鵪鶉不同采血方法對比與評價

李高璽，林志健，張　冰，王海鴿

(北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京　100029)

鵪鶉生長速度快，體型適中，是雞形目中最小的品種，易于飼養(yǎng)管理，作為一種新型實驗動物，鵪鶉已廣泛應用于生物學與醫(yī)學研究[1]。鵪鶉血液的獲取是檢測血清中相關生化指標的前提和基礎。而簡便、快速、有效的采血技術是獲取實驗用足夠血液量、成功分離血清及準確測定指標的保證。本研究以雄性迪法克鵪鶉為研究對象，通過對鵪鶉翼根靜脈、左頸靜脈、右頸靜脈三部位采血操作，評價鵪鶉不同采血方法，進而為醫(yī)學研究中實驗鵪鶉血液獲取提供基礎技術支持。

1　材料和方法

1.1　實驗動物

迪法克鵪鶉300只，5周齡，雄性，體重(170±10)g，均購自北京市德嶺鵪鶉養(yǎng)殖場，生產(chǎn)許可證號：110113600218082。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學普通級動物實驗室[SYXK(京)2016-0038]。倫理審查證號：1100000013479。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫20℃～26℃，相對濕度40%～60%。

1.2　主要試劑

一次性使用無菌注射器2 mL(山東頤興醫(yī)療器械有限公司)；酒精消毒液(邯鄲市捷利康商貿(mào)有限公司)。

1.3　實驗方法

1.3.1實驗分組

鵪鶉隨機分為3組，分別為翼根靜脈組、左頸靜脈組、右頸靜脈組，每組100只；各組均正常飲食飲水，每10 d對三組鵪鶉分別采用翼根靜脈、左頸靜脈、右頸靜脈采血部位采血1次，實驗重復5次。動物采血前稱重并禁食不禁水12 h，在實驗人員統(tǒng)一、操作環(huán)境一致的情況下，對鵪鶉三部位進行采血操作。

1.3.2鵪鶉捉持與固定方法

右手捉持鵪鶉，右手食指和中指分別扣于鵪鶉左右兩肩之上，右掌心貼鵪鶉背，右手拇指和無名指、小指扣于鵪鶉腹部左右兩側(cè)，力度適中，避免鵪鶉死亡。左手自然平伸，上覆20×40 cm2清潔白布，軟硬適中；使鵪鶉蜷腿臥于左掌心，左手拇指順勢帶布繞過鵪鶉，右手向左裹住鵪鶉，交叉重復，完成包裹。(如圖1)

注：(A)鵪鶉捉持；(B)鵪鶉固定。圖1　鵪鶉捉持與固定Fig.1　The capture (A) and fixation (B) of a quail

1.3.3右頸靜脈采血法

鵪鶉包裹完成后，使鵪鶉呈45°角放置腿部。左手食指與中指將鵪鶉脖頸夾于兩指根縫部，中指微上挑，食指彎曲如半圓形整體向后推拂羽毛并略微下按，左右手拇指輔助食指將頸部羽毛按于食指之下，清除障礙，暴露血管，拇指輕壓頸靜脈近心端。此時，鵪鶉右頸部靜脈血管怒張，若無怒張或怒張不顯時，可左右拇指推移血管、指尖輕輕點壓血管，同時左手食指下壓、中指上挑微用力使鵪鶉頸部彎曲，暴露血管。在進針周圍用碘伏或酒精消毒干燥后，右手持帶針頭2.0 mL注射器(6號針頭)沿與靜脈血管10°角進針0.3 cm左右，右手中指緩緩后移注射器管塞，食指稍放松，血量達到要求后，拔出針頭，用棉球稍按壓針口止血數(shù)秒至無出血，不能揉動采血部位，以防出血或瘀青。(如圖2)

1.3.4左頸靜脈采血法

鵪鶉左頸靜脈采血手法與右側(cè)相似；左手以食指和中指夾住鵪鶉頭部，鵪鶉頭部偏左，無名指、小指、手掌固定鵪鶉身體，拇指輕壓頸部使血管怒張，在進針周圍用消毒后，右手持帶針頭2.0 mL注射器(6號針頭)沿與靜脈10°角進針0.3 cm左右，抽取血液，采血結束后，棉球稍按壓針口止血數(shù)秒至無出血，不能揉動采血部位，以防出血或瘀青。左頸靜脈采血手法同理。(如圖3)

