蒲桃枝葉化學(xué)成分預(yù)試及其總酚、總黃酮含量測定

1.嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，廣東 梅州 514031；2.嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，廣東 梅州 514031

蒲桃(SyzygiumJambos)為桃金娘科(Myrtaceae)蒲桃屬常綠喬木，主產(chǎn)于我國廣東、廣西、海南、云南、臺灣等省區(qū)[1]，是嶺南地區(qū)民間習(xí)用藥材，已收載于《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》[2]。蒲桃藥用歷史悠久，其不同藥用部位均可供藥用，其中蒲桃葉可以清熱解毒，主治口舌生瘡、瘡瘍、痘瘡；蒲桃莖功效為溫中散寒、降逆止嘔、溫肺止咳，用于胃寒呃逆、肺虛寒咳[3]?，F(xiàn)代藥學(xué)研究表明，蒲桃及同屬其他植物具有顯著的降血糖、抗氧化、抗炎止痛、保肝及抑制白血病細(xì)胞等活性作用[4-7]。目前，以蒲桃為主的上市復(fù)方藥有“石岐外感茶”、和“前列寧膠囊”等，具有清熱解毒等功效，其中，復(fù)方“石岐外感茶”被評為廣東省嶺南文化遺產(chǎn)，在廣東非典時期廣受消費者歡迎。然而，目前國內(nèi)外對蒲桃屬植物的研究多集中于海南蒲桃、洋蒲桃、丁香等少數(shù)品種，對蒲桃枝葉的現(xiàn)代化學(xué)成分、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥理活性等方面的研究還處于起步階段[4]。實驗測定蒲桃枝葉的化學(xué)成分類型及其總酚和總黃酮的含量，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 藥材 蒲桃枝葉于2017年6月采自廣東省梅州市陰那山自然保護(hù)區(qū)，經(jīng)嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室林大都鑒定為桃金娘科(Myrtaceae)蒲桃屬常綠喬木蒲桃(Syzygiumjambos)的枝葉，標(biāo)本存放于嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院天然藥物標(biāo)本館(編號：201706112)。

1.2 試劑 福林酚試劑(1N)(批號：20160117，上海金穗生物科技有限公司)，沒食子酸對照品(批號：20170410，上海金穗生物科技有限公司)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(批號：20160111，上海金穗生物科技有限公司)。95%乙醇、甲醇、石油醚(60～90 ℃)、三氯甲烷、正丁醇、濃鹽酸、氨水、濃硫酸、鎂、冰乙酸、醋酐、硼酸、碘化鉍鉀、碘、磷鎢酸、碘化鉀、鐵氰化鉀、三氯化鋁、三氯化鐵、硅鎢酸、間二硝基苯、磷鉬酸、氫氧化鉀、溴酚藍(lán)、香草醛、鹽酸羥胺、酒石酸鉀鈉、乙酸鎂 氫氧化鉀、2,4-二硝基苯肼、亞甲基藍(lán)、4-氨基安替比林、亞硝酰、鐵氰化鈉、對二氨基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲酸、氯化鈉、氧化鋁、茚三酮、吡啶、苯甲酸、亞硝酸鈉、硫酸銅、硝酸鋁等均為分析純。

1.3 儀器 JP-100S型超聲波清洗器(深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司)；UV-1800型紫外-可見分光光度計(島津企業(yè)管理(中國)有限公司)；N-1100V型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)；BT125D型電子分析天平(德國Sartorius公司)；BS110s型電子分析天平(德國Sartorius公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 實驗方法

2.1.1 蒲桃枝葉化學(xué)成分預(yù)實驗

2.1.1.1 石油醚提取液的制備 稱取粗粉 5 g，置于50 mL燒杯中，加石油醚20 mL，振蕩搖勻，密閉并多次振搖，室溫放置1 d，過濾，得石油醚提取液，供揮發(fā)油、油脂、甾體和三萜類成分的檢測[8-9]。

2.1.1.2 乙醇提取液的制備 取蒲桃枝葉粗粉 10 g，加入95%乙醇100 mL，加熱回流提取1 h，過濾，濾液分為兩份：一份為乙醇供試液用作黃酮類、蒽酮類、有機(jī)酸、香豆素和強(qiáng)心苷、內(nèi)酯類等成分的檢測；一份經(jīng)減壓濃縮等醇浸膏，取0.5 g醇浸膏于10 mL試管中，加入3 mL 2% HCl 溶液，超聲溶解，過濾，得醇浸膏酸水液，用作生物堿的檢測[8-9]。

2.1.1.3 水供試液的制備 取蒲桃枝葉粗粉 10 g，置于200 mL的三角燒杯中，加入100 mL蒸餾水，室溫浸泡過夜，濾取10 mL濾液用作氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)的檢測。剩余的浸液及藥渣在70 ℃水浴上熱浸1 h，過濾，濾液用于糖、多糖及其苷類、有機(jī)酸、鞣質(zhì)類、酚類等成分的檢測[8-9]。

2.1.2 總黃酮含量的測定

2.1.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 參考文獻(xiàn)[10]方法以蘆丁濃度(X)為橫坐標(biāo)，吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1.2.2 樣品含量的測定 準(zhǔn)確稱取蒲桃枝葉藥材粗粉5.0 g，置于100 mL三角燒瓶中，加入95%乙醇50 mL，室溫超聲提取3次，合并濾液，濾渣洗滌3次，過濾，轉(zhuǎn)移至1000 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液2.0 mL于25 mL棕色容量瓶中，后續(xù)處理方法同2.1.2(1)項，測定供試品溶液的吸光度值(A)。

