高效液相色譜/二極管陣列法快速測(cè)定炒瓜子中糖精鈉與安賽蜜

◎ 顏 慧，楊 嘉，王 帥，于 浩

（揚(yáng)州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，江蘇 揚(yáng)州 225000）

瓜子是日常生活中常見(jiàn)的休閑炒貨食品[1]。糖精鈉和安賽蜜因其甜度高的特點(diǎn)被廣泛地添加到食品中，從而增加食品的甜味，提高口感度，但過(guò)量添加食用有害人體健康[2]，因而我國(guó)規(guī)定了糖精鈉、安賽蜜的使用限量和檢測(cè)方法[3]。目前檢測(cè)甜味劑的方法有非水滴定法[4]、熒光檢測(cè)法[5]、分光光度計(jì)法[6]、液相色譜法[7]、離子色譜法[8]、色譜-質(zhì)譜儀聯(lián)用法[9]超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[10]等。在食品的檢測(cè)工作中，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的糖精鈉的檢測(cè)方法為GB 5009.28-2016[11]，安賽蜜的檢測(cè)方法為GB/T 5009.140-2003[12]，暫時(shí)還沒(méi)有針對(duì)瓜子樣品的分離方法，致使在檢測(cè)炒瓜子中的糖精鈉時(shí)，易形成重疊峰[13]，影響分離和定量。本法完善部分色譜條件，對(duì)炒瓜子中糖精鈉、安賽蜜進(jìn)行液相色譜分離測(cè)定，8 min分離一個(gè)樣，可得到滿(mǎn)意的結(jié)果。

1　材料與方法

1.1　試劑與儀器

甲醇（色譜純）；乙酸鋅、亞鐵氰化鉀均為分析純；糖精鈉（GBW15001）、安賽蜜（GBW1001711601）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；實(shí)驗(yàn)室用水均為一級(jí)去離子水；乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱(chēng)取乙酸銨1.54 g，加水定容至1 000 mL，0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾。

Agilent1260型高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent C18柱4.6 mm×150 mm；超聲振蕩器；真空泵（附抽濾裝置）；電子分析天平：感量0.000 1 g；0.22 μm水相微孔濾膜；高速離心機(jī)。

1.2　色譜條件

Agilent C18柱4.6 mm×150 mm；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量10 μL；甲醇-乙酸銨流動(dòng)相比例為16∶84（V/V），流速0.60 mL/min。

1.3　樣品前處理

瓜子連殼打碎、混勻，稱(chēng)取約2.5 g樣品（精確到0.000 1 g）于50 mL比色管中，加水30 mL，斡旋震蕩2 min，超聲萃取20 min，分別加入乙酸鋅溶液（220 g/L）和亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）2.5 mL，加水定容至刻度，靜置沉淀30 min，取上清液10 000 r/min離心5 min，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，濾液待液相色譜上機(jī)測(cè)定。

1.4　測(cè)定

1.4.1糖精鈉和安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

依次吸取糖精鈉溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW15001（1.00 mg/mL）、安賽蜜溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW1001711601（1.00 mg/mL）各 0.05、0.10、0.25、0.50、1.00 mL 和1.50 mL于10 mL容量瓶中，定容至刻度，再?gòu)呐渲瞥?.01 mg/mL的容量瓶中吸取100 μL、500 μL溶液定容至10 mL，配制成糖精鈉、安賽蜜混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列濃度為 0.000 1、0.000 5、0.005、0.010、0.025、0.050、0.100 mg/mL和0.150 mg/mL。

1.4.2樣品測(cè)定

取樣品處理液自動(dòng)進(jìn)樣10 μL，以保留時(shí)間定性，根據(jù)外標(biāo)法峰面積定量。

計(jì)算公式：

公式中，X為樣品測(cè)得的含量，單位g/kg；C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出樣液中待測(cè)物濃度，單位mg/mL；V為樣品定容體積，單位mL；M為樣品質(zhì)量，單位g；0.7563為兩結(jié)晶水糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與無(wú)結(jié)晶水糖精的換算系數(shù)。

2　結(jié)果與分析

2.1　液相色譜圖

所得糖精鈉、安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)色譜圖及試樣圖如圖1、圖2所示。

圖1　糖精鈉、安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖（0.000 1 mg/mL）

圖2　含糖精鈉、安賽蜜的瓜子試樣的液相色譜圖

2.2　標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性關(guān)系

糖精鈉、安賽蜜混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列濃度為0.000 1、0.000 5、0.005、0.010、0.025、0.050、0.100 mg/mL 和0.150 mg/mL，進(jìn)樣10μL進(jìn)行高效液相色譜分析，用峰面積與濃度進(jìn)行線(xiàn)性回歸，糖精鈉回歸方程分別為Y=41053.4382Amt+0，R=0.99997；安賽蜜回歸方程為Y=54678.1382Amt+0，R=0.99995，方程線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.3　最低檢出限

取相對(duì)濃度較低的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行20次檢測(cè)，用峰面積計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差，以3倍標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算出最低檢出限為0.002 g/kg。

2.4　樣品精密度實(shí)驗(yàn)

連續(xù)用此方法平行測(cè)定樣品，進(jìn)行6次測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.11%～5.33%。

表1　精密度測(cè)定結(jié)果表

2.5　樣品加標(biāo)回收率測(cè)定

稱(chēng)取2.5 g均勻樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍內(nèi)加入低、中、高3個(gè)濃度的2種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按照1.3進(jìn)行樣品前理。對(duì)樣品連續(xù)分析2次，2種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。糖精鈉低濃度添加水平回收率為96.9%，中濃度添加水平回收率為98.7%，高濃度添加水平回收率為99.4%，安賽蜜低濃度添加水平回收率為101.7%，中濃度添加水平回收率為98.3%，高濃度添加水平回收率為97.8%，結(jié)果表明該方法回收率在95%～110%，符合實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確度要求。

表2　樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.6　市場(chǎng)抽樣檢測(cè)結(jié)果

采用本方法，從市場(chǎng)上抽取30份炒瓜子樣品，對(duì)樣品中的糖精鈉和安賽蜜進(jìn)行了檢測(cè)，每次樣品平行測(cè)定2次，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，其測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　實(shí)際樣品的測(cè)定結(jié)果表（n=2，g/kg）

3　結(jié)語(yǔ)

在優(yōu)化后的色譜條件下，本方法對(duì)炒瓜子中糖精鈉、安賽蜜進(jìn)行色譜分析，能夠快速測(cè)定瓜子中糖精鈉與安賽蜜的含量，很好解決了國(guó)標(biāo)方法中測(cè)定炒瓜子中糖精鈉峰拖尾和分離不全的問(wèn)題，并且該方法樣品處理簡(jiǎn)單，重復(fù)性和選擇性好，適用于快速測(cè)定炒瓜子中的糖精鈉與安賽蜜，可滿(mǎn)足日常快速檢測(cè)需求。