1.3.5鵪鶉翼根靜脈采血法

鵪鶉固定后，將其翅膀展開，露出腋窩，將細絨羽毛拔去，即能見到翼根靜脈。在進針周圍用碘伏或酒精消毒干燥后，左手拇指、食指壓迫血管向心端，血管怒張后，右手用2.0 mL帶針頭注射器(6號針頭)沿與靜脈10°角進針0.3 cm左右，即可采血，采血成功后，用棉球按壓止血數(shù)秒至無出血。(如圖4)

1.3.6評價原則

在實驗人員統(tǒng)一、操作環(huán)境一致的情況下，對鵪鶉三部位進行采血操作。對比三種采血方式，以短、中、長分別代表每只鵪鶉采血平均用時，以1～2 min、2～4 min、>4 min評價采血用時；以優(yōu)劣代表血清質(zhì)量，以血清析出量和血清是否溶血評價血清質(zhì)量；以少、一般、多分別代表采血后皮下出血量，以每只鵪鶉進針位置平均出血圓周直徑0～0.5 cm、0.5～1 cm、>1 cm評價皮下出血量。

2　結果

2.1　不同采血方式評價

每只鵪鶉平均采血用時：翼根靜脈法>左頸靜脈法>右頸靜脈法；其中，如能熟練掌握右頸靜脈采血技術，可將每只鵪鶉采血時間控制在3 min以內(nèi)，此法創(chuàng)傷小，短時間內(nèi)可對鵪鶉循環(huán)采血。血液質(zhì)量：左右頸靜脈法優(yōu)于翼根靜脈法；皮下出血量：翼根靜脈法>左頸靜脈法>右頸靜脈法。(見表1)

注：(A)鵪鶉右頸靜脈進針；(B)鵪鶉右頸靜脈采血。圖2　右頸靜脈采血法Fig.2　Puncture into the right jugular vein (A) and after blood collection (B) of a quail

注：(A)鵪鶉左頸靜脈；(B)鵪鶉左頸靜脈采血。圖3　左頸靜脈采血法Fig.3　The exposed left jugular vein (A) and drawing blood from it (B) in a quail

注：(A)鵪鶉翼根靜脈；(B)鵪鶉翼根靜脈采血。圖4　鵪鶉翼根靜脈采血法Fig.4　The wing root vein is exposed (A) and blood sample is collected from it (B) in a quail

采血方法Blood sampling methods評價Evaluation采血用時Time for blood collection血清質(zhì)量Serum quality 皮下出血量Subcutaneous bleeding翼根靜脈法The wing root vein method長Long一般Fiar多A lot左頸靜脈法Left jugular vein blood一般Fair優(yōu)Good一般 Fair右頸靜脈法Right jugular vein blood短Short優(yōu)Good少Scanty

2.2　鵪鶉采血30 min后鵪鶉狀態(tài)、飲食、活動情況

實驗觀察到翼根靜采血后，鵪鶉狀態(tài)一般，活動減少，食欲降低,飲水量增加；左頸靜脈采血后，鵪鶉狀態(tài)一般，閉眼次數(shù)較少，俯臥時間長，食欲降低, 飲水量增加；右頸靜脈采血后，鵪鶉狀態(tài)正常，活動情況與采血前無明顯差異，食欲正常,飲水量增加。

2.3　鵪鶉不同采血部位比較

鵪鶉左、右兩側(cè)脖頸部均有約3×3 cm2面積皮膚均無羽毛生長，其表皮完全裸露，可看到清晰頸靜脈。其中右頸靜脈血管全部存于右側(cè)，較為粗壯，存于淺表，血流量大，皮下脂肪較少，容易采血，操作簡便，但其血管位置靠近氣管，易使針頭刺到氣管，導致鵪鶉死亡；左側(cè)頸靜脈由右側(cè)斜繞過脖頸至左側(cè)，存于淺表，但血管相對較細，血流量相對少，針頭易刺穿血管，引發(fā)血管周圍血腫，同時也容易刺入頸椎，導致鵪鶉死亡；翼根靜脈存于翅膀下，淺表皮下，血管微細且軟嫩，血流量較少，皮下脂肪多，采血困難，易刺破血管，血流量較少，采血速度慢，易使血液注射器中堵塞，采血效率不高，采血后也極易形成進針口周圍血腫。但操作對鵪鶉可保證其生命安全，不會因刺入頸椎或刺破氣管而死亡。

