坍塌反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白2在膀胱尿路上皮癌中的表達及其與預(yù)后的相關(guān)性

程倩， 楊建昆， 杜曉媛

（1.錦州醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院 病理學(xué)教研室，遼寧錦州121000；2.南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院，廣東廣州510630）

坍陷反應(yīng)介導(dǎo)蛋白（collapsing response mediator proteins，CRMPs）又稱 TUC（TOAD-64、Ulip、DRP），是大腦發(fā)育過程中高度表達的胞質(zhì)磷酸蛋白，最初是在Sema3信號研究和神經(jīng)分化研究中發(fā)現(xiàn)的［1-4］.近來，越來越多的研究顯示，CRMPs與腫瘤的發(fā)生、進展以及疾病預(yù)后密切相關(guān).CRMP2作為CRMPs家族成員中的重要成員，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其具有多種細胞生物學(xué)功能.前期研究已證實CRMP2在結(jié)腸癌、非小細胞肺癌和乳腺癌中均高表達，提示CRMP2可能是腫瘤發(fā)生進展的重要基因.因此，本研究檢測CRMP2在非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌中（Non-muscle invasive bladder cancer，NMIBC）的表達水平，分析其與臨床病理特征的相關(guān)性，探討其在腫瘤復(fù)發(fā)、進展及生存時間中的預(yù)測價值，為膀胱尿路上皮癌預(yù)后評估提供新的判斷依據(jù)，并為膀胱癌個性化治療提供新的可能的治療靶標，具有十分重要的臨床意義.

1 研究對象和方法

1.1 研究對象

回顧性收集2005年5月至2009年5月遼寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院及遼河油田總醫(yī)院130例非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌（NMIBC）石蠟包埋標本切片，所有患者均病理確診為無轉(zhuǎn)移的NMIBC.排除標準包括：（1）臨床或病理資料不全；（2）合并其他部位腫瘤或者其他成分腫瘤（腺癌、鱗癌、肉瘤）；（3）隨訪資料缺失（病人在2年內(nèi)失訪）.平均年齡68.5歲（47～81歲），男 71例，女 59例，Ta期67例，T1期63例.15例膀胱鏡檢取材正常膀胱黏膜作為對照，平均年齡67歲（63～75歲），男8例，女7例.本研究申請了參與單位倫理審查委員會的審核并獲得了實驗批準.所有受試人員在試驗前均已知情研究內(nèi)容，并簽署了相關(guān)知情同意書.

1.2 主要試劑及儀器

免疫組化試劑盒（凱基KGOS60），二甲苯、無水乙醇、檸檬酸鈉、雙氧水、蘇木素、PBS粉、Triton-100，包埋機，切片機（美國Therom公司），烘干機，倒置顯微鏡（日本Olympus公司），Milli-Q純水器（Millipore）.

1.3 實驗方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)技術(shù)

將切片置于烤箱中55℃1 h.3缸二甲苯，每缸各浸泡5min脫蠟.梯度酒精（體積分數(shù)分別為100%、95%、80%、75%）水化.體積分數(shù)為3%的H2O2中微波低火3 min去除內(nèi)源性過氧化物酶.去離子水 I、去離子水 II各 1 min.濃度為 10 mmol/L檸檬酸鈉緩沖液（PH 6.0）高壓鍋抗原修復(fù)，在修復(fù)液中自然冷卻.去離子水I、去離子水Ⅱ各1 min.3缸PBST（PBS 200 mL+體積分數(shù)4%Triton 250μL）潤洗，各 5 min.玻片甩干，擦片，免疫組化筆畫圈，范圍可稍大避免邊緣效應(yīng).在濕盒上平鋪玻片，滴加一抗兔抗人CRMP2抗體（體積比為1∶200，abcam，ab129082），4℃冷庫孵育過夜.取出玻片，3缸PBST浸洗，每次5 min.甩干，擦干背側(cè)及圈外水分，滴加二抗，37℃溫箱中30 min.DAB顯色，蘇木素復(fù)染.梯度酒精體積分數(shù)分別為75%、80%、95%、100%）各3～5 min進行脫水.二甲苯透明后中性樹膠封片.風(fēng)干2～3 d.

