呼腸孤病毒感染的樹鼩中三類CD分子及IFN-γ表達(dá)變化及特征

袁圓，王璇，張志成，李娜，王文廣，匡德宣，代解杰

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院/北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所, 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)樹鼩標(biāo)準(zhǔn)化與應(yīng)用研究省創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，云南省眼科疾病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明　650118)

哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒(mammalian orthoreovirus, MRV)是基因組含10個(gè)節(jié)段的呼腸孤病毒科 (Reoviridea)正呼腸孤病毒屬 (Orthoreovirus) RNA病毒[1]，標(biāo)準(zhǔn)株可根據(jù)紅細(xì)胞凝集活性分為： T1L(Long株)、T2J(Jone 株)和T3D/T3A(Dearing株/ Abney株)[2]。MRV具有廣泛的宿主譜，但一般僅在幼體或免疫功能不全的動(dòng)物體內(nèi)引起嚴(yán)重感染[3]。由于MRV特殊的基因組[4]特性和廣泛的宿主譜特征可能對(duì)人造成潛在威脅[5]，且其作為溶瘤病毒在肝癌治療中的重要價(jià)值[6]，故對(duì)呼腸孤病毒引起宿主免疫的特征的研究十分必要。目前呼腸孤病毒免疫學(xué)方面相關(guān)研究多集中于番鴨[7]、草魚呼腸孤病毒[8]，哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒免疫相關(guān)的研究十分有限；樹鼩(tree shrew)作為靈長類近親，近期也從其糞便中分離出的兩株分屬于T1型和T3型的呼腸孤病毒MRV1/TS/2011和MRV3/TS/2013[9]，關(guān)于兩株病毒的特征和引發(fā)宿主免疫的變化規(guī)律亟待補(bǔ)充。前期研究表明，呼腸孤病毒感染正常樹鼩后，僅在感染前期有較高的復(fù)制表達(dá)，后期病毒表達(dá)水平有所下降，甚至逐漸被機(jī)體清除[10]；在此過程中與適應(yīng)性免疫相關(guān)的II型干擾素基因有所上調(diào)[11]，但機(jī)體清除呼腸孤病毒的具體免疫機(jī)制以及機(jī)體適應(yīng)性免疫在此過程中發(fā)揮的作用尚未明晰。臨床檢測中CD4+/CD8+和IL-4/IFN-γ常作為適應(yīng)性免疫功能評(píng)價(jià)的指標(biāo)[12]，綜合常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)[13]，以及適應(yīng)性免疫中發(fā)揮主要功能的細(xì)胞類群，本文選用：CD4(一般表達(dá)于輔助性T細(xì)胞)、CD8(一般表達(dá)于殺傷性T細(xì)胞，cytotoxic lymphocyte，CTL表面)、 CD19(表達(dá)于所有B細(xì)胞)、IFN-γ(由CD4+Th1類細(xì)胞分泌，可協(xié)同CTL細(xì)胞共同發(fā)揮細(xì)胞免疫作用)[14]作為實(shí)時(shí)監(jiān)測機(jī)體適應(yīng)性免疫反應(yīng)變化情況的指標(biāo)，用MRV1/TS/2011和MRV3/TS/2013感染自身未攜帶呼腸孤病毒的樹鼩，通過對(duì)感染后樹鼩體內(nèi)病毒載量及四個(gè)指標(biāo)的變化情況初步推斷呼腸孤病毒引起宿主免疫反應(yīng)的過程，為樹鼩源呼腸孤病毒自身感染特性的研究提供科學(xué)依據(jù)，對(duì)人獸共患疾病的防治也有重要的指導(dǎo)意義。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)遠(yuǎn)交繁殖的F4代中緬樹鼩滇西亞種(tree shrew,Tupaiabelangerichinensis)由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所樹鼩種質(zhì)資源中心提供【SCXK(滇)K2013-0001】，飼養(yǎng)于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所樹鼩種質(zhì)資源中心普通環(huán)境【SYXK(滇)K2013-0001】，于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所樹鼩種質(zhì)資源中心進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有操作均符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求(倫理審批號(hào)：DWSP201803034)。

