Slit2基因過表達(dá)小鼠的生物學(xué)參數(shù)及心臟生理功能分析

李想，鄭凌云，鄭雙，譚偉江，王靜，黎冰林，羅挺，李舸，王麗京,楊豐華*，黃韌*

(1. 廣東藥科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院血管生物學(xué)研究所，廣州　510006； 2. 廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測所，廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州　510633)

Slit蛋白有Slit1、Slit2和Slit3[1]3種亞型，由中線膠質(zhì)細(xì)胞分泌[2]，通過結(jié)合Robo受體來引導(dǎo)軸突增長的方向[3-4]，是生長發(fā)育中關(guān)鍵的導(dǎo)向因子之一。近年研究表明Slit蛋白和其受體不僅調(diào)控神經(jīng)發(fā)育，而且與心臟血管生成[5-6]、免疫炎癥[7-8]、腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移[9-10]等密切相關(guān)。Slit蛋白不同亞型的特異性表達(dá)具有對(duì)應(yīng)的功能[11-12]，我們前期研究集中在Slit2亞型。通過采用人Slit2蛋白過表達(dá)小鼠(Slit2-Tg小鼠)，我們和國內(nèi)外同行揭示了Slit2蛋白在調(diào)控多種病理進(jìn)程的新功能，包括多類腫瘤的發(fā)生發(fā)展[11-12]、生殖器官的異位[13-14]、老年癡呆癥[15]、肝組織變性[16-17]等。另外，有研究報(bào)道Slit2及其受體Robo蛋白均表達(dá)于小鼠[6]、斑馬魚和果蠅的心臟，且在斑馬魚和果蠅的心臟發(fā)育過程中起到重要作用[5,18]。同時(shí)也有研究表明在血流不通暢情況下Slit2蛋白過表達(dá)可減小血栓的體積、抑制血栓形成[6,19-20]，提示了Slit2亦可能調(diào)控循環(huán)系統(tǒng)的功能。雖然Slit2-Tg小鼠被研究者們廣泛應(yīng)用于各類生理病理過程的研究，但尚缺乏較系統(tǒng)的生物學(xué)特性尤其是心臟生理功能的數(shù)據(jù)，為此本研究設(shè)計(jì)了繁殖率檢測、臟器系數(shù)測量、基因和蛋白表達(dá)水平測定、組織病理學(xué)評(píng)價(jià)、血常規(guī)及血生化分析、心臟超聲及心臟轉(zhuǎn)錄組測序等實(shí)驗(yàn)，收集Slit2-Tg小鼠的生物學(xué)特性數(shù)據(jù)并著重進(jìn)行了心臟組織學(xué)、生理學(xué)和心臟差異基因表達(dá)分析，以期闡明此遺傳工程小鼠在心血管疾病防治研究中的應(yīng)用價(jià)值。

1　材料與方法

1.1　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Slit2-Tg小鼠(背景為C57BL/6 J小鼠)來自于密歇根大學(xué)Dr. Jianguo Geng實(shí)驗(yàn)室[10]，并由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測所保種、繁育。8周齡的實(shí)驗(yàn)對(duì)照小鼠SPF級(jí)C57BL/6 J小鼠，體重20～25 g，購于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心【SCXK(粵)2013-0002】。所有小鼠均飼養(yǎng)于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測所SPF環(huán)境中【SYXK(粵)2012-0122】，近交系繁育，溫度維持在22～25℃，濕度維持在50%～70%，晝夜明暗交替時(shí)間為12 h / 12 h，并于8周齡時(shí)用于實(shí)驗(yàn)。所有操作均符合廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測所的動(dòng)物保護(hù)和使用委員會(huì)(IACUC)的要求。

1.2　方法

1.2.1基因型鑒定、繁育情況及臟器系數(shù)

剪取約3 mm小鼠尾尖組織，用DNA提取試劑盒(北京天根)提取DNA，并運(yùn)用PCR反應(yīng)試劑(美國Thermo Fisher Scientific)和PCR擴(kuò)增儀(美國Bio-Rad)擴(kuò)增目的片段。在1.2%瓊脂糖凝膠電泳后用凝膠成像系統(tǒng)(美國Bio-Rad)觀察電泳結(jié)果。記錄近交系繁育5～9代每籠仔鼠總數(shù)和雌雄數(shù)量。取Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠各12只(雌雄比1∶1)稱重后脫頸椎法處理，取心臟、肝、脾、肺、腎稱重并計(jì)算各臟器的臟器系數(shù)。臟器系數(shù)=臟器重量(mg)/ 體重(g)。

