豬瘟和豬圓環(huán)病毒2型混合感染流行病學(xué)調(diào)查

鄭藝杰 王藝娟

（1，福建省龍海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 363100；2，福建省漳州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 363000）

豬瘟 （CSF）是由豬瘟病毒 （CSFV)引起的豬高度接觸性傳染病，是嚴(yán)重危害生豬生產(chǎn)的重要疫病，其分布廣、危害大，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。2017年國(guó)家調(diào)整完善重大動(dòng)物疫病防控支持政策，對(duì)豬瘟?xí)翰粚?shí)施國(guó)家強(qiáng)制免疫政策，但在福建省仍將豬瘟列為全面免疫病種之一。當(dāng)前豬瘟病以溫和型、非典型豬瘟為主，而急性豬瘟較少，其發(fā)病特點(diǎn)為感染時(shí)間和潛伏期長(zhǎng)、不受季節(jié)影響、免疫無(wú)效等特點(diǎn)[2]。

豬圓環(huán)病同樣也是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的一種重要疫病，其中PCV2與多種新的豬傳染病的發(fā)生密切相關(guān)，包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征 （PMWS）、豬呼吸道病復(fù)合征 （PRDC）及豬增生性和壞死性肺炎 （PNP）等[3，4]，其中以PMWS的影響最為嚴(yán)重。PCV2可引起豬的多系統(tǒng)功能障礙性疾病，侵害機(jī)體的免疫系統(tǒng)，造成豬的免疫抑制[5,6]，影響豬免疫功能，使豬群對(duì)其他病原體的抵抗能力下降[7]，以豬副嗜血桿菌的繼發(fā)性感染最為常見(jiàn)。2000年郎洪武等首次在國(guó)內(nèi)豬群中檢測(cè)到PCV2的感染，PCV2的感染和流行，給我國(guó)規(guī)?；i場(chǎng)造成相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失[8,9]。

豬瘟病毒 （CSFV）和豬圓環(huán)病毒2型 （PCV2）嚴(yán)重影響豬群健康，是危害豬場(chǎng)生產(chǎn)的兩種主要病毒。為了更好地預(yù)防和控制豬瘟、豬圓環(huán)病等相關(guān)疫病，需要對(duì)龍海市豬群中豬瘟病毒與豬圓環(huán)病毒2型單一感染、混合感染情況有較為清楚的認(rèn)識(shí)，以便制定更有針對(duì)性的防治措施來(lái)提高豬場(chǎng)的生產(chǎn)效率。

1 材料與方法

1.1 檢測(cè)樣本

2016年3月～2017年6月，從龍海市部分豬場(chǎng)35頭病死豬中無(wú)菌采集扁桃體、肺臟、脾臟等組織，于-20℃凍存送檢。

1.2 主要試劑

病毒RNA提取試劑盒、promega反轉(zhuǎn)錄試劑盒、病毒DNA提取試劑盒、DNA Marker1和2x Taq PCR MasterMix均購(gòu)于天根生化科技有限公司。

1.3 主要儀器

TGL-16MC冷凍離心機(jī)；BIO-RAD凝膠成像系統(tǒng)；ABI 7500 PCR儀；DYY-6C型電泳儀。

1.4 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)GenBank登錄的豬瘟病毒基因和豬圓環(huán)2型基因序列，利用primer5.0設(shè)計(jì)2對(duì)引物。引物序列如下∶HCV-F：5'-CCACCTCGAGATGCTATGTGGA-3'， HCV-R： 5'-CCATGTGCCATGTACAGCAGAG-3'， 目標(biāo)片段： 167bp； PCV-F：5’ -TGGGTVTTVACAATTAACAATC-3'， PCV-R： 5'-CAGCCACCCGTAAAAGTCGT-3'，目標(biāo)片段：236bp。以上引物分別由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。

1.5 病毒核酸的提取及PCR反應(yīng)體系

病毒DNA、RNA提取，反轉(zhuǎn)錄及PCR反應(yīng)體系依次按實(shí)驗(yàn)操作步驟完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 DNA與RNA提取效果檢測(cè)

用1%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)病毒DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖1～2。提取的DNA條帶明亮、清晰，可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

2.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果

PCR結(jié)果可見(jiàn)，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物具有良好的特異性，片段長(zhǎng)度大小與預(yù)期的一致，沒(méi)有非特異性雜帶，說(shuō)明這2對(duì)引物可以運(yùn)用于病源檢測(cè)。CSFV擴(kuò)增結(jié)果如圖3，PCV擴(kuò)增結(jié)果如圖4。

圖1 病毒基因組DNA電泳檢測(cè)結(jié)果

圖2 病毒基因組RNA電泳結(jié)果

圖3 豬瘟PCR擴(kuò)增結(jié)果

圖4 豬圓環(huán)病毒2型PCR擴(kuò)增結(jié)果

2.3 35份病料檢測(cè)結(jié)果

送檢樣品中對(duì)PCV2、CSFV的檢測(cè)結(jié)果為：RT-PCR和PCR的產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示檢測(cè)樣品可擴(kuò)增出PCV2、CSFV的特異性片段分別為236bp、167bp。分別檢測(cè)35份樣品中有22份樣可擴(kuò)增出236bp特異性片段，有19份樣品可擴(kuò)增出167bp，說(shuō)明檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型 （PCV2）35份樣品中檢出陽(yáng)性22份，陽(yáng)性率為62.85%；豬瘟病毒 （CSFV）陽(yáng)性19份，陽(yáng)性率為54.28%，豬瘟病毒 （CSFV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）都呈陽(yáng)性者13份，混合感染率為37.14%，參見(jiàn)表1～2。

