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    食源性腹瀉副溶血弧菌分離株調(diào)查分析

    2018-07-18 09:39:00強鑫華周麗華王萍柳秋霞
    浙江臨床醫(yī)學(xué) 2018年5期
    關(guān)鍵詞:清液食源性弧菌

    強鑫華 周麗華 王萍 柳秋霞

    副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是我國沿海地區(qū)食源性暴發(fā)疾病中最常見的一種病原菌,近幾年隨著海鮮類食品在市場的廣泛流通,VP所引發(fā)的食物中毒的發(fā)生率也逐漸增多。從我國食源性疾病監(jiān)控網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)顯示,由VP引起的食物中毒呈顯著上升趨勢,成為我國首要食源性致病菌[1-2]。本文對125株VP季節(jié)分布及感染患者年齡特征、血清分型、毒力基因進行分析,為臨床治療提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 菌株來源 2014年1月至2016年12月本院腸道門診急性腹瀉患者糞便分離的VP,共125株。

    1.2 菌株分離鑒定 采集腹瀉患者新鮮糞便或肛拭子按照浙江省CDC《2015年食源性疾病主動監(jiān)測工作手冊》的要求接種培養(yǎng),對可疑分離菌株經(jīng)全自動細菌鑒定儀Vitek-compact2鑒定到種。

    1.3 菌株血清分型 使用副溶血性弧菌血清分型試劑盒進行菌體抗原(O)與莢膜抗原(K)凝集試驗。K抗原分型:直接取新鮮的 3%NaCl營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)物進行玻片凝集。O抗原分群:以0.85%生理鹽水懸浮培養(yǎng)物制成約7個麥?zhǔn)蠁挝坏木鶆驊乙海?21℃高壓1h后取裂解液進行玻片凝集。所用凝集血清均購自日本生研株式會社Denka Seiken公司,效期內(nèi)使用。

    1.4 毒力基因檢測 采用熱裂解法提取VP模板DNA,具體操作如下:將分離的副溶血菌株接種至5ml營養(yǎng)肉湯,37℃培養(yǎng)過夜,10000r/min離心5min,棄上清液;加入1ml生理鹽水,震蕩分散細菌,10000r/min離心5min,棄上清液;向沉淀中加100μl無菌蒸餾水,重新振蕩懸浮后置100℃水浴10min;13000r/min離心10min,上清液即為PCR擴增所用的模板DNA,最后應(yīng)用單重PCR檢測trh、tdh兩種毒力基因。

    1.5 主要儀器 Vitek-compact2鑒定儀,生物梅里埃公司生產(chǎn);DNA Engine PCR擴增儀,美國Bio-Rad公司生產(chǎn)。

    2 結(jié)果

    2.1 感染季節(jié)分布特點 125株VP感染患者的發(fā)病呈明顯季節(jié)分布,每年6~10月份為發(fā)病高峰期,冬春季發(fā)病較少,檢出最高峰在8~9月份。見圖1。

    圖1 125株副溶血弧菌年度季節(jié)分布特點

    2.2 感染患者年齡分布特點 VP感染的腹瀉患者年齡21~30歲占37.6%,31~40歲占24.8%,總體以青壯年為居多,見表1。

    2.3 血清學(xué)分型 125株VP,共分離出17個血清型,其中部分菌株在所購買的血清試劑盒范圍內(nèi)不凝集,血清可分型菌株占93.6%,其中O3:K6占59.2%,O4:K8占10.4%,其他血清型散在分布。本地區(qū)感染的VP以O(shè)3:K6、O4:K8為優(yōu)勢血清型。

    2.4 毒力基因 125株副溶血弧菌分離株中88.0%攜帶 tdh+/trh-毒力基因,6.40%攜帶 tdh-/trh-毒力基因,2株攜帶tdh+/trh+基因。見表2。

    表1 125例腹瀉感染患者年齡段分布[n(%)]

    表2 125株副溶血弧菌血清型分布及毒力基因攜帶情況

    3 討論

    VP主要分布于沿海、海河交界處及海產(chǎn)品中,然而隨著經(jīng)貿(mào)交通迅速發(fā)展,海產(chǎn)品在內(nèi)地城市大量銷售,但由于不能保證低溫貯運或保管不當(dāng),發(fā)生由VP引起的食物中毒事件越來越多,有沿海地區(qū)逐漸向內(nèi)地發(fā)展趨勢[3]。不同地區(qū)流行的VP菌株存在較大差異。文獻報道,湖州地區(qū)雖不是沿海城市,但VP感染患者時有發(fā)生,且呈逐年遞增的趨勢。本資料顯示,VP感染在夏季盛行,這與夏季氣溫高,病原菌繁殖迅速,食品易發(fā)生變質(zhì)。從感染人群分析,21~30歲的人感染率最高,處于這個年齡段的人,大多還處于學(xué)生階段亦或是剛步入社會,食用飯店、食堂、快餐店制作及小販兜售的食品、各類外賣居多,而這些地方食品制作不衛(wèi)生的可能性較大,增加食源性病原體污染食品的幾率。

    目前研究認為約75種VP的血清型與人類腹瀉有關(guān)[4]。本資料顯示,17種血清型中主要流行菌型為O3:K6占59.2%;其次是O4:K8占10.4%,與目前國內(nèi)外流行的血清型基本一致[5-7]。VP主要的致病因子包括耐熱的直接溶血素(TDH)和直接溶血相關(guān)毒素(TRH)。TDH不僅具有溶血活性,還具有細胞毒性、心臟毒性和腸毒性,是VP的主要毒力因子,TRH具有溶血作用和腸毒素作用,是VP的另一個重要的毒力因子。本資料用單重PCR擴增檢測,引起腹瀉的VP 88.0%攜帶tdh+/trh-,2株攜帶 tdh+/trh+。本資料顯示,8株不攜帶毒力基因 tdh-/trh-的菌株也具有致病性,推測這與III型分泌系統(tǒng)(T3SS)有關(guān)。目前研究表明,副溶血弧菌除TRH和TDH兩種毒力基因外,還存在T3SS,更有研究報道T3SS1與細胞毒素有關(guān),T3SS2與腸毒素有關(guān)[8]。

    隨著抗生素的濫用、環(huán)境因素及食品加工的不規(guī)范,使副溶血弧菌引發(fā)的食源性疾病治療難度有所升高,而副溶血弧菌的感染率還出現(xiàn)逐年遞增的趨勢。因此,應(yīng)加強對食源性腹瀉的預(yù)防和監(jiān)測。

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