(hù)作用均可降低DA能神經(jīng)元對6-OHDA神經(jīng)毒素的易感性，促進(jìn)DA能神經(jīng)元的存活，增加紋狀體DA的合成以及紋狀體DA的利用率。但也有研究表明，運(yùn)動(dòng)并不能引起黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞數(shù)量或紋狀體TH陽性纖維終末含量的改變，這可能與運(yùn)動(dòng)介入時(shí)間及運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度等因素有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，在運(yùn)動(dòng)介入后PD模型大鼠紋狀體DA濃度和行為功能變化也出現(xiàn)“時(shí)序性”變化特征，進(jìn)一步說明運(yùn)動(dòng)的持續(xù)時(shí)間對神經(jīng)保護(hù)作用的產(chǎn)生及效果具有重要意義。

4 結(jié)論

PD模型大鼠總移動(dòng)距離與紋狀體DA濃度之間存在高度正相關(guān)，且二者均隨6-OHDA藥物及運(yùn)動(dòng)干預(yù)持續(xù)時(shí)間延長出現(xiàn)“時(shí)序性”變化特征。運(yùn)動(dòng)干預(yù)通過減緩紋狀體DA丟失改善PD模型大鼠行為功能障礙。推測其機(jī)制可能與運(yùn)動(dòng)的神經(jīng)保護(hù)作用減輕了6-OHDA神經(jīng)毒素對DA能神經(jīng)元的毒性損傷，促進(jìn)其存活有關(guān)。