1.3.2 染色強度評判

在不知道任何臨床資料和病理資料的情況下，對免疫組化切片進行評估，本研究入選的所有患者病理玻片均由遼寧醫(yī)學(xué)院病理教研室資深醫(yī)師在相同條件下觀察每張切片后對結(jié)果作出判斷.陽性染色程度分為4級：無染色為0分（-），淡黃色定為1分（+），棕黃色評為2分（++），棕褐色則為3分（+++）.陽性細胞百分率的判斷：每張切片隨機地至少選取4個不同高倍鏡下取視野，每個視野計數(shù)至少100個細胞，計算陽性細胞所占百分比進行評分：0分，0%；1分，1%～25%；2分，26%～50%；3分，51%～75%；4分，76%～100%［5］.每個樣本的最終綜合評分為染色強度評分與陽性細胞百分比之積，結(jié)果判定：0分為陰性，1～2分表示弱陽性（+），3～8分提示中度陽性（++），9～12分為強陽性（+++）.本研究以綜合評分≥4分為陽性，＜4分為陰性.

1.4 隨訪方案

遵中華泌尿外科學(xué)會膀胱癌診療指南，所有病例在TURBT術(shù)后兩年內(nèi)每3個月行膀胱鏡檢查1次，3～5年每6個月行膀胱鏡檢查1次，此后每年1次.復(fù)發(fā)定義為膀胱鏡檢查或者影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)膀胱內(nèi)菜花狀結(jié)節(jié)，或者可疑黏膜活檢證實為膀胱癌.進展定期為復(fù)發(fā)后再次手術(shù)的病理出現(xiàn)分級或者分期進展，影像學(xué)發(fā)現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移.

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

所有統(tǒng)計分析均采用SPSS 16.0軟件.本研究主要觀察終點為復(fù)發(fā)和進展.用K-M生存曲線分析各因素對NMIBC術(shù)后復(fù)發(fā)率和進展率的影響，Log-rank比較組間差異.Cox回歸分析探討觀NMIBC復(fù)發(fā)和進展的獨立影響因素.P＜0.05認為有統(tǒng)計學(xué)差異.

2 結(jié)果

2.1 病人基本資料特征與CRMP2關(guān)系

130例患者的臨床病理信息詳見表1.經(jīng)免疫組化分析，按照課題組既定的陽性及陰性診斷標準（半定量評估方法），經(jīng)兩個病理學(xué)專家分析，結(jié)果顯示CRMP2免疫組化染色主要定位是在細胞漿，亦有少許細胞核存在陽性表達（圖1）.經(jīng)統(tǒng)計CRMP2低度陽性表達患者共計70例，高度陽性表達共計60例.結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌組織中CRMP2表達水平與患者的年齡、性別、手術(shù)方式以及腫瘤大小無明顯的相關(guān)性.而CRMP2表達水平在腫瘤分級較高的膀胱尿路上皮癌組織顯著高于腫瘤分級較低的膀胱尿路上皮癌組織標本（P＝0.009）.此外，復(fù)發(fā)性非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌組織中CRMP2表達水平要顯著高于無復(fù)發(fā)的非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌組織（P＜0.01）.術(shù)后發(fā)生腫瘤進展的非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌組織中CRMP2的表達水平顯著地高于術(shù)后沒有發(fā)生進展的非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌（P＜0.01）.