1.1.2試劑及設(shè)備

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀：美國Bio-Rad，型號(hào)為CFX-96；高壓滅菌鍋：日本Tomy公司，型號(hào)為TOMY-SS-325；恒溫培養(yǎng)箱：美國Forma公司，型號(hào)為CO2 T/C；生物安全柜：美國Forma公司，型號(hào)為A/B3型(6Ft)；低溫離心機(jī)：日本Hitachi公司，型號(hào)為CT15RE；QIAamp?Viral RNA Mini Kit (德國Qiagen)；生理鹽水；胃管；采血注射器；Perfect Real Time One step primescript RT-PCR kit (TaKaRa)；樹鼩CD4單克隆抗體(PerCP，小鼠源)；樹鼩CD8單克隆抗體(PerCP，小鼠源)；人CD19單克隆抗體(PerCP，小鼠源)；溶血素(Beckman)。

1.2　方法

1.2.1動(dòng)物分組

選取離乳40～50 d左右的樹鼩16只，體重60～70 g，尾靜脈采血160 μL，QIAamp?Viral RNA Mini Kit提取試劑盒提取總RNA，將產(chǎn)物進(jìn)行PCR，隨機(jī)選取病毒檢測為陰性的動(dòng)物12只(雌雄各半)分為三組，4只一組灌胃病毒液。A組：MRV1/TS/2011 106.1TCID 50/mL 0.8 mL/只；B組：MRV1/TS/2011 105.6TCID 50/mL 0.8 mL/只；對(duì)照組即C組：等量灌入生理鹽水。

1.2.2病毒樣本擴(kuò)增培養(yǎng)及毒力檢測

Vero細(xì)胞接種于12孔板進(jìn)行病毒培養(yǎng)后，免疫熒光初步確定收毒條件：感染后36～75 h之間收毒，外源加入阿爾法糜蛋白酶。小方瓶內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)毒，收毒，反復(fù)凍融三次破碎細(xì)胞，4℃，4000 r/min離心30 min，去沉淀。

收取病毒，TCID50檢測病毒毒力：將Vero細(xì)胞按接種于96孔板，于37℃孵箱中培養(yǎng)至長成致密單層。PBS清洗后，加入終濃度為10 μg/mL的糜蛋白酶的維持液，倍等比稀釋病毒，101～108共8個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度設(shè)10個(gè)實(shí)驗(yàn)孔，2個(gè)對(duì)照孔。甩干孔板中的PBS，實(shí)驗(yàn)孔接種稀釋后的病毒液，對(duì)照孔加入相應(yīng)不含病毒的維持液。37℃孵箱中培養(yǎng)，觀察并記錄出現(xiàn)CPE的孔數(shù)，計(jì)算TCID50。按前期實(shí)驗(yàn)確定的最適攻毒條件調(diào)整本次實(shí)驗(yàn)的攻毒劑量。

1.2.3樣本采集處理

病毒感染第1、8、14、21、28天，尾靜脈采集采抗凝血400 μL。

分為三部分，其中150 μL提取核酸后檢測病毒載量，QIAamp?Viral RNA Mini Kit提取試劑盒提取總RNA，將產(chǎn)物進(jìn)行RT-PCR，檢測的引物見表1。

表1　用于實(shí)時(shí)定量RT-qPCR的MRV/TS探針及引物序列Tab.1　Primers and probes of RT-qPCR of the MRV/TS

取100 μL血樣利用ELISA檢測IFN-γ表達(dá)量：將標(biāo)準(zhǔn)品及樣品加完后，放于濕盒內(nèi)室溫孵育2 h；棄去酶標(biāo)包被板中液體，加滿洗液清洗3次，拍干；用稀釋液按1∶1500的比例稀釋酶標(biāo)抗體，在標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋孔、對(duì)照孔及待測樣品孔中，每孔加入稀釋好的酶標(biāo)抗體100 μL，空白孔A1除外；濕盒內(nèi)室溫孵育1 h；加滿洗液清洗3次，拍干；加入顯色液顯色10 min，加終止液1終止反應(yīng)。在450 nm波長依序測量各孔的吸光度(A值)。