3　討論

鵪鶉，學名為Coturnixjaponica，具有體型小、易飼養(yǎng)、生長發(fā)育快、適應性廣、耐密集型飼養(yǎng)、抗病力強、世代間隔短等優(yōu)點。鵪鶉已被應用于遺傳學、營養(yǎng)學、疾病防疫學、組織學、胚胎學、藥理學的研究[2-3]。結合飼養(yǎng)以及實驗操作的可行性，鵪鶉可作為實驗動物塑造各種動物模型，如高尿酸血癥模型[4-5]、高血尿酸高甘油三酯血癥模型[6]、動脈粥樣硬化治療模型[7]、高脂血癥[8-9]、脂肪肝模型等[10]。鵪鶉血清中各項生化指標常被作為評價藥物的藥效以及疾病模型的評價標準。如血清蛋白(TP)、血尿酸、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、總膽固醇(CHO)黃嘌呤氧化酶(XOD)等一系列尿酸、脂、糖代謝指標[13-16]。本課題組長期從事鵪鶉疾病模型塑造與中藥防治研究，鵪鶉證候模型已被《中藥藥效研究方法學》《痛風病學》等工具書收載[11-12]。作為新型實驗動物，鵪鶉的采血技術在文獻中少見記載。成年鵪鶉體重在150～180 g之間，血液總量約占體重的6.5%。若采血操作不規(guī)范，會導致出血量過大，既危及鵪鶉的生命安全同時對后期血清中各項指標的檢測產(chǎn)生影響。

本研究采用圖文形式對鵪鶉采血方法對比展示，既適用于鵪鶉采血初學者，又對改良禽類采血方法有積極啟示作用。通過對鵪鶉三個采血部位的對比與評價，研究人員可根據(jù)需要選擇合適的取血部位。

3.1　鵪鶉采血部位選擇

操作熟練的情況下，鵪鶉左、右頸靜脈采血技術均簡便、快速、采血量均可至1.0 mL以上，也可微量采血；能滿足對不同日齡鵪鶉固定周期內(nèi)連續(xù)采血的需求；對采血部位的損害相對小；適用于對需長期大批量采血的鵪鶉進行采血操作。鵪鶉翼根靜脈翼根靜脈血管微細且嬌嫩，血流量較少，采血較困難，可進行微量或采血量0.5 mL以下的采血操作。

鵪鶉大量采血時可選用左右頸靜脈采血法，少量或微量采血時三種方法均可采用。建議需血量0.5 mL以下采血操作熟練時，可以根據(jù)情況選擇三者任一采血方法均可，若采用翼根靜脈采血，建議使用4號針頭或毛細點樣管采血。若采血量需大于0.5 mL時，可選用左右頸靜脈部位采血。

3.2　鵪鶉采血注意事項

采血環(huán)境與衛(wèi)生：采血環(huán)境要適宜，注意嚴格消毒，采血實驗室要有充足的光線，室溫保持14℃～28℃；采血人員要注意個人衛(wèi)生防護?？谡?、橡膠手套等。

鵪鶉體質(zhì)量：采血時，鵪鶉體質(zhì)量和日齡不宜過小，以防血管細小，出血量少；一般鵪鶉到達35日齡左右，體重在160 g左右時即宜選作為采血對象。

采血針器選擇：采血時帶針頭注射器要干燥清潔，注射器要密封良好，避免漏氣，導致采血失敗；采血針頭不宜過大，以防采血后針口創(chuàng)傷大，止血困難，可根據(jù)采血需要選擇采血針頭。一般頸靜脈采血時可選用6號針頭注射器；翼根靜脈采血時可選用4號或5號針頭注射器。

采血期間：采血時抽血速度要保持均衡緩慢，旋轉(zhuǎn)針頭，避免因回血慢產(chǎn)生血管閉塞，影響采血；進針后，若抽不出血，勿回推，否則鵪鶉易發(fā)生栓塞死亡；采血時按壓血管力度要適度，太緊則不易出血，太松則針頭易滑動，刺破血管；因鵪鶉左右頸靜脈部位皮膚松弛，采血結束后應稍用力按壓進針口，防止過量出血。