2.1.2.3 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 參考文獻(xiàn)方法[11]以沒食子酸吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，沒食子酸質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1.2.4 總酚含量測定 準(zhǔn)確稱取蒲桃枝葉藥材粗粉5.0 g，置于100 mL三角燒瓶中，加入95%乙醇50 mL，室溫超聲提取3次，合并濾液，濾渣洗滌3次，過濾，轉(zhuǎn)移至1000 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液0.1 mL于10 mL棕色容量瓶中，后續(xù)處理方法同2.1.3(1)項，測定供試品溶液的吸光度值(A)。平行測定3次。

2.2 實驗結(jié)果

2.2.1 化學(xué)成分預(yù)實驗 采用試管實驗法、紙色譜法對2.1.1項下所得的蒲桃枝葉石油醚提取液、乙醇提取液、水提取液分別進(jìn)行化學(xué)成分檢查，通過各種不同成分特有的顏色反應(yīng)和沉淀反應(yīng)，初步鑒定供試液可能含有的化學(xué)成分及其類型。實驗結(jié)果見表1～3。

表1 蒲桃枝葉石油醚提取液化學(xué)反應(yīng)結(jié)果

“+” 示陽性結(jié)果， “-” 示陰性結(jié)果

表2 蒲桃枝葉乙醇提取液化學(xué)反應(yīng)結(jié)果

“+” 示陽性結(jié)果， “-” 示陰性結(jié)果

表3 蒲桃枝葉水提取液化學(xué)反應(yīng)結(jié)果

“+” 示陽性結(jié)果， “-” 示陰性結(jié)果

2.2.1 蒲桃枝葉總黃酮和總酚含量 在本實驗條件下，蘆丁回歸方程為Y=0.0131X-0.0003，相關(guān)系數(shù)(R2=0.9976)，結(jié)果表明蘆丁含量在0.00 ～ 49.26 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。沒食子酸回歸方程為Y= 0.1056X+0.0257 (R2=0. 9974)，結(jié)果表明沒食子酸含量在0.00～10.01 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；根據(jù)回歸方程得到蒲桃枝葉中總酚含量為24.71%，總黃酮含量為20.77%。結(jié)果見表4。

表4 蒲桃枝葉中總酚和總黃酮含量測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

中藥及天然藥物是藥物的重要組成部分，其防病治病的物質(zhì)基礎(chǔ)是其中所含的大量骨架結(jié)構(gòu)多樣和生物活性廣泛的的有效成分。據(jù)報道，上市的新藥中有超過 1/3 直接或間接來源于天然產(chǎn)物，而在合成藥物中，也有相當(dāng)一部分是借鑒了天然產(chǎn)物的骨架結(jié)構(gòu)或藥效團(tuán)[12-13]。我國具有豐富的中藥及天然藥物資源，且有傳統(tǒng)的中醫(yī)藥理論體系，并具有長期的臨床應(yīng)用經(jīng)驗。因此，從藥用植物中尋找和開發(fā)創(chuàng)新藥物是一條適合我國的新藥研發(fā)途徑。

本研究對梅州山區(qū)野生蒲桃枝葉可能含有的化學(xué)成分進(jìn)行初步研究和分析，并測定了蒲桃枝葉乙醇提取物中總酚和總黃酮的含量。實驗結(jié)果表明，蒲桃枝葉中可能含有糖、多糖、苷類、黃酮、酚類、鞣質(zhì)、內(nèi)酯、香豆素、甾體、三萜、油脂等多種化學(xué)成分，其中總酚含量為24.71%，總黃酮含量為20.77%。初步確定了蒲桃枝葉中可能存在的化學(xué)成分，為其化學(xué)成分、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥理活性及藥物開發(fā)的研究提供科學(xué)依據(jù)。

[1]中國科學(xué)院中國植物志編委會. 中國植物志(第53卷)[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1984: 68-69.

[2]廣東省食品藥品監(jiān)督管理局. 廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(第一冊)[M]. 廣州: 廣東科技出版社, 2004: 200-201.

[3]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會. 中華本草(第五冊)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1999：656-657.

[4]林大都, 成金樂, 彭麗華, 等. 蒲桃的研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015, 43(10): 76-78.

[5]鄧家剛, 李學(xué)堅, 覃振林. 蒲桃仁提取物降血糖作用的實驗研究[J]. 廣西植物, 2006, 26(2): 214-216.

[6]Mohanty S, Cock I E. Bioactivity of Syzygium jambos methanolic extracts: Antibacterial activity and toxicity[J]. Pharmacognosy Research, 2010, 2(1): 4-9.

[7]Muniappan A, Pandurangan S B, Savarimuthu I. Syzygium cumini, a novel therapeutic agent for diabetes: Folk medicinal and pharmacological evidences[J]. Complementary Therapies in Medicine, 2013, 21:232-243.

[8]裴月湖. 天然藥物化學(xué)實驗指導(dǎo)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2016：140-158.

[9]甘典輝, 笪舫芳, 伍小燕, 等. 壯藥土生地化學(xué)成分預(yù)試研究[J]. 中國醫(yī)藥科學(xué), 2014, 4(5): 43-45.

[10]李利華. 芹菜不同部位總黃酮含量測定及其抗氧化活性[J]. 食品研究與開發(fā), 2013, 34(7): 12-15.

[11]關(guān)小麗, 楊子明, 顏小捷, 等. 8種殼斗科植物多酚含量及抗氧化能力[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2015, 21(2): 65-69.

[12]葉文才. 中藥及天然藥物活性成分: 新藥研發(fā)的重要源泉[J]. 藥學(xué)進(jìn)展, 2016, 40(10): 721-722.

[13]Newman D J, Cragg G M. Natural products as sources of new drugs over the 30 years from 1981 to 2010[J]. Journal of Natural Products, 2012, 75(3): 311-335.