1.2.2Slit2蛋白在各臟器中的表達(dá)及組織學(xué)觀察

Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠各4只(雌雄比1∶1)脫頸椎法處理，取心臟、肝、脾、肺、腎。其中臟器的一部分提取DNA用于檢測人Slit2基因的存在情況，一部分提取總蛋白用于檢測Slit2蛋白的表達(dá)情況，其余組織用4%多聚甲醛溶液過夜固定，進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色后在顯微鏡下觀察臟器的組織結(jié)構(gòu)。

1.2.3血常規(guī)檢測

Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠各14只(雌雄比1∶1)，乙醚麻醉后眼框靜脈叢采血。血常規(guī)檢測使用全自動(dòng)五分類血液分析儀(日本XT-2000i，Sysmex)，檢測指標(biāo)包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、中性粒細(xì)胞百分比(NEUT%)、淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH%)、單核細(xì)胞百分比(MONO%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EO%)。

1.2.4血生化檢測

Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠各16只(雌雄比1∶1)，乙醚麻醉后采血，血樣經(jīng)3500 r/min、離心10 min后留取上清液，采用全自動(dòng)生化分析儀7020(日本Hitachi)檢測，檢測指標(biāo)分三大類：(1)代謝產(chǎn)物：葡萄糖(GLU)、肌酸酐(CREA)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、尿素氮(BUN)；(2)脂類：甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)，并計(jì)算動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)=(TC - HDL) / HDL[22]；(3)酶類：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酯酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)。

1.2.5高分辨率小動(dòng)物超聲檢測

取Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠各15只(其中雄性8只，雌性7只)，用Vevo2100高分辨率小動(dòng)物超聲系統(tǒng)和MS-550D探頭(加拿大Visual Sonics)以左室長軸切面探測，采集B型和M型超聲圖像，隨后應(yīng)用Vevo2100配套圖像分析軟件分析M型超生圖像，獲得心臟形態(tài)學(xué)指標(biāo)(左心室的前后壁厚度、左心室內(nèi)徑)和生理功能指標(biāo)(左心室容量、左心室心輸出量、左心室射血分?jǐn)?shù)、左心室短軸縮短率和心率)。

1.2.6心臟轉(zhuǎn)錄組測序分析

Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠各3只(雄性2只，雌性1只)，采集心臟樣品后各自混合成一個(gè)樣品，使用TRIzol? Reagent試劑盒(美國Thermo Fisher Scientific)提取RNA后應(yīng)用 Qubit? RNA Assay Kit(美國Life Technologies)測定RNA的濃度。對(duì)C57BL/6 J和Slit2-Tg小鼠心臟的RNA進(jìn)行HiSeq測序，隨后對(duì)測序結(jié)果進(jìn)行差異基因表達(dá)水平和富集分析，用以評(píng)估Slit2基因過表達(dá)對(duì)心臟的生物進(jìn)程和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。轉(zhuǎn)錄組測序的技術(shù)服務(wù)由北京諾禾致源生物信息科技有限公司提供。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean±SEM表示，采用GraphPad Prism 5.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P< 0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2　結(jié)果

2.1　Slit2-Tg小鼠基因型鑒定、繁育情況及臟器系數(shù)

Slit2-Tg小鼠DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物片段經(jīng)電泳后，在600 bp處有條帶，而C57BL/6 J經(jīng)擴(kuò)增后電泳無條帶。1～4號(hào)均在600 bp左右可見明亮擴(kuò)增條帶，則為Slit2-Tg小鼠；5～7號(hào)在600 bp處無條帶，則為C57BL/6 J小鼠(圖1)。

