復方林可霉素乳膏的質(zhì)量標準改進研究

王 健 ，孫 瑜，李維超

(1. 天津市兒童醫(yī)院，天津 300074； 2.天津中醫(yī)藥大學，天津 300193)

復方林可霉素乳膏是本院新研制的醫(yī)院制劑，鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德為處方中的兩種主要成分，臨床用于治療異位性皮炎，同時該藥也可用于治療濕疹、接觸性皮炎、神經(jīng)性皮炎和摩擦性苔癬樣疹等變態(tài)反應性皮膚病[1]。制劑的原質(zhì)量標準[2]只對鹽酸林可霉素進行定性和定量檢測，而并無醋酸曲安奈德的鑒別和含量測定項。國內(nèi)文獻未見對鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德同時定量測定方法的報道，為了完善制劑的質(zhì)量控制標準，本文建立了鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德兩組分同時定量和分別定性鑒別的檢測方法，專屬性強，準確度高。

1 儀器與試藥

1.1儀器 LC-2010A高效液相色譜儀，紫外檢測器，Lcsolution工作站(日本島津公司)，F(xiàn)E20K酸度計(梅特勒-托利多公司)，XS型分析天平(梅特勒-托利多公司)。

1.2藥品 鹽酸林可霉素對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號130432-201109，純度85.4%)，醋酸曲安奈德對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號100125-201105，純度99.8%)，甲醇(天津市康科德科技有限公司，色譜純)，四硼酸鈉(天津市勱特吉爾環(huán)保技術(shù)研究所，色譜純)，磷酸(天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心，色譜純)，復方林可霉素乳膏(本院制劑室提供，批號20130501、20130601、20130701，規(guī)格：15 g/支)，水為純化水(本院制劑室自制)。

2 處方

鹽酸林可霉素10 g，醋酸曲安奈德0.25 g，十二烷基硫酸鈉9.25 g，十八醇101.75 g，白凡士林185.0 g，液狀石蠟55.5 g，甘油46.25 g，羥苯乙酯0.93 g，乙醇和純化水適量，制成1 000 g乳膏。

3 質(zhì)量標準的建立

3.1性狀、鑒別和檢查 根據(jù)2015版《中國藥典》有關(guān)項下規(guī)定，分別對復方林可霉素乳膏進行性狀、鑒別、檢查等相關(guān)試驗[3-5]，結(jié)果均符合規(guī)定。

3.2含量測定

3.2.1色譜條件 色譜柱：Shim-pack VP-ODS C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：甲醇 -0.05 mol/L四硼酸鈉溶液(用磷酸調(diào)pH至6.0)(65∶35)；柱溫：30 ℃；流速：1 ml/min；檢測波長：240 nm；進樣量：15 μl。理論板數(shù)按鹽酸林可霉素、醋酸曲安奈德計均大于2 500，分離度均大于1.5，色譜測定峰與其他峰達到基線分離。

3.2.2溶液配制

3.2.2.1對照品溶液 精密稱取鹽酸林可霉素對照品20.36 mg，置于10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度；精密稱取醋酸曲安奈德對照品5.27 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密量取2種貯備液各5 ml，置于同一50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成含鹽酸林可霉素203.6 μg/ml、含醋酸曲安奈德5.27 μg/ml的混合對照品溶液。

3.2.2.2供試品溶液 精密稱取復方林可霉素乳膏0.3 g(約相當于鹽酸林可素3 mg，醋酸曲安奈德0.075 mg),置于碘量瓶中，加甲醇30 ml,80 ℃水浴使之溶解，放冷,4 ℃冷藏30 min濾過，濾液至1 000 ml量瓶中，殘渣用30 ml甲醇分4次洗滌，合并洗液與濾液，用甲醇稀釋至刻度，搖勻制成供試品溶液。

3.2.2.3陰性樣品溶液 按處方工藝制備除鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德之外的空白基質(zhì)，按“3.2.2.2”項下的方法處理成陰性樣品溶液。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各15 l，注入高效液相色譜儀，按“3.2.1”項下色譜條件分析，結(jié)果空白輔料對樣品測定無干擾，供試品主峰的保留時間與對照品主峰的保留時間基本一致。色譜圖見圖1。

1.鹽酸林可霉素 2.醋酸曲安奈德

3.2.3標準曲線的制備 精密量取“3.2.2.1”項下對照品溶液適量，分別配制成含鹽酸林可霉素2.0、2.4、2.8、3.0、3.6和4.0 μg/ml，含醋酸曲安奈德0.050、0.060、0.070、0.075、0.090和0.100 μg/ml的溶液。注入高效液相色譜儀15 μl，按照“3.2.1”項下色譜條件測定，以對照品的濃度(μg/ml)為橫坐標X，以測得的峰面積為縱坐標Y，進行線性回歸分析，求得回歸方程：鹽酸林可霉素：Y=1 559 062.15X-14 931.70(r=0.999 5)；醋酸曲安奈德：Y=35 551.124 3X-3 399.76(r=0.999 0)。結(jié)果表明，鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德的濃度分別在2.036～4.072 μg/ml和0.052 7～0.105 4 μg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