表1 130例膀胱尿路上皮癌患者臨床病理特征與CRMP2表達水平相關(guān)性Table 1 The clinicopathological features of 130 cases of bladder urothelial carcinoma and the relationships of CRMP2 expression level n（%）

圖1 CRMP2在正常膀胱粘膜和膀胱癌組織表達免疫組化染色（IHC）代表圖Fig.1 Immunohistochemical staining（IHC）expression level of CRMP2 in normal bladdermucosa and bladder cancer tissue

2.2 CRMP2表達水平與膀胱尿路上皮癌預(yù)后相關(guān)性

通過36～100個月的隨訪；在隨訪期內(nèi)發(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)的有53例（40.8%），發(fā)生腫瘤進展的有21例（16.2%）；其中14例在隨訪期內(nèi)死亡（10.7%）.生存分析結(jié)果顯示CRMP2高表達的膀胱尿路上皮癌患者復(fù)發(fā)率明顯高于CRMP2低表達的患者（P＜0.001，圖 2A）.而 CRMP2高表達患者的腫瘤進展率明顯高于CRMP2低表達患者（P＝0.038，圖2B）.CRMP2高表達患者腫瘤總體生存率明顯低于CRMP2低表達患者（P＝0.024，圖2C）.

圖2 CRMP2表達水平與膀胱尿路上皮癌預(yù)后的相關(guān)性的生存分析Fig.2 Survival analysis of the correlation between CRMP2 expression level and the prognosis of bladder urothelial carcinoma

2.3 CRMP2是膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)和進展的獨立危險因素

為探討CRMP2是否是影響患者預(yù)后的獨立危險因素，課題組將觀察終點設(shè)定為腫瘤復(fù)發(fā)和進展.為進一步探討CRMP2表達水平是否是膀胱尿路上皮癌術(shù)后復(fù)發(fā)和進展的獨立危險因素.首先將患者年齡、性別、手術(shù)方式、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、腫瘤分級、原發(fā)腫瘤病理分期和CRMP2表達水平納入單因素分析，將單因素分析結(jié)果中有統(tǒng)計學(xué)意義的變量納入多因素模型分析中.對于膀胱尿路上皮癌術(shù)后復(fù)發(fā)這一觀察終點，單因素分析結(jié)果顯示腫瘤分級、腫瘤數(shù)目及CRMP2表達水平與非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān).進一步用Cox回歸多因素分析顯示腫瘤分級、腫瘤數(shù)目及CRMP2表達水平是非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素（表2）.對于腫瘤進展這一觀察終點，單因素分析顯示原發(fā)腫瘤病理分期、腫瘤數(shù)目、腫瘤分級及CRMP2表達水平與膀胱尿路上皮癌術(shù)后發(fā)生進展密切相關(guān).進一步多因素分析顯示腫瘤分級、腫瘤分期和CRMP2表達水平是非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌術(shù)后腫瘤進展的獨立危險因素（表3）.

表2 膀胱尿路上皮癌術(shù)后首次復(fù)發(fā)獨立危險因素單因素及多因素分析Table 2 Univariate and multivariate factors of independent risk factors for the first recurrence of bladder urothelial carcinoma after operation

表3 膀胱尿路上皮癌術(shù)后進展的獨立危險因素單因素分析及多因素模型Table 3 Univariate and mu ltivariate factors of independent risk factors for the first p rogression of bladder urothelial carcinoma after operation

3 討論

膀胱尿路上皮癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤.隨著現(xiàn)代腫瘤生物學(xué)研究的迅速進展，很多與膀胱尿路上皮癌相關(guān)的腫瘤生物分子標志物被研究和證實，初步揭示其在膀胱尿路上皮癌的早期診斷、風(fēng)險評估、復(fù)發(fā)進展以及死亡中的重要作用.有些生物分子還被證實了潛在的治療靶標，但這些膀胱尿路上皮癌標志物均存在敏感性和特異性低的問題，難以切實應(yīng)用到膀胱尿路上皮癌臨床診斷、預(yù)后及治療中.