圖1Slit2-Tg小鼠的PCR鑒定圖
Fig.1Identification of the Slit2-Tg mice by a PCR assay

經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，Slit2-Tg小鼠的每窩產(chǎn)仔數(shù)量顯著多于C57BL/6 J小鼠(P< 0.05)，每窩仔鼠的雌雄比例差異無顯著性(表1)。心臟、肝、脾、肺、腎組織的臟器系數(shù)表明，Slit2-Tg小鼠脾的臟器系數(shù)比C57BL/6 J顯著增大，其他臟器系數(shù)未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表2)。

2.2　Slit2基因在各臟器中的表達(dá)情況和病理學(xué)觀察對(duì)比

PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示，Slit2-Tg小鼠的心臟、肝、脾、肺及腎中均存在人Slit2基因片段(圖2 A)，并發(fā)現(xiàn)Slit2蛋白在各臟器中的表達(dá)均高于C57BL/6 J小鼠(圖2B)。

表1　交配方式及產(chǎn)仔情況Tab.1　Mating method and litter

注：*P< 0.05，表明Slit2-Tg小鼠與C57BL/6 J小鼠的每窩產(chǎn)仔數(shù)差異有顯著性。

Note.*P< 0.05, significant differences in numbers per litter were seen between the Slit2-Tg mice and C57BL/6 J mice.

表2　Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠臟器組織的臟器系數(shù)Tab.2　Organ coefficients of the Slit2-Tg and C57BL/6 J =12)

注：***P< 0.001，表明Slit2-Tg小鼠與C57BL/6 J小鼠脾的臟器系數(shù)差異有顯著性。

Note.***P< 0.001, significant differences in the organ coefficients of spleen was seen between the Slit2-Tg and C57BL/6 J mice.

注：A，Slit2基因在各臟器中的檢測情況；B，Slit2蛋白在各臟器中的表達(dá)情況。*P< 0.05, **P< 0.01 vs. C57BL/6 J. n=4。圖2　Slit2在Slit2-Tg小鼠各臟器中的表達(dá)Note. A: Detection of Slit2 gene in various tissues. B: Expression of Slit2 protein in various tissues. *P< 0.05, **P< 0.01, vs. C57BL/6 J mice. n=4.Fig.2　Expression of Slit2 in different organs of the Slit2-Tg mice

通過HE染色后各臟器的觀察結(jié)果如圖3所示，Slit2-Tg與C57BL/6 J兩組小鼠的臟器組織結(jié)構(gòu)完整、細(xì)胞清晰可見。心臟組織低倍鏡下均觀察到心內(nèi)膜、心肌膜和心外膜結(jié)構(gòu)完整，高倍鏡下心肌膜有各種切面的心肌細(xì)胞，間隙富有小血管及微量的結(jié)締組織；腎組織低倍下皆可見散落的圓形腎小球及紅染的腎小管，高倍下近曲和遠(yuǎn)曲小管排列整齊、結(jié)構(gòu)清晰，腎小球囊壁完整，囊內(nèi)血管球含有大量的毛細(xì)血管；脾組織低清晰可見紅染的紅髓和紫藍(lán)色的白髓，高倍下可見白髓內(nèi)中央動(dòng)脈及動(dòng)脈周圍彌散的淋巴組織；肝組織低倍下均觀察到中央靜脈、肝血竇和門管區(qū)，高倍下肝細(xì)胞在中央靜脈周圍呈放射狀排列；肺組織均有大量肺泡和散布的小支氣管，高倍下肺泡隔中有少量結(jié)締組織和大量的毛細(xì)血管。與C57BL/6 J小鼠的各臟器相比，Slit2-Tg小鼠的心臟、肝、脾、肺及腎組織未見明顯的形態(tài)結(jié)構(gòu)異常。

注: Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠在8周時(shí)，通過光學(xué)顯微鏡對(duì)小鼠主要臟器進(jìn)行病理學(xué)觀察。圖3　Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠臟器組織的HE染色Note: Slit2-Tg and C57BL / 6 J mice were pathologically observed by light microscopy on the major organs of mice at 8 weeks.Fig.3　Histology of the organ tissues of slit2-Tg and C57BL/6 J mice at 8 weeks (HE staining)

2.3　Slit2-Tg小鼠的血常規(guī)

與同齡的C57BL/6 J小鼠相比，Slit2-Tg小鼠的RBC明顯增加(P< 0.05)，PLT顯著減少(P< 0.01), WBC未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在白細(xì)胞分類中，Slit2-Tg小鼠與C57BL/6 J小鼠相比，EO%顯著減小(P< 0.001)， NEUT%、LYMPH%及MONO%差異均無顯著性(圖4)。