剩余部分樣品利用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞后流式上機(jī)檢測。每份取100 μL單細(xì)胞懸液，約1×106個(gè)細(xì)胞；樣品取一份細(xì)胞加入10 μL樹鼩CD4/CD8/CD19單克隆抗體PerCP；空白取一份細(xì)胞不加抗體；室溫下避光反應(yīng)1～2 h；每份加入1 mL PBS，輕柔洗滌細(xì)胞一次，2000 r/min離心10 min，棄上清；每份加入300 μL PBS重懸細(xì)胞，上機(jī)檢測。

1.3　數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)得出后以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤記錄，作圖。組間差異性用t-test軟件 分 析，P< 0.05表示差異有顯著性，P< 0.01表示差異極顯著。IFN-γ測定后，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的Logistic曲線擬合(四參數(shù))回歸方程式，根據(jù)樣品的A值代入方程式計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

2　結(jié)果

2.1　病毒載量隨感染時(shí)間變化

血漿中兩組病毒載量均在感染后第14天有高表達(dá)，其中A組(感染MRV1/TS/2011的動(dòng)物)相較于B組(感染MRV3/TS/2013的動(dòng)物)表達(dá)量較高，最高可達(dá)7.05×104copies/mg，其余時(shí)間均檢測到微量表達(dá)；B組在第14天呈8.59×103copies/mg高表達(dá)后，第21天仍有較高表達(dá)，第28天表達(dá)量急劇減少。對(duì)照組無病毒RNA表達(dá)，與對(duì)照組比較，兩個(gè)病毒感染組在第14天差異有顯著性(P<0.05)，詳見圖1。

注：與對(duì)照組比較 *P< 0.05，差異有顯著性。圖1　MRV1/TS/2011和MRV3/TS/2013感染樹鼩后血漿中的病毒載量Note. *P< 0.05 means there was a significant difference.Fig.1　Expression of virus in the tree shrews infected with MRV1/TS/2011 and MRV3/TS/2013

2.2　免疫細(xì)胞數(shù)量及IFN-γ表達(dá)量隨感染時(shí)間變化

經(jīng)兩株病毒感染后，CD4+、CD8+及CD19+細(xì)胞陽性率表達(dá)呈現(xiàn)波動(dòng)變化，CD4+及CD19+細(xì)胞量均在第14天達(dá)峰值；對(duì)照組CD4+細(xì)胞陽性率基本表達(dá)在20%～30%之間，對(duì)照組CD19+細(xì)胞陽性率基本在4%～8%之間；其中，CD4+細(xì)胞在感染后第1、14、21天均有較高的表達(dá)，A組CD4+細(xì)胞在感染第1天顯著高于對(duì)照組；其余時(shí)間細(xì)胞量低于對(duì)照組；CD19+在第21、28天表達(dá)量低于對(duì)照組，第28天感染后細(xì)胞陽性率與對(duì)照組相比差異有顯著性。與對(duì)照組相比，經(jīng)MRV3/TS/2013感染的CD19+細(xì)胞在第8天和第14天細(xì)胞陽性率顯著升高；而經(jīng)MRV1/TS/2011感染后CD19+細(xì)胞變化不如MRV3/TS/2013明顯。兩株病毒感染后CD8+細(xì)胞量在21天達(dá)峰值；在感染第14天、第28天時(shí)，與對(duì)照組相比，經(jīng)兩株病毒感染后CD8+細(xì)胞量顯著減少。對(duì)照組CD8+細(xì)胞表達(dá)基本維持在1%～3%之間。如圖2。

對(duì)照組CD4+/CD8+在感染后也呈波動(dòng)變化，變化范圍在5～14之間，在第21天時(shí)有最小值；MRV1/TS/2011感染后，在第1、8、14天，CD4+/CD8+顯著高于對(duì)照組；而在MRV3/TS/2013感染后，第14、28天，CD4+/CD8+顯著高于對(duì)照組。詳見表2。對(duì)照組IFN-γ表達(dá)量在7～12之間，經(jīng)MRV1/TS/2011及MRV3/TS/2013感染后，IFN-γ表達(dá)量均在第21天與對(duì)照組相比差異有顯著性，達(dá)最大值，詳見圖3。