CRMPs是在Sema3信號研究和神經(jīng)分化研究中發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)高度表達的胞質(zhì)磷酸蛋白，該家族存在5個成員（CRMP1～CRMP5），具有很高的序列同源性，對神經(jīng)生長和分化起重要作用.近年來，越來越多的研究報道CRMPs在人類腫瘤組織中差異性表達，并與臨床病理特征及患者預(yù)后密切相關(guān).CRMP1在肺癌組織中比癌旁正常組織明顯低表達，CRMP1低表達提示疾病預(yù)后差，疾病進展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，術(shù)后早期復(fù)發(fā)、生存時間短［5-7］.CRMP1的新異構(gòu)體 LCRMP1表達也與非小細胞肺癌患者的臨床結(jié)局和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān).LCRMP1和CRMP1在調(diào)節(jié)癌癥細胞侵襲和轉(zhuǎn)移中具有相反的功能［6，8-9］.CRMP2與結(jié)直腸癌和乳腺癌進展相關(guān)［10-11］.與其他正常組織比較，CRMP2在結(jié)直腸正常組織或癌組織中高表達.結(jié)直腸癌標本中 CRMP2陽性率達 58.6%（99/169），與早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但與腫瘤遠處轉(zhuǎn)移和5年生存率無明顯關(guān)系［10］.在乳腺癌中，CRMP2無論在mRNA還是蛋白水平均明顯下調(diào).而且，磷酸化CRMP2核內(nèi)表達水平與組織惡性度和三陰乳腺癌成比例［11］.CRMP3則定位于10號染色體 q25.2-q26［12］，多種腫瘤抑癌基因也定位于附近區(qū)域［13-14］.此外，80%的成膠質(zhì)細胞瘤在該染色體區(qū)域存在突變.CRMP3與惡性腫瘤的副癌神經(jīng)綜合征相關(guān)［12］.CRMP4在轉(zhuǎn)移性前列腺癌組織中差異性表達下調(diào)，提示CRMP4是前列腺癌轉(zhuǎn)移的抑制基因.通過對CRMP4啟動子區(qū)域的結(jié)構(gòu)進行分析發(fā)現(xiàn)，CRMP4啟動子甲基化是導(dǎo)致基因表達沉默，引起前列腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要機制［15-16］.與此相反，Hiroshima等［17］對胰腺癌研究報道，CRMP4在胰腺癌中高表達并與靜脈侵犯和肝轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，CRMP4是胰腺癌術(shù)后生存的獨立預(yù)測因子，是胰腺癌促癌基因.CRMP5被認為與副癌綜合征密切相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)98.6%的高級別神經(jīng)內(nèi)分泌肺癌（小細胞肺癌和大細胞神經(jīng)內(nèi)分泌肺癌）標本中CRMP5廣泛高表達［18］.成神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤CRMP5高表達患者術(shù)后生存時間還不及CRMP5低表達患者的一半［19］.本研究首次發(fā)現(xiàn)CRMP2表達水平在膀胱尿路上皮癌組織中明顯比正常組織高表達.通過將CRMP2表達水平與臨床病理特征進行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，CRMP2高表達與膀胱尿路上皮癌分級、分期、進展呈正性相關(guān)，有統(tǒng)計學(xué)差別，提示CRMP2在膀胱尿路上皮癌發(fā)生、進展中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用.