2.4　Slit2-Tg小鼠的血生化

與C57BL/6 J小鼠相比，Slit2-Tg小鼠血清中代謝產(chǎn)物GLU和BUN的含量顯著降低(P< 0.01)，而GLOB的含量顯著升高(P< 0.05)，血清中脂類TG及HDL-C的含量顯著升高(P< 0.05)，而計(jì)算得到的AI顯著降低，其他指標(biāo)差異無顯著性(表3)。

2.5　Slit2-Tg小鼠的心臟形態(tài)和功能

超聲結(jié)果顯示，Slit2-Tg小鼠的舒張末期左心室前壁厚度(LVAWd)小于C57BL/6 J小鼠(圖5，表4)，其他形態(tài)學(xué)指標(biāo)(左心室的前后壁厚度、左心室內(nèi)徑)和生理功能指標(biāo)(左心室容量、左心室心輸出量、左心室射血分?jǐn)?shù)、左心室短軸縮短率和心率)差異均無顯著性(表4)。

注：A，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)；B，白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)；C，血小板計(jì)數(shù)(PLT)；D，中性粒細(xì)胞百分比(NEUT%)；E，淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH%)；F，單核細(xì)胞百分比(MONO%)；G，嗜酸性細(xì)胞百分比(EO%)。*P< 0.05, **P< 0.01,***P< 0.001 vs. C57BL/6 J. n=14。圖4　Slit2-Tg小鼠與C57BL/6 J小鼠的血常規(guī)比較Note. A: Red blood cell count. B: White blood cell count. C: Blood platelet count. D: Neutrophil percentage. E: Lymphocyte percentage. F: Monocyte percentage. G, Eosinophil percentage. *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001, vs. the C57BL/6 J mice. n=14.Fig.4　Comparison of the routine hematologic analysis of the Slit2-Tg and C57BL/6 J mice

血生化指標(biāo)Serum biochemical indexesC57BL/6 J miceSlit2-Tg mice葡萄糖Glucose (mmol/L)7.95±0.216.87±0.30**肌酸酐Creatinine (μmol/L)22.29±1.1321.56±1.25總蛋白Total protein (g/L)59.74±0.8260.59±0.78白蛋白Albumin (g/L)38.98±0.5738.23±0.46球蛋白Globulin (g/L)20.27±0.3522.11±0.37**尿素氮BUN (mmol/L)10.88±0.398.68±0.20***甘油三酯Triglyceride (mmol/L)1.83±0.082.17±0.08**總膽固醇Total cholesterol (mmol/L)3.43±0.093.43±0.11低密度脂蛋白LDL-C (mmol/L)0.22±0.010.22±0.01高密度脂蛋白HDL-C (mmol/L)2.55±0.082.91±0.08**動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)AI0.36±0.020.25±0.01***肌酸激酶CK (U/L)2052±282.12194±259.8 乳酸脫氫酶LDH (U/L)601.2±34.03650.2±40.45 谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT (U/L)49.89±2.3753.39±2.43 谷草轉(zhuǎn)氨酶AST (U/L)157.7±11.00154.6±9.23 堿性磷酸酶ALP (U/L)113.6±5.08112.8±7.65

注：采用t檢驗(yàn)來進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)，*P< 0.05,**P< 0.01,***P< 0.001, vs. C57BL/6 J mice。

Note. Statistical evaluation was performed byttest,*P< 0.05,**P< 0.01,***P< 0.001, vs. the C57BL/6 J mice.