3　討論

適應(yīng)性免疫是機(jī)體抵御外界病原侵染的一條重要途徑，由淋巴細(xì)胞增殖分化為表達(dá)不同CD分子的效應(yīng)細(xì)胞[15]，完成細(xì)胞免疫及體液免疫兩種應(yīng)對(duì)。生物研究和臨床上常通過對(duì)CD分子的監(jiān)測來反映機(jī)體免疫功能或判斷病程。CD4+細(xì)胞增加被認(rèn)為是細(xì)胞免疫增強(qiáng)的表現(xiàn)[16]；IFN-γ誘導(dǎo)并參與細(xì)胞免疫，CD8+表達(dá)于CTL表面，兩者表達(dá)量增加常意味著機(jī)體細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)，B表面的CD19+增加則相反，表明機(jī)體體液免疫功能增強(qiáng)。而適應(yīng)性免疫的研究不僅在疾病的機(jī)理研究中有重要作用[17-18]，也能為后續(xù)治療提供思路；如，溶瘤病毒治療的一條重要思路就是發(fā)宿主的免疫應(yīng)答[19]，目前，在缺乏適應(yīng)性免疫應(yīng)答的兩種小鼠模型中研究表明，借助引發(fā)免疫反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)呼腸孤病毒的抗腫瘤效應(yīng)具有可行性和有效性[20]。故呼腸孤病毒引起機(jī)體適應(yīng)性免疫反應(yīng)的研究十分必要，且因樹鼩與其他哺乳類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，如小鼠，在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)中相比親緣關(guān)系更接近于人[21]，故本研究在未來臨床治療中存在重要的潛在價(jià)值。

注：a圖為CD4+細(xì)胞陽性率隨天數(shù)變化情況；b圖為CD8+細(xì)胞陽性率隨天數(shù)變化情況；c圖為CD19+細(xì)胞陽性率隨天數(shù)變化情況；與對(duì)照組比較 *P< 0.05，差異有顯著性，**P< 0.01，差異有極顯著性。圖2　MRV1/TS/2011和MRV3/TS/2013感染樹鼩后血漿中CD4+/CD8+/CD19+ 表達(dá)情況Note. Figure a shows CD4+ cells changed with the time after infection. Figure b shows CD8+ cells changed with the time after infection; Figure c shows CD19+ cells changed with the times after infection. *P< 0.05 means there was a significant difference, and **P< 0.01means there was a extremely significant difference.Fig.2　Expression of CD4+/ CD8+/CD19+ cells in the tree shrews infected with MRV1/TS/2011 and MRV3/TS/2013

組別Groups第1天Day 1第8天Day 8第14天Day 14第21天Day 21第28天Day 28實(shí)驗(yàn)組A:MRV1/TS/201111.07327.042174.8764.95514.0761實(shí)驗(yàn)組B:MRV3/TS/20136.4481.12966.9724.50819.546對(duì)照組Control8.61612.28613.4235.68313.154

注：與對(duì)照組比較 *P< 0.05，差異有顯著性；第21天時(shí)，MRV1/TS/2011和MRV3/TS/2013感染組與對(duì)照組相比差異均有顯著性。圖3　MRV1/TS/2011和MRV3/TS/2013感染樹鼩后血漿中IFN-γ表達(dá)量情況Note. *P< 0.05 means there is a significant difference; animals infected by MRV1/TS/2011and MRV3/TS/2013 both have significant difference on the 21’th day, compared with the normal group.Fig.3　IFN-γ expression in the tree shrew infected with MRV1/TS/2011 and MRV3/TS/2013

