藏藥列赤阿湯顆粒制劑工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

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(西藏自治區(qū)藏醫(yī)院開發(fā)應(yīng)用研究所，西藏 拉薩 850000)

藏藥列赤阿湯系傳統(tǒng)藏藥驗(yàn)方。本品始載于公元17世紀(jì)藏醫(yī)藥學(xué)家第司桑杰加措編著的《藏醫(yī)醫(yī)決補(bǔ)遺》中，屬于95版《藏藥部頒標(biāo)準(zhǔn)》中的成方制劑，由訶子(去核)、毛訶子、寬筋藤、獐牙菜、余甘子等5味藏藥材制成，用于“陳普”病，“叱乃”病，風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，痛風(fēng)引起的關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛，活動(dòng)受限等。原湯散服用時(shí)按照醫(yī)生醫(yī)囑由患者自行煎煮后服用，因此煎煮次數(shù)、加水量、煎煮時(shí)間以及服用量等難以保證，由此出現(xiàn)影響治療效果等問題。本次研究是在治療物質(zhì)基礎(chǔ)不變前提下，本著方便、安全、療效確切、質(zhì)量可控為目標(biāo)，把本品原湯散經(jīng)提取、濃縮、制粒、包裝并建立了質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)等。

1 材料

1.1 儀器 WFH-201BJ 紫外可見投射反射儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；BT224S 十萬分之一克電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；玻璃展開槽(200 mm×100mm)；TLC 常規(guī)預(yù)制板(200mm×100mm，青島海洋化工廠分廠)；DZF-6053真空干燥箱及DHG-9145A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司);HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠)；AS20500BDT超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；prima-s15實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)(上海和泰儀器有限公司)；U&M-Ⅱ多功能藥用試驗(yàn)機(jī)(上海優(yōu)譯柯機(jī)械科技有限公司)。

1.2 試藥 凈藥材訶子、毛訶子、余甘子、寬筋藤及獐芽菜從西藏自治區(qū)藏醫(yī)院制劑室購買并由本院生藥研究所格桑巴珠老師鑒定均為正品；試驗(yàn)用三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸、濃氨試液、冰乙酸等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制劑工藝研究

2.1.1 提取溶劑 列赤阿湯為水煎煮后服用，為保持原湯劑的溶劑，故本顆粒劑提取溶媒確定為水。

2.1.2 提取工藝正交試驗(yàn) 以煎煮次數(shù)(A)、煎煮時(shí)間(B)和加水量(C)為3個(gè)因素，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，采用L9(34)正交法進(jìn)行正交試驗(yàn)，以出膏率為指標(biāo)，優(yōu)選提取最佳工藝條件。

表1 因素水平設(shè)計(jì)

2.1.3 試驗(yàn)方法及結(jié)果 稱取處方藥材的十分之一，按表1安排實(shí)驗(yàn)，將各次提取濾液合并后，加熱濃縮至相對密度1.20g/mL～1.23g/mL(55～60℃)，移入100mL的容量瓶中并定容，防止室溫后定容，測定前充分搖勻，分別測定出膏率，進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表2 、3、4。

從表2、表3、表4得出結(jié)論如下：A(次數(shù))、B(時(shí)間)、C(加水倍)三因素中，對本次試驗(yàn)的影響大小為A﹥C﹥B，最佳工藝為：A3B2C3，即煎煮次數(shù)是關(guān)鍵因素，加水量是次關(guān)鍵因素，煎煮時(shí)間的影響較小。結(jié)果：最佳方案為藥材加10倍量水浸泡1夜，水煎煮提取3次，每次1h。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果表

表4 方差分析結(jié)果表

2.1.4 顆粒成型工藝試驗(yàn)方法及結(jié)果

2.1.4.1 輔料選擇 采用(按照最佳提取工藝提取流浸膏)與輔料(糊精)按不同比例制備軟材，以軟材干濕、制粒難易度及色澤均勻?yàn)橹笜?biāo)進(jìn)行輔料配比試驗(yàn)，方法與結(jié)果見表5和6。

結(jié)果：從表6可以看出，第三個(gè)輔料處方比例所制得的軟材適合制粒，因此我們優(yōu)選了R2作為列赤阿湯的制備處方比例。

表5 制劑輔料處方比例篩選方法

表6 制劑輔料處方比例篩選結(jié)果

2.1.4.2 顆粒干燥試驗(yàn)方法及結(jié)果 在恒溫干燥箱中進(jìn)行干燥并設(shè)定溫度為60℃，用快速測定水分儀進(jìn)行測定濕顆粒水分，測定結(jié)果如下表7。2015年版《藥典》顆粒水分小于8%。故確定在60℃下烘干2.5h。

