3種前處理對食用油中苯并芘測定的影響

喻璽 李素媛 劉恒

摘 要：該研究比較了氧化鋁柱、分子印跡柱和凝膠色譜3種前處理方法，用于反相高效液相色譜熒光法測定食用油中苯并芘的含量，以保留時間定性、外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，在1～20ng/mL線性范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)為0.999773，方法檢出限為0.1μg/kg，氧化鋁柱法平均回收率為119.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.6%；分子印跡柱法平均回收率為90.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.0%；凝膠滲透色譜法平均回收率為100.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%。同時用3種方法對質(zhì)控樣測試，經(jīng)比較，凝膠滲透色譜法重現(xiàn)性、靈敏度高于另外2種方法，適用于食用油中苯并芘的測定。

關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜；苯并芘；凝膠滲透色譜；油

中圖分類號 TS225.11 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）03-04-0076-3

Abstract： Compared the alumina column，molecularly imprinted column and gel permeation chromatography（GPC） three pretreatment methods，by using reversed-phase high performance liquid chromatography（RP-HPLC） with fluorescence detection to determine the benzo（a）pyrene content in edible oil，using retention time for qualitative analysis and external standards for quantitative analysis.The results showed that in the linear range of 1～20ng/mL，the linear correlation coefficient was 0.999773，the method detection limit was 0.1μg/kg，the average recovery rate of alumina column was 119.0%，and the relative standard deviation （RSD） was 3.6%.The average recovery rate of molecularly imprinted column method was 90.0%，and the relative standard deviation （RSD） was 5.0%.The mean recovery of gel chromatography was 100.0% and the relative standard deviation （RSD） was 2.1%.At the same time，three methods were used to test the quality control samples.After comparison，gel chromatographic method was more reproducible and more sensitive than the other two methods，which were applicable to the determination of benzopyrene in edible oil.

Key words： Reversed-phase high performance liquid chromatography（RP-HPLC）；Benzo（a）pyrene；Gel permeation chromatography（GPC）；Oil

苯并（a）芘[1]是由一個苯環(huán)和一個芘分子結(jié)合而成的一種五苯環(huán)芳烴化合物，具有很強的致癌性[2-5]。生產(chǎn)生活中燃料不完全燃燒產(chǎn)生的廢氣，食品熏制、烘烤和煎炸過程中都會產(chǎn)生苯并芘[6-8]，嚴(yán)重危害著人們的健康。我國強制性標(biāo)準(zhǔn)《GB 5009.27-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并（a）芘的測定》規(guī)定了谷物及其制品、肉及肉制品、水產(chǎn)動物及其制品、油脂及其制品中苯并（a）芘的檢測，不同的食品用不同的預(yù)處理和提取方法，標(biāo)準(zhǔn)提供的前處理方法主要有中性氧化鋁柱和分子印跡柱2種凈化方式。然而空氣中水分、陽光的照射、不同品牌甚至不同批次對氧化鋁活性皆有影響[9]；不同品牌的分子印跡柱質(zhì)量也存在差異。故而，當(dāng)這2種凈化方法得出的結(jié)果存在差異時，需要一種更可靠的方法來保證最終結(jié)論的準(zhǔn)確性。凝膠滲透色譜[10-12]（GPC）是目前應(yīng)用比較廣泛的一種前處理方法，能有效去除油脂、多糖、高聚物、蛋白質(zhì)等高分子基質(zhì)的干擾，且凝膠滲透色譜系統(tǒng)密閉，可有效避免試劑揮發(fā)，在保證樣品高效分離的同時，又能保護操作人員的身體健康和實驗室安全[13-15]。將GPC用于食用油中苯并芘檢測的前處理，是一種新型、準(zhǔn)確、快捷的手段，本文將3種方法比較，結(jié)果較為滿意。根據(jù)《GB 2716-2005食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的最大限量值為10μg/kg，當(dāng)實際檢測結(jié)果在限量值附近時，國標(biāo)上規(guī)定的2種方法若出現(xiàn)不一致的結(jié)論，用GPC可以更方便檢驗人員作出更準(zhǔn)確的判定。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑 食用植物油，苯并芘標(biāo)品（純度99.5%），苯并芘食用油質(zhì)控樣（中國檢驗檢疫科學(xué)研究院測試中心），乙腈（色譜純）、環(huán)己烷（色譜純）、乙酸乙酯（色譜純），水為去離子高純水。氧化鋁固相萃取柱（ProElut BaP 22g/60mL，迪馬科技），分子印跡柱（BAP-3，成都雅源科技有限公司），色譜柱（C18，5μm，4.6mm×250mm，Waters），GPC-全自動定量濃縮儀（LC-Tech Freestyle），高效液相色譜儀（Waters e2695）