表1 CSFV和PCV2兩種病毒檢測(cè)結(jié)果

表2 CSFV和PCV2兩種病毒總感染

3 討論

從送檢結(jié)果可以看出： (1)送檢病豬中豬瘟陽(yáng)性率偏高，很多病豬受到豬瘟病毒的影響； （2）豬圓環(huán)2型帶毒率達(dá)到62.85%，這與曾中華于2004～2006年在漳州市豬圓環(huán)病毒流行病學(xué)調(diào)查中提到的，龍海市送檢組織樣品中PCV2陽(yáng)性率56.92%，豬場(chǎng)PCV2陽(yáng)性率52.17%相比較[10]，組織樣品陽(yáng)性率增加5.93%，已嚴(yán)重危害豬群健康； （3）兩種病毒混和感染較為嚴(yán)重。

4 綜合防治措施

豬瘟病毒 （CSFV）及豬圓環(huán)病毒2型 （PCV2）都會(huì)嚴(yán)重危害豬群健康，降低飼料報(bào)酬率，給養(yǎng)豬場(chǎng)造成很大經(jīng)濟(jì)損失，所以應(yīng)采取必要措施對(duì)這兩種病毒進(jìn)行防治，最終達(dá)到消滅傳染源，切斷傳播途徑，減少易感動(dòng)物，從而提高豬場(chǎng)生產(chǎn)效率。

（1）制定科學(xué)免疫程序，提高豬群抗病能力。疫苗接種是控制豬瘟和豬圓環(huán)病的有效方法，定期進(jìn)行抗體及病原的監(jiān)測(cè)，準(zhǔn)確了解豬群的健康狀態(tài)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并采取防范措施。

（2）加強(qiáng)豬群飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激因素刺激。嚴(yán)格引種檢疫，嚴(yán)禁引入隱性感染的豬群，清除帶毒母豬和種公豬，實(shí)行全進(jìn)全出制度；強(qiáng)化環(huán)境消毒滅源工作，及時(shí)對(duì)尸體、死胎、流產(chǎn)物和其他污染物、排泄物銷(xiāo)毀做無(wú)害化處理，減少環(huán)境載毒量，創(chuàng)造豬只適宜的生存環(huán)境。

（3）采取合理藥物預(yù)防，控制豬群繼發(fā)感染。豬圓環(huán)病是一種免疫抑制性疾病，在平時(shí)飼養(yǎng)管理中應(yīng)注重提高豬群免疫抵抗力，增加維生素、氨基酸、礦物質(zhì)的水平，注射或添加抗病毒的干擾素，黃芪多糖等，控制豬藍(lán)耳病病毒、豬鏈球菌、豬副嗜血桿菌、豬肺炎支原體等病原的繼發(fā)感染，最大限度地降低豬群的死亡率，減少經(jīng)濟(jì)損失。

[1]袁東波,湯德元,曾智勇,等．豬瘟病毒的分子結(jié)構(gòu)及其新型疫苗研究［J］.世界農(nóng)業(yè),2008(1)：59-62.

[2]夏迎春.我國(guó)豬瘟的流行現(xiàn)狀與防控措施建議[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè),2017(2):51.

[3]劉建波,張輝,劉長(zhǎng)明.豬圓環(huán)病毒的流行趨勢(shì)與防控對(duì)策[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展2014,35(1):111-115.

[4]葛猛,楊陽(yáng),蔣重合,等.豬圓環(huán)病毒2抗體水平的監(jiān)測(cè)及意義[J].湖南畜牧獸醫(yī),2009(3):8-10.

[5]萬(wàn)青山.四川部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型流行病學(xué)調(diào)查研究[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

[6]戴愛(ài)玲,劉建奎,李鴻文,等.閩西地區(qū)豬圓環(huán)病毒2性血清學(xué)調(diào)查及遺傳變異分析[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2016,36(6):896-901.

[7]盧寄軍,王祝榮,張進(jìn).湖南省豬圓環(huán)病毒2型流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2012,29(2):42-43.

[8]趙津.我國(guó)東南地區(qū)豬圓環(huán)病毒流行病學(xué)調(diào)查及PCV2、PEDV、TGEV和GAR復(fù)合PCR方法的建立與應(yīng)用[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

[9]石坤.上海地區(qū)PCV2分子流行病學(xué)及PCV2感染豬肺泡巨噬細(xì)胞的磷酸化蛋白組學(xué)研究[D].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2016.

[10]曾中華.漳州市豬圓環(huán)病毒病流行病學(xué)調(diào)查與凈化技術(shù)研究[D].揚(yáng)州大學(xué),2006.