2.6　Slit2-Tg小鼠心臟的轉(zhuǎn)錄組測序分析

對(duì)Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠的心臟進(jìn)行17 513個(gè)基因的測序，與C57BL/6 J小鼠對(duì)比，結(jié)果顯示Slit2-Tg小鼠心臟組織中有535個(gè)基因有顯著性差異表達(dá)，其中有239個(gè)基因表達(dá)顯著降低，296個(gè)基因表達(dá)顯著升高(圖6 A)。這些基因主要位于1、2、7和11號(hào)染色體上(圖6B)，涉及改變的生物進(jìn)程有：趨化因子調(diào)控、趨化因子生成調(diào)控、白細(xì)胞趨化調(diào)控、淋巴細(xì)胞遷移、細(xì)胞遷移反向調(diào)控；左心室形態(tài)學(xué)、膠原纖維、血管大小調(diào)控、骨生成相關(guān)調(diào)控；橫紋肌收縮、鈉離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控；不飽和脂肪酸合成、激素合成調(diào)控、胰島素應(yīng)答(表5)。

表4　心臟超聲功能評(píng)價(jià)結(jié)果Tab.4　Results of evaluation of the mouse

注：*P< 0.05，表明Slit2-Tg小鼠與C57BL/6 J小鼠的數(shù)值差異有顯著性。

Note.*P< 0.05, indicating significant differences between the Slit2-Tg and C57BL/6 J mice.

注：A和C，超聲顯示C57BL/6 J小鼠正常心臟的B型和M型圖；B和D，超聲顯示Slit2-Tg小鼠正常心臟的B型和M型圖。圖5　Slit2-Tg小鼠與C57BL/6 J小鼠的心臟功能檢測Note. A and C: Typical B- and M-mode images of the normal heart in C57BL/6 J (long axis). B and D: Typical B- and M-mode images of the normal heart in Slit2-Tg (long axis).Fig.5　Detection results of cardiac function of the Slit2-Tg and C57BL/6 J mice

注：A，Slit2-Tg小鼠心臟的差異表達(dá)基因的整體分布情況，藍(lán)色(降低)，紅色(升高)，黑色(沒差異)，設(shè)定改變的基線為|-Log10 (0.05)|≥1.3及|Log2 (fold change)|≥2；B，Slit2-Tg小鼠心臟有顯著性差異表達(dá)的基因在各染色體上的分布，藍(lán)色表達(dá)升高的基因，紅色表達(dá)降低的基因。圖6　Slit2-Tg小鼠心臟的基因差異表達(dá)分析Note. A: Overall distribution of differentially expressed genes in the heart of Slit2-Tg mice. Blue (decreased expression), red (increased expression), black (no difference), baseline for setting change is |-Log10 (0.05) |≥1.3 and |Log2 (fold change) |≥2. B: Distribution of genes with significantly different expression on each chromosome in the Slit2-Tg mouse hearts. Blue, elevated genes; red, decreased genes.Fig.6　Analysis of differential gene expression in the heart of Slit2-Tg mice

生物進(jìn)程和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)Biological process and signal transduction基因歸類Classified genes細(xì)胞遷移反向調(diào)控 Negative regulation of cell migrationIgfbp3, Timp1, Ptn,Olfm1, Igfbp5, Ccl12, Fam65b,Nov,Grem1, Nr2f2, Cxcl13, Rgcc, Serpinf1, Tbx5, Sfrp2, Podn,Adipoq白細(xì)胞趨化調(diào)控Regulation of leukocyte chemotaxisCcl2, Ccr2, Ccl12, Fam65b,Cd74, Ppbp,Nov,Grem1, Mpp1, Cxcl13, Rarres2趨化因子生成調(diào)控Regulation of chemokine productionPostn,Darc,Ticam2, P2ry2, Egr1, Cd74, Il4ra,Adipoq,Arg2淋巴細(xì)胞遷移Lymphocyte migrationCcl2, Ccr2, Ccl11, Ccl12, S1pr1, Cxcl13, Ccl7趨化因子調(diào)控信號(hào)Chemokine-mediated signaling pathwayCcl2, Darc,Ccl11, Ccl12, Foxc1, Ppbp,Cxcl13, Ccl7血管大小調(diào)控Regulation of blood vessel sizeRgs2, Adm,Mrvi1, Acta2, Kcna5, P2ry2, Atp1a2, Foxc,Htr2b,Hrh2, Nppa,Ptas1, Alox12左心室形態(tài)學(xué)Left cardiac ventricle morphogenesisFgf9, Tgfb2, Tbx5, Sfrp2, Hand1膠原纖維組織Collagen-fibrotic tissueFoxc1, Col14a1, Grem1, Dpt,Lum,Tgfb2, Sfrp2骨生成相關(guān)調(diào)控Regulation of ossificationIgfbp5, Fzd9, Tmem119, P2ry2, Id2, Prkd1, Tob2, Gnas,S1pr1, Smoc1, Tph1, Grem1, Cited1, Ahsg, Mgp, Sfrp2鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控Regulation of sodium ion transportSlc9a3, Atp2b4, Fgf12, Atp1a2, Fxyd3, Gnas,Nkain4, Scnn1b,Fxyd2, Fxyd5鈉離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)Transmembrane sodium ion transportSlc9a3, Atp1a2, Slc8a2, Scnn1b,Slc9a4, Slc17a7, Slc12a3橫紋肌收縮Striated muscle contractionKcna5, Myl1, Uty,Mybphl,Chrne,Chrng,Kcne2, Homer1, Arg2, Myl4胰島素應(yīng)答Response to insulinIrs2, Egr1, Sort1, Gck,Soga1, Vgf,Irs4, Cited1, Slc25a33, Hadha,Adipoq,Pak1激素合成調(diào)控Regulation of hormone biosynthesisVdr,Egr1, Cyp17a1, Dkk3, Akr1c18, Nfkb1不飽和脂肪酸合成Unsaturated fatty acid biosynthesisPtgis,Cd74, Scd1, Alox12b,Ptas1, Alox12