1.2 實驗條件

1.2.1 色譜條件 流動相為乙腈+水（88+12，v/v），流速1.0mL/min，激發(fā)波長384nm，發(fā)射波長406nm，進樣量為10μL，柱溫35℃。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 稱取苯并（a）芘標(biāo)品1mg（精確至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲苯溶解定容，此母液濃度為100μg/mL。用此母液逐級稀釋，配制標(biāo)準(zhǔn)系列1ng/mL，2ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL。

1.2.3 氧化鋁柱前處理方式 稱取試樣1.0g（精確至0.001g）于50mL離心管，加入20mL正己烷，渦旋混合1min，超聲5min，離心3min，重復(fù)一次合并提取液。減壓蒸餾提取蒸干，用5mL正己烷溶解，待凈化。氧化鋁柱用30mL正己烷活化，上樣，用70mL正己烷淋洗，收集所有流出液，渦旋蒸干，加入1mL乙腈定容，用過0.22μm有機濾膜，待上機。

1.2.4 分子印跡柱前處理方式 稱取試樣0.5g（精確至0.001g），取3mL正己烷稀釋，固相萃取柱用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化，上樣，用10mL正己烷淋洗，再用5mL二氯甲烷洗脫，收集解吸液用氮氣吹干，加入1mL乙腈定容，過0.22μm有機濾膜，待上機。

1.2.5 GPC前處理方式 準(zhǔn)確稱取油樣2g（精確至0.001g），用流動相（環(huán)己烷∶乙酸乙酯=1∶1，v/v）定容至10mL，混合均勻后轉(zhuǎn)移至GPC進樣瓶中，上樣（GPC凈化條件∶進樣量：5mL，流速：5mL/min，循環(huán)冷卻水：4.0℃，棄去前32min組分，接收14min，沖洗色譜柱5min），濃縮至2mL，準(zhǔn)確移取1mL至進樣瓶。取出進樣瓶用氮氣吹干，準(zhǔn)確加入1mL乙腈溶解，渦旋1min，過0.22μm有機濾膜，待上機。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系及檢出限 按照優(yōu)化的條件將苯并芘的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度進樣，確定保留時間為26min，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制工作曲線。在1～20ng/mL線性范圍內(nèi)，苯并芘的線性回歸方程為y=9.49e+005x+1.82e+006，線性相關(guān)系數(shù)r2為0.999773。連續(xù)進樣，不斷稀釋濃度，得到方法檢出限為0.1μg/kg。

2.2 3種前處理方法精密度實驗 向不含苯并芘的植物油中添加苯并芘標(biāo)樣10ng，用上述3種方法分別檢測并進行6平行實驗，檢測值、平均值、回收率及RSD結(jié)果見表1。由表1可知，當(dāng)添加量為10ng時，3種方法的RSD皆在5%以內(nèi)，說明3種方法都比較可靠，符合實驗要求，其中GPC的RSD%比另2種方法小，說明GPC方法的系統(tǒng)誤差更小，精密度更高，可以作為一種新的驗證方法。

2.3 實際樣品的檢測 用上述3種方法對質(zhì)控樣品進行測試分析，檢測結(jié)果與實際參考值進行比較，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.7%～5.4%，GPC測得值與參考值更接近，進一步說明GPC方法具有較高的可靠性，精密度，符合檢驗要求，可以作為一種驗證方法。

3 結(jié)論

食用油樣品基質(zhì)背景復(fù)雜，干擾檢測結(jié)果的判定，最新的國標(biāo)GB 5009.27-2016提供了氧化鋁柱和分子印跡柱2種前處理方式，但是當(dāng)樣品中的苯并芘含量在限量值附近時，可能碰見不一致的結(jié)論，GPC可以作為一種新的佐證方法，可以提高工作效率，也可以提高分析的準(zhǔn)確度和精密度，為檢測機構(gòu)檢測結(jié)果填報，方法驗證提供新的思路。

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（責(zé)編：張宏民）