目前關(guān)于呼腸孤病毒引起機(jī)體免疫反應(yīng)的研究十分有限，主要以和產(chǎn)業(yè)養(yǎng)殖相關(guān)的草魚和番鴨作為研究對(duì)象。草魚呼腸孤病毒感染是草魚出血癥的主要病因，草魚可以通過魚鰓上調(diào)12種抗病毒免疫相關(guān)基因表達(dá)來應(yīng)對(duì)病毒感染[8]。與哺乳動(dòng)物不同，草魚雖有脾、腎、胸腺等免疫器官，但主要的免疫細(xì)胞為IgM陽性細(xì)胞、IgZ陽性細(xì)胞和PAS陽性細(xì)胞[22]，經(jīng)病毒感染后三類主要免疫細(xì)胞的變化情況暫未見報(bào)道。姚金水等[23]先后證實(shí)番鴨呼腸孤病毒可誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡，特別是免疫細(xì)胞凋亡從而引起免疫抑制，同時(shí)還能能引起嚴(yán)重的法氏囊損傷。而本文結(jié)果顯示，CD4+、CD8+、CD19+三類細(xì)胞僅在感染后期明顯低于正常組，未觀察到明顯的免疫抑制現(xiàn)象。李爽等[24]研究表明鴨源呼腸孤病毒感染雛鴨后CD8+細(xì)胞陽性率也呈波動(dòng)變化，在第5 天達(dá)到峰值；而第14 天，實(shí)驗(yàn)組CD8+細(xì)胞陽性率明顯低于對(duì)照組；同樣，王全溪等[25]在雛番鴨上的研究也表明試驗(yàn)組脾臟在攻毒后第 5 天，漿細(xì)胞數(shù)量比對(duì)照組少，差異有顯著性(P< 0.01)，之后細(xì)胞數(shù)量有所回升，提示鴨源呼腸孤病毒可能直接對(duì)免疫器官進(jìn)行損傷，使外周血 CD3+、 CD8+T 細(xì)胞陽性率降低， 導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫水平下降，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制；而本文研究表明MRV1/TS/2011及MRV3/TS/2013載量在感染第14 天達(dá)峰值，這一結(jié)果與前期實(shí)驗(yàn)所得相符[10]；而CD4+及CD19+細(xì)胞數(shù)量也在感染后第14天達(dá)峰值，其中經(jīng)MRV1/TS/2011感染后第1天CD4+就有較高表達(dá)且數(shù)值與正常組相比有顯著性差異，且相較于其他兩種被檢測細(xì)胞，感染過程中，CD4+細(xì)胞陽性率一直較高；可推測在病毒感染前期，機(jī)體主要產(chǎn)生CD4+細(xì)胞，在整個(gè)應(yīng)對(duì)感染的過程中，CD4+細(xì)胞一直發(fā)揮主要作用；在第14天病毒高表達(dá)時(shí)，CD19+細(xì)胞數(shù)量顯著增加，共同參與機(jī)體免疫反應(yīng)。關(guān)于哺乳動(dòng)物源呼腸孤病毒的研究目前主要集中與其分子和感染特性，關(guān)于其引起機(jī)體的免疫反應(yīng)尚未見報(bào)道。為了解樹鼩源呼腸孤病毒感染正常個(gè)體后到被機(jī)體自然清除的過程，本文主要選用動(dòng)物離乳40～50 d的樹鼩，此發(fā)育階段的樹鼩個(gè)體免疫功能已近完善，且樹鼩免疫系統(tǒng)發(fā)育在進(jìn)化上要優(yōu)于番鴨、草魚，故不同于這兩者的研究結(jié)果，在樹鼩上未發(fā)現(xiàn)明顯的免疫抑制現(xiàn)象，動(dòng)物免疫器官及動(dòng)物個(gè)體也未表現(xiàn)明顯的感染病癥。結(jié)合已有報(bào)道，以及本文CD4+細(xì)胞和CD19+經(jīng)兩株病毒感染后表現(xiàn)出的敏感性不同，一方面驗(yàn)證了前期實(shí)驗(yàn)中呼腸孤病毒能被正常機(jī)體清除的結(jié)論，另一方面提示我們不同來源的呼腸孤病毒對(duì)宿主感染的機(jī)制各不相同，不同型別的呼腸孤病毒也會(huì)針對(duì)性引起的機(jī)體不同的免疫反應(yīng)。初步推測MRV1/TS/2011感染前期主要激起機(jī)體體液免疫；MRV3/TS/2013可能主要影響機(jī)體細(xì)胞免疫，體液免疫只在病毒表達(dá)量顯著升高及感染后期發(fā)揮作用。與呼腸孤病毒現(xiàn)有的研究對(duì)象相比，本文選用近人靈長類動(dòng)物樹鼩作為對(duì)象，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒感染及刺激機(jī)體免疫應(yīng)對(duì)的機(jī)制研究提供了補(bǔ)充資料。

