MicroRNA-155表達與非小細胞肺癌放療敏感度關系的研究

蘇 群　李益民　韓鵬柄　董 方　張 明　高力英

（甘肅省腫瘤醫(yī)院放療科，甘肅 蘭州 730000）

肺癌是當前全球范圍內(nèi)的常見惡性腫瘤之一[1]。非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是最常見的肺癌類型，對放射治療呈中度敏感，約70% NSCLC患者需要接受放療[1]。但一些NSCLC患者對放療不敏感，從而影響了療效[2]。探索與放療敏感度相關的分子標志物，用以設計個體化的綜合治療方案是提高放療療效的重要手段[1-2]。microRNA-155（miR-155）由B細胞整合簇基因第3外顯子高度保守區(qū)域編碼，位于人染色體21q21[3]。miR-155屬于癌性微小RNA，已有多項研究表明miR-155在多種腫瘤中表達升高，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及患者預后關系密切[3-4]。但對于miR-155與放療敏感度關系的研究較少。因此，本次研究旨在組織水平了解miR-155表達與NSCLC患者放療敏感度的聯(lián)系，以期為改善NSCLC患者放療療效提供初步臨床依據(jù)。

1　材料與方法

1.1臨床資料：選取2011年5月至2016年12月就診于甘肅省腫瘤醫(yī)院的NSCLC患者60例，其中男性32例，女性28例，年齡41～69歲，鱗癌31例，腺癌29例。所有患者均經(jīng)病理診斷，術(shù)后接受三維適形放射治療，2 Gy/次，5次/周，治療總劑量達50～70 Gy，療程8周。

1.2RNA提取及實時熒光定量PCR：按照總RNA提取試劑盒（Qiagen）方法進行操作，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用TaqMan MicroRNA Assay試劑盒（Applied Biosystems）進行實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）。miR-155和內(nèi)參U6的上游引物分別為5'-ACACTCCA GCTGGGTTAATGCTAATCGTG-3'、5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'。通過比較循環(huán)數(shù)（Ct）計算miR-155的相對表達量。

1.3放療敏感度評價標準：按照WHO腫瘤療效評價標準進行療效評價，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病進展（PD）、穩(wěn)定（SD）。CR和PR定義為放療敏感，PD和SD為放療抵抗。

1.4統(tǒng)計學分析：計數(shù)資料采用例數(shù)表示，組間比較采用卡方檢驗；計量資料采用均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗。logistic回歸分析miR-155表達對放療敏感度的預測價值。使用SPSS 19.0進行統(tǒng)計學分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)　果

2.1miR-155表達水平與臨床病理因素的關系：60例患者中CR有10

例，PR有19例，SD有19例，PD有12例，放療敏感率為48%。qRTPCR結(jié)果顯示，放療抵抗組的miR-155表達水平高于放療敏感組（0.069±0.021 vs.0.035±0.019，P＜0.001）（圖1）。miR-155表達水平在不同年齡、性別、病理類型中無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），而與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移浸潤有關（P＜0.05）。

圖1　放療敏感組與放療抵抗組miR-155表達水平的比較

表1　miR-155表達水平與臨床病理因素的關系（

表1　miR-155表達水平與臨床病理因素的關系（

變量　例數(shù)　miR-155表達水平　t值　P值性別男性　32　0.046±0.029　1.49　0.14女性　28　0.056±0.022年齡(歲)≥60歲　35　0.052±0.031　0.40　0.69＜60歲　25　0.049±0.027病理類型腺癌　31　0.041±0.024　1.32　0.19鱗癌　29　0.051±0.034 TNM分期　7.04?。?.001Ⅰ期　18　0.026±0.017Ⅱ～Ⅳ期　42　0.067±0.022淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移　6.93　＜0.001陽性　24　0.071±0.010陰性　36　0.043±0.018

2.2miR-155表達水平與放療敏感度關系分析：以miR-155表達水平的均數(shù)為界值（0.052）將患者分為低表達（n=31）和高表達組（n=29），miR-155高表達組的NSCLC患者放療抵抗發(fā)生率高于低表達組（70% vs.29%，P＜0.05）。單因素及多因素logistic回歸分析均表明miR-155高表達是發(fā)生放療抵抗的危險因素（比值比3.99，95%CI 1.36-11.68，P＜0.05）。

3　討　論

放療是治療NSCLC的重要手段，但不同個體對放療的敏感度不同[1]。細胞凋亡、DNA損傷修復能力、細胞周期、缺氧程度、腫瘤干細胞等是影響腫瘤放射治療敏感度的重要因素，而miRNAs在調(diào)控腫瘤放射敏感度的作用是近年來研究的熱點問題[2]。Zang等[5]發(fā)現(xiàn)miR-155可通過調(diào)控Apaf-1影響細胞凋亡和DNA損傷，誘導NSCLC的發(fā)生發(fā)展。程田力等[6]研究顯示miR-155可通過下調(diào)靶基因PTEN的表達，促進肺腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。何斐等[7]納入7個研究進行meta分析發(fā)現(xiàn)，miR-155高表達預示NSCLC患者發(fā)生復發(fā)或轉(zhuǎn)移等腫瘤相關惡性結(jié)局風險增高（風險比1.48，95%CI 1.07～2.06）。新近Wang等[8]meta分析同樣發(fā)現(xiàn)miR-155高表達的NSCLC患者預后不良。但目前關于miR-155與NSCLC放療敏感度相關研究較少。

Babar等[9]在肺癌細胞中的體外研究結(jié)果提示，miR-155可能通過抑制FOXO3A、TP53INP1減弱放療敏感度，而抑制miR-155表達能提高放療效果。本次研究在組織水平檢測miR-155的表達水平，發(fā)現(xiàn)放療抵抗患者的miR-155表達水平較放療敏感患者增高，miR-155表達與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移浸潤有關，進一步校正混雜因素的logistic回歸分析結(jié)果表明癌組織中miR-155高表達的患者比低表達者出現(xiàn)放療抵抗風險升高約4倍。因此，miR-155可能是NSCLC放療療效的重要預測指標，在患者接受放療前檢測癌組織中miR-155表達水平有助于實現(xiàn)NSCLC患者的個性化治療。

綜上所述，NSCLC患者在接受放療前癌組織中miR-155的表達水平與對放射線的敏感度呈負相關，miR-155有望成為預測放療療效的重要指標。檢測miR-155表達能否改善非小細胞肺癌患者預后以及能否將miR-155作為非小細胞肺癌治療的重要靶點，有待于進一步的研究探索。