2.1.4.3 顆粒吸濕性試驗(yàn)方法及結(jié)果 取已恒重的稱量瓶5個(gè)，在底部分別放入列赤阿湯顆粒，厚度約為2mm，準(zhǔn)確稱重后在室溫下敞開放置24、48、72、96、120h后稱重，結(jié)果顯示：在室溫下敞開放置時(shí)間越久，顆粒吸濕性越高，同時(shí)顆粒有濕潤的現(xiàn)象，表明本品有吸濕性，需隔絕空氣，故用鋁塑復(fù)合膜包裝。

2.1.4.4 顆粒流動(dòng)性試驗(yàn)方法及結(jié)果 粉粒流動(dòng)性測定：為保證工業(yè)化生產(chǎn)分劑量的準(zhǔn)確性，要求顆粒具有良好的流動(dòng)性。取干燥顆粒100g5份，采用固定圓錐底法，測定各目數(shù)顆粒的休止角。結(jié)果休止角分別為35.5°、36.0°、36.5°、36.5°、37.0°，說明物料具有較好的流動(dòng)性，可以滿足大生產(chǎn)要求。

2.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

2.2.1 本品中獐芽菜鑒別方法及結(jié)果 供試品制備方法：取3批本品內(nèi)容物2g，加甲醇30mL，超聲提取30min(超聲溫度為60℃)，提取溫度的高低影響鑒別斑點(diǎn)的亮度，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取獐牙菜陰性樣品(缺獐牙菜)1.17g、獐牙菜對照藥材細(xì)粉0.21g，加甲醇30mL同法制成陰性樣品、對藥材溶液。

鑒別方法：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10:1:0.4:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。

結(jié)果：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但陰性樣品在相同的色譜位置上沒有顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖1。

2.2.2 本品中寬筋藤鑒別方法及結(jié)果 供試品制備方法：寬筋藤主要含有生物堿，按照生物堿提取方法進(jìn)行制樣。取3批本品內(nèi)容物2g，加入適量10%濃氨水，浸潤10min，再加入甲醇30mL，超聲提取60min(超聲溫度60℃)，提取溫度高低影響生物堿的提取量，尤其是對照藥材影響比較明顯，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取陰性樣品(缺寬筋藤)1g、寬筋藤對照藥材細(xì)粉0.33g，加甲醇30mL同法制成陰性樣品、對藥材溶液。

鑒別方法：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(6：2：1.5)為展開劑，適量濃氨水裝入小燒杯中，并放置展開槽另一側(cè)，氨蒸氣飽和15分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(300nm及365nm)下檢視。

結(jié)果：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。但陰性樣品在相同的色譜位置上沒有顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖2。

3 討論

3.1 通過正交法優(yōu)化提取工藝并摸索出生產(chǎn)工藝環(huán)節(jié)的關(guān)鍵參數(shù)，使得本品在工藝無質(zhì)的改變情況下研制成顆粒劑，建立了可控的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。顆粒劑與原湯散相比具有患者免煎、服用劑量準(zhǔn)確、質(zhì)量可控等優(yōu)勢。當(dāng)然，劑型上的優(yōu)勢并不足以說明臨床療效的優(yōu)勢，因此今后顆粒劑與原湯散兩者在臨床使用時(shí)，有關(guān)臨床療效的數(shù)據(jù)需要收集并加以分析，由此實(shí)現(xiàn)藏藥湯劑創(chuàng)新研究工作拓展于臨床療效研究方面，同時(shí)為制劑創(chuàng)新研究工作的可行性提供有利的佐證。

3.2 原湯散劑沒有建立相應(yīng)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，通過此次研究建立了寬筋藤和獐芽菜薄層色譜鑒別和顆粒相應(yīng)檢查向下的檢查標(biāo)準(zhǔn)，為產(chǎn)品質(zhì)量控制提供了可靠、可行標(biāo)準(zhǔn)。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(四部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.通則.

[2]衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·藏藥第一冊[S].西藏：西藏人民出版社， 1995.275.

[3]西藏、青海、四川、甘肅、云南、新疆六省衛(wèi)生局.藏藥標(biāo)準(zhǔn)[S].西寧：青海人民出版社，1979.212.

[4]占堆，等.藏藥成方制劑現(xiàn)代研究與臨床用藥 [M].成都：四川出版集團(tuán)·四川科學(xué)技術(shù)出版社，2009.537-542.