3　討論

本研究系統(tǒng)的研究了Slit2-Tg小鼠的生物學(xué)參數(shù)和心臟生理功能，并與C57BL/6 J小鼠的相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行了比較。在生物學(xué)參數(shù)方面，Slit2-Tg小鼠的每窩產(chǎn)仔數(shù)顯著高于C57BL/6 J小鼠，脾臟器系數(shù)顯著增加，血常規(guī)中的紅細(xì)胞數(shù)量、血小板數(shù)量及嗜酸性粒細(xì)胞有顯著改變，血生化中代謝物、脂類和酶類均有部分指標(biāo)發(fā)生了顯著改變；在心臟形態(tài)學(xué)、功能學(xué)和基因差異富集分析中，Slit2-Tg小鼠心臟舒張末期的左室前壁厚度較小，有535個(gè)基因表達(dá)顯著升高或降低，并集中體現(xiàn)在15條生物進(jìn)程和信號(hào)通路。研究結(jié)果完善了Slit2-Tg小鼠的生物學(xué)特性指標(biāo)，并表明了此遺傳工程小鼠在心血管疾病防治研究中具有重要價(jià)值。

雖然早期研究表明Slit2-Tg小鼠可出現(xiàn)生殖器官異位[13-14]，但本研究中我們對(duì)Slit2-Tg小鼠的繁育情況進(jìn)行了觀察記錄，發(fā)現(xiàn)與C57BL/6 J小鼠相比Slit2-Tg小鼠的產(chǎn)仔率顯著提高，表明即使出現(xiàn)部分生殖器官異常也不會(huì)直接影響繁育，能夠保證獲取足夠的后代開展實(shí)驗(yàn)。本研究發(fā)現(xiàn)Slit2-Tg小鼠脾臟系數(shù)顯著增加，但顯微組織觀察未見其形態(tài)學(xué)異常，未知此結(jié)構(gòu)改變是良性還是損害性代償。我們亦發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)較低，結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)Slit2蛋白過表達(dá)可減少血管損傷使和血栓形成[6, 19-20]，推測Slit2可能減緩動(dòng)脈粥樣硬化癥的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。

差異基因富集分析顯示伴隨著Slit2過表達(dá)出現(xiàn)了趨化因子相關(guān)的基因表達(dá)改變，此與其他報(bào)道Slit2蛋白能夠調(diào)控中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的遷移[7-8,22]相一致；另外，分析結(jié)果指出Slit2-Tg小鼠心臟組織的激素、肌肉收縮調(diào)控、組織結(jié)構(gòu)相關(guān)基因改變了表達(dá)，結(jié)合超聲顯示的Slit2-Tg小鼠心臟舒張期前壁的改變，提示了Slit2可能通過介導(dǎo)炎癥信號(hào)調(diào)控心臟功能，而人Slit2過表達(dá)遺傳工程小鼠可能成為解釋此機(jī)制的重要工具。