3.2.4精密度試驗 取“2.2.2.1”項下對照品溶液，按照“3.2.1”項下色譜條件進行日內(nèi)精密度分析，連續(xù)進樣6次，每次15 μl，測定峰面積，結(jié)果鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德的日內(nèi)精密度RSD分別為0.45%和0.89%。另取同樣對照品溶液每日測定1次，測定6次，進行日間精密度分析，結(jié)果鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德的日間精密度RSD分別為0.53%和0.94%，表明該方法精密度良好。

3.2.5重復性試驗 取批號為20130501同批次樣品6份，按“3.2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按照“3.2.1”項下色譜條件分析，每次進樣量為15 μl，結(jié)果鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德RSD分別為0.79%和1.06%，表明方法的重復性良好。

3.2.6穩(wěn)定性試驗 取批號為20130501樣品適量，按“3.2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按照 “3.2.1”項下色譜條件分析，分別在0、2、4、6、12和24 h進樣15 μl，測得鹽酸林可霉素峰和醋酸曲安奈德峰面積值的RSD分別為1.42%和1.09%，表明24 h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

3.2.7回收率試驗 精密稱取復方林可霉素乳膏9份，每份0.15 g，分別加入高、中、低三個濃度的鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德對照品溶液6、7.5和9 ml，每個濃度三份，按“3.2.1.2”項下方法制備成供試品溶液；按照“3.2.2”項下方法進樣測定，并計算回收率，結(jié)果鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德平均回收率分別為99.27%和99.35%，RSD%分別為1.01%和0.91%。見表1和表2。

表1 鹽酸林可霉素回收率試驗結(jié)果(n=9)

表2 醋酸曲安奈德回收率試驗結(jié)果(n=9)

3.2.8樣品含量測定 取3批樣品，按“3.2.2.2”項下方法配制樣品溶液，再分別精密量取供試品溶液和混合對照品溶液注入液相色譜儀，按照“3.2.1”項下色譜條件分析，進樣15 μl，記錄色譜圖，測定鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德峰面積，計算樣品含量(n=3)，結(jié)果見表3，測定結(jié)果符合為標示量95%～105%的含量標準(本制劑標示量為每1 g乳膏中含鹽酸林可霉素10 mg、含醋酸曲安奈德0.25 mg)。

表3 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

4 討論

復方林可霉素乳膏是由鹽酸林可霉素、曲安奈德等藥物組成，臨床用于治療異位性皮炎、接觸性皮炎、神經(jīng)性皮炎、濕疹和摩擦性苔癬樣疹等變態(tài)反應性皮膚病，療效等同于復方氯霉素乳膏，但又避免了氯霉素可能出現(xiàn)的不良反應。

本實驗篩選了多組流動相比例，發(fā)現(xiàn)甲醇-0.05 mol/L四硼酸鈉溶液(65∶35)等度洗脫即可得到較好的峰型，且兩組分相對保留時間適宜，達到良好的分離效果。

鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德的《中國藥典》測定方法中檢測波長分別為214和240 nm[3]，通過紫外分光光度計在200～400 nm波長掃描鹽酸林可霉素對照品溶液，發(fā)現(xiàn)240 nm依然有一定強度的紫外吸收，且樣品中醋酸曲安奈德的含量更低，為提高其檢測靈敏度，故本試驗選擇240 nm作為檢測波長。

本實驗成功建立了鹽酸林可霉素和醋酸曲安奈德兩組分同時定量和分別定性鑒別的檢測方法，實驗操作簡便，結(jié)果準確可靠，可作為復方林可霉素乳膏的質(zhì)量標準。

1 陳新謙.新編藥物學[M]．第17版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2011: 94，626

2 林宏，陳貴起. 復方林可霉素乳膏質(zhì)量標準研究[J].天津藥學，2011, 23(1)：18-20

3 中國藥典[S].二部.2015：附錄Ⅲ 22，附錄115，附錄89,728,268

4 張紅，劉祖雄. 復方曲安奈德涂膜劑的制備與質(zhì)量控制[J].中國藥業(yè)，2010,19(9)：39-40

5 謝杰.外用軟膏劑不同基質(zhì)的作用及制備工藝[J].中國現(xiàn)代應用藥學，2010,4(20)：143-144