中藥川芎對(duì)Ⅰ型膠原蛋白含量表達(dá)的影響

正畸治療是臨床常見(jiàn)的治療方式，且受多方面因素的影響，其臨床應(yīng)用率呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，而治療過(guò)程中的骨代謝變化明顯，表現(xiàn)為破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的相互作用與影響，因此成骨細(xì)胞在本類患者中的研究占比較高，而Ⅰ型膠原蛋白作為成骨細(xì)胞分泌生成的重要原膠原[1]，在正畸治療過(guò)程中的作用明顯，且其表達(dá)水平有助于了解成骨細(xì)胞的作用情況。中藥川芎是臨床中具有較強(qiáng)補(bǔ)骨強(qiáng)腎作用的中藥，其對(duì)成骨細(xì)胞的影響研究不足。因此本研究就中藥川芎對(duì)Ⅰ型膠原蛋白含量表達(dá)的影響進(jìn)行探究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料

以小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3-E1為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以濃度1 μg/ml、5 μg/ml、10μg/ml、15 μg/ml、20 μg/ml的川芎提取液及西藥干預(yù)作為觀察組及對(duì)照組1組，并以α-MEM培養(yǎng)液干預(yù)為對(duì)照組2組。

1.2 方法

1.2.1 材料 鹽酸川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自北京億諾輝科技發(fā)展有限公司；小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3-E1購(gòu)自上海中科院細(xì)胞庫(kù)；二甲基亞砜購(gòu)自Sigma公司；胎牛血清購(gòu)自杭州四季青公司；小鼠Ⅰ型膠原酶聯(lián)免疫分析試劑盒購(gòu)自上海嵐派生物科技有限公司。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 首先將小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3-E1進(jìn)行培養(yǎng)，穩(wěn)定二氧化碳（5%）水平二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，溫度為37℃，濕度在95%，培養(yǎng)液更換間隔時(shí)間為2.0 d，細(xì)胞匯合度至80%～90%時(shí)采用0.25%胰蛋白酶進(jìn)行消化細(xì)胞處理，進(jìn)行傳代。鹽酸川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品采用對(duì)倍稀釋法處理，制備成濃度分別 為 1 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、15 μg/ml及 20 μg/ml的川芎藥液，另制備重組人胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）100 ng/ml濃度藥液，其中川芎組為觀察組，IGF-Ⅰ組作為對(duì)照1組，另以α-MEM培養(yǎng)液加入的空白對(duì)照組作為對(duì)照2組，其中觀察組與對(duì)照組1組均于干預(yù)24 h及48 h各檢測(cè)1次，每次均設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。采用小鼠Ⅰ型膠原酶聯(lián)免疫分析試劑盒進(jìn)行Ⅰ型膠原蛋白含量的檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究中的數(shù)據(jù)檢驗(yàn)軟件為SPSS20.0，計(jì)量資料的表示方式為（±s），兩兩比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，重復(fù)測(cè)量的計(jì)量資料進(jìn)行方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

干預(yù)后24 h及48 h觀察組及對(duì)照組1組的Ⅰ型膠原蛋白含量表達(dá)均高于對(duì)照組2組，觀察組則高于對(duì)照組1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），觀察組濃度10 μg/ml的Ⅰ型膠原蛋白含量表達(dá)均高于其他濃度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳細(xì)比較見(jiàn)表1。

3 討論

正畸治療過(guò)程中的牙周組織變化及骨代謝狀態(tài)均表現(xiàn)明顯，因此臨床中對(duì)于此方面的干預(yù)研究多見(jiàn)，而為達(dá)到有效促進(jìn)牙齒的矯正及降低復(fù)發(fā)的目的，對(duì)于骨組織形成與改建的平衡與維持成為研究重點(diǎn)之一[2-4]。成骨細(xì)胞作為骨形成的主要功能細(xì)胞，其分泌的Ⅰ型膠原蛋白是骨代謝過(guò)程中的有效指標(biāo)，在提高骨強(qiáng)度及保持骨架完整性方面均有突出的作用，因此提升Ⅰ型膠原蛋白的含量成為正畸治療過(guò)程中的重要方面[5-9]。臨床中關(guān)于中藥川芎的研究多見(jiàn)，其強(qiáng)補(bǔ)骨強(qiáng)腎作用提示了本藥對(duì)于骨代謝的影響作用，但是關(guān)于中藥川芎對(duì)成骨細(xì)胞分泌Ⅰ型膠原蛋白的研究相對(duì)不足，因此對(duì)本方面的進(jìn)一步細(xì)致研究十分必要。

本研究結(jié)果顯示，濃度 1 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、15 μg/ml、20μg/ml的川芎提取液干預(yù)后24 h及48 hⅠ型膠原蛋白含量表達(dá)均高于IGF-Ⅰ及空白對(duì)照組，且濃度10 μg/ml川芎提取液干預(yù)后的Ⅰ型膠原蛋白含量表達(dá)均高于其他濃度，說(shuō)明川芎提取液對(duì)成骨細(xì)胞的影響明顯。這可能與中藥川芎對(duì)成骨細(xì)胞的增殖促進(jìn)作用有關(guān)[10-11]，并對(duì)成骨細(xì)胞分泌Ⅰ型膠原蛋白具有積極的調(diào)控作用，因此表現(xiàn)為表達(dá)水平的提升，進(jìn)而在骨重建過(guò)程中提供了必要的基礎(chǔ)條件[12]，同時(shí)也提示了中藥川芎在正畸治療中的應(yīng)用可取性。

綜上所述，中藥川芎可有效促進(jìn)Ⅰ型膠原蛋白含量的表達(dá)，以濃度10μg/ml相對(duì)更好。

表1 三組干預(yù)后24 h及48 h的Ⅰ型膠原蛋白含量表達(dá)情況比較

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