CRMP2在膀胱尿路上皮癌組織中高表達，其具體機制尚需進一步探討.有報道，CRMP2結(jié)合Tubulin異源聚合物能夠促進微管組裝，促進神經(jīng)元生長，而CRMP2缺失能夠促進非神經(jīng)細胞死亡，提示CRMP2調(diào)控神經(jīng)元以及非神經(jīng)細胞的增殖［21-23］.Lin等［24］報道 CRMP2屬于微管相關(guān)蛋白質(zhì)，其碳端490-572aa介導(dǎo)微管結(jié)合，促進細胞有絲分裂，且這一過程能夠被紫杉醇所抑制，提示膀胱尿路上皮癌中CRMP2過表達可能促進膀胱尿路上皮癌細胞加速細胞分裂和增殖，靶向抑制CRMP2有可能抑制腫瘤細胞的分裂增殖.CRMP2還是P53的負性調(diào)節(jié)因子，抑制抑癌基因P53表達，提示 CRMP2發(fā)揮促癌作用［25］.Martins等［26］通過質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)，CRMP2與Rho信號通路的多個蛋白直接結(jié)合，而Rho信號通路參與細胞骨架動力學(xué)，細胞運動和細胞增殖等細胞重要活動，提示CRMP2參與調(diào)控細胞骨架、細胞運動以及細胞增殖，促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和增殖.CRMP2還與細胞分裂相關(guān)蛋白直接作用，再次提供證據(jù)提示CRMP2促進細胞增殖的可能.此外，CRMP2還與細胞能量代謝蛋白如SPR、PDHX直接結(jié)合，能量代謝增強是腫瘤惡性增殖的重要環(huán)節(jié)，因此，CRMP2可能通過促進能量代謝，進而促進膀胱尿路上皮癌的惡性生物學(xué)行為［26］.綜上所述，CRMP2在膀胱尿路上皮癌中高表達促進膀胱尿路上皮癌惡性生物行為的可能機制有：①作為微管相關(guān)蛋白促進微管組裝，進而促進細胞增殖；②參與調(diào)控P53、Rho等腫瘤相關(guān)信號通路，調(diào)控腫瘤細胞的骨架動力學(xué)，細胞運動和細胞增殖，進而促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力；③增強腫瘤細胞能量代謝，促進腫瘤細胞增殖.

雖然本研究未能明確CRMP2促進膀胱尿路上皮癌發(fā)生發(fā)展的具體機制，但闡明了CRMP2在膀胱尿路上皮癌中的表達情況，提示CRMP2作為判定膀胱尿路上皮癌預(yù)后及個性化治療的靶點的潛在價值.

［1］GOSHIMA Y，NAKAMURA F，STRITTMATTER P，et al.Collapsin-induced growth cone collapse mediated by an intracellular protein related to UNC-33［J］.Nature，1995，376（6540）：509-514.

［2］GAETANO C，MATSUO T，THIELE C J.Identification and characterization of a retinoic acid-regulated human homologue of the unc-33-like phosphoprotein gene（hUlip）from neuroblastoma cells［J］.The Journal of biological chemistry，1997，272（18）：12195-12201.

［3］MINTURN JE，F(xiàn)RYER H J，GESCHWIND D H，et al.TOAD-64，a gene expressed early in neuronal differentiation in the rat，is related to unc-33，a C.elegans gene involved in axon outgrowth［J］.The Journal of neuroscience：the official journal of the Society for Neuroscience，1995，15（10）：6757-6766.

［4］BYK T，DOBRANSK T，CIFUENTES-DIAZ C，et al.Identification and molecular characterization of Unc-33-like phosphoprotein （Ulip），a putative mammalian homolog of the axonal guidance-associated unc-33 gene product［J］.The Journal of neuroscience：the official journal of the Society for Neuroscience，1996，16（2）：688-701.

［5］SHIH J Y，YANG S C，HONG T M，et al.Collapsin response mediator protein-1 and the invasion and metastasis of cancer cells［J］.Journal of the National Cancer Institute，2001，93（18）：1392-1400.

［6］CHEN JJ，PECK K，HONG TM，et al.Global analysis of gene expression in invasion by a lung cancer model［J］.Cancer Res，2001，61（13）：5223-5230.

［7］SHIH J Y，LEE Y C，YANG S C，et al.Collapsin response mediator protein-1：a novel invasion-suppressor gene［J］.Clinical＆experimental metastasis，2003，20（1）：69-76.

［8］PAN SH，CHAO Y C，CHEN H Y，et al.Long form collapsin response mediator protein-1 （LCRMP-1）expression is associated with clinical outcome and lymph node metastasis in non-small cell lung cancer patients［J］.Lung cancer，2010，67（1）：93-100.

［9］PAN SH，CHAO Y C，HUNG PF，et al.The ability of LCRMP-1 to promote cancer invasion by enhancing filopodia formation is antagonized by CRMP-1［J］.The Journal of clinical investigation，2011，121（8）：3189-3205.

［10］WU CC，CHEN H C，CHEN SJ，et al.Identification of collapsin response mediator protein-2 as a potential marker of colorectal carcinoma by comparative analysis of cancer cell secretomes［J］.Proteomics，2008，8（2）：316-332.