不同時(shí)間服用纈沙坦氫氯噻嗪對(duì)非杓型高血壓患者血壓晨峰和內(nèi)皮功能的影響………………… 張倩輝 王立立 張志梅 等（4）462

實(shí)驗(yàn)中采用的CD19+抗體為小鼠源抗人抗體，可通過交叉反應(yīng)識(shí)別樹鼩CD19+細(xì)胞[26]，可能存在非特異性識(shí)別的情況，對(duì)B細(xì)胞數(shù)量的確立可能存在一定誤差；且實(shí)驗(yàn)使用單染流式計(jì)數(shù)，所得結(jié)果僅能初步反應(yīng)感染后個(gè)體免疫細(xì)胞的變化趨勢，為確定T輔助細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等在感染過程中發(fā)揮的具體作用，則后續(xù)實(shí)驗(yàn)中還需加入CD3+細(xì)胞染色，由雙染特異的圈定具體細(xì)胞亞群，反應(yīng)其準(zhǔn)確的變化情況?，F(xiàn)有的IL-4試劑盒對(duì)樹鼩檢測的靈敏性不高，故實(shí)驗(yàn)中未加入該指標(biāo)，僅用IFN-γ輔助判斷細(xì)胞與體液免疫；本次各類CD分子及IFN-γ檢測中，對(duì)照組結(jié)果都有較大的個(gè)體的差異，故CD4+/CD8+比值僅作為參考體液免疫和細(xì)胞免疫主導(dǎo)作用的一個(gè)輔助指標(biāo)，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本才能得出一個(gè)正常比值范圍，作為判斷指標(biāo)。本研究實(shí)驗(yàn)組僅選用4只動(dòng)物，是從小樣本得出的相應(yīng)免疫細(xì)胞基本變化趨勢，實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，樹鼩個(gè)體間免疫功能差異較大，后期實(shí)驗(yàn)還應(yīng)擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)樣本，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中加入陰性對(duì)照組(培養(yǎng)病毒使用的維持液灌胃)、陽性對(duì)照組，增加實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)性，避免偶然誤差，得出普適變化規(guī)律。

本文通過檢測兩株最近從樹鼩糞便分離得到的病毒MRV1/TS/2011及MRV3/TS/2013，感染正常樹鼩后幾類淋巴細(xì)胞表面CD分子及干擾素隨感染時(shí)間的變化情況，初步揭示了樹鼩呼腸孤病毒引起宿主免疫變化的規(guī)律，即：呼腸孤病毒感染樹鼩后，主要刺激機(jī)體產(chǎn)生CD4+細(xì)胞，在病毒表達(dá)量達(dá)高峰期時(shí)，CD19+細(xì)胞顯著增加，可能體液免疫發(fā)揮作用；而在病毒感染后期，CD8+細(xì)胞可能通過細(xì)胞免疫參與抗病毒反應(yīng)，IFN-γ可由Th1類細(xì)胞和CD8+細(xì)胞分泌，在病毒感染后期參與細(xì)胞免疫；CD4+可能對(duì)1型呼腸孤病毒更敏感，而CD19+可能對(duì)3型呼腸孤病毒更敏感。對(duì)兩株病毒的感染規(guī)律研究有一定補(bǔ)充，同時(shí)可為呼腸孤病毒在機(jī)體內(nèi)避開機(jī)體免疫發(fā)揮溶瘤作用提供一定的思路，可拓展呼腸孤病毒發(fā)揮溶瘤效應(yīng)的分子機(jī)制，也為樹鼩的病毒防范提供了理論基礎(chǔ)。