［11］SHIMADA K，ISHIKAWA T，NAKAMURA F，et al.Collapsin response mediator protein 2 is involved in regulating breast cancer progression［J］.Breast cancer，2014，21（6）：715-723.

［12］HONNORAT J，BYK T，KUSTERS I，et al.Ulip/CRMP proteins are recognized by autoantibodies in paraneoplastic neurological syndromes［J］.The European journal of neuroscience，1999，11（12）：4226-4232.

［13］TRYBUS T M，BURGRESS A C，WOJON K J，et al.Distinct areas of allelic loss on chromosomal regions 10p and 10q in human prostate cancer［J］.Cancer Res，1996，56（10）：2263-2267.

［14］PEIFFER S L，HERZOG T J，TRIBUNE D J，et al.Allelic loss of sequences from the long arm of chromosome 10 and replication errors in endometrial cancers［J］.Cancer Res，1995，55（9）：1922-1926.

［15］GAO X，PANG J，LI LY，et al.Expression profiling identifies new function of collapsin response mediator protein 4 as a metastasis-suppressor in prostate cancer［J］.Oncogene，2010，29（32）：4555-4566.

［16］LI K，PANG J，CHENG H，et al.Manipulation of prostate cancer metastasis by locus-specific modification of the CRMP4 promoter region using chimeric TALEDNA methyltransferase and demethylase［J］. Oncotarget，2015，6（12）：10030-10044.

［17］HIROSHIMA Y，NAKAMURA F，MIYAMOTO H，et al.Collapsin response mediator protein 4 expression is associated with liver metastasis and poor survival in pancreatic cancer［J］.Ann Surg Oncol，2013，20（Suppl 3）：S369-378.

［18］MEYRONET D，MASSOMA P，THIVOLET F，et al.Extensive expression of collapsin response mediator protein 5（CRMP5）is a specific marker of high-grade lung neuroendocrine carcinoma［J］. The American journal of surgical pathology，2008，32（11）：1699-1708.

［19］LIANG Y， DIEHN M， WATSON N， et al. Gene expression profiling reveals molecularly and clinically distinct subtypes of glioblastoma multiforme［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2005，102（16）：5814-5819.

［20］YOSHIMURA T，KAWANO Y，ARIMURA N，et al.GSK-3beta regulates phosphorylation of CRMP-2 and neuronal polarity［J］.Cell，2005，120（1）：137-149.

［21］ARIMURA N，MENAGER C，KAWANO Y，et al.Phosphorylation by Rho kinase regulates CRMP-2 activity in growth cones［J］.Molecular and cellular biology，2005，25（22）：9973-9984.

［22］FUKATA Y，ITOH T J，KIMURA T，et al.CRMP-2 binds to tubulin heterodimers to promote microtubule assembly［J］.Nature cell biology，2002，4（8）：583-591.

［23］TAHIMIA C G，TOMIMATU N，NISHIGAKIR，et al.Evidence for a role of Collapsin response mediator protein-2 in signaling pathways that regulate the proliferation of non-neuronal cells［J］.Biochem Biophys Res Commun，2006，340（4）：1244-1250.

［24］LIN P C，CHAN P M，HALL C，et al.Collapsin responsemediator proteins（CRMPs）are a new class of microtubule-associated protein（MAP）that selectively interacts with as sembledmicrotubules via a taxol-sensitive binding interaction［J］. The Journal of biological chemistry，2011，286（48）：41466-41478.

［25］LLANOSS，EFEYAN A，MONSECH J，et al.A highthroughput loss-of-function screening identifies novel p53 regulators［J］.Cell cycle，2006，5（16）：1880-1885.

［26］MARTINS-DE-SOUZA D，CASSOLIJS，NASCIMENTO JM，et al.The protein interactome of collapsin response mediator protein-2 （CRMP2/DPYSL2） reveals novel partner proteins in brain tissue［J］.Proteomics Clinical applications，2015，9（9/10）：817-831.