中醫(yī)藥防治腦梗死血瘀證學(xué)術(shù)思想研究概述
——湖南中醫(yī)藥大學(xué)葛金文教授團(tuán)隊(duì)介紹

湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)科創(chuàng)建于上世紀(jì)80年代初，依托國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)學(xué)科、湖南省重點(diǎn)學(xué)科、湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、湖南省自然科學(xué)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，開展了腦梗死的中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)和臨床研究，以葛金文教授為首的研究團(tuán)隊(duì)系統(tǒng)闡述了腦梗死血瘀證的病因病機(jī)，科學(xué)解釋了腦梗死的現(xiàn)代病理實(shí)質(zhì)，并以中醫(yī)治法開展實(shí)證研究，在臨床上推廣應(yīng)用。

一、學(xué)術(shù)研究概況

腦梗死是嚴(yán)重威脅當(dāng)今人類生命健康的常發(fā)病、多發(fā)病，其致死率、致殘率均居于世界前列。中醫(yī)認(rèn)為該病屬“中風(fēng)”范疇，以本虛標(biāo)實(shí)為主，“風(fēng)、火、痰、瘀”諸邪交織不解，瘀血阻絡(luò)是腦梗死的基本病機(jī)，活血化瘀是其基本治療法則。研究團(tuán)隊(duì)在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，系統(tǒng)開展腦梗死血瘀證的病因病機(jī)研究，尋求腦梗死現(xiàn)代病理實(shí)質(zhì)的科學(xué)解釋，并以中醫(yī)治法開展實(shí)證研究。研究成果對(duì)深入理解腦梗死血瘀證的科學(xué)內(nèi)涵和中醫(yī)藥臨床應(yīng)用具有重要科學(xué)意義。

（一）研究思路

1.探索腦梗死的關(guān)鍵病因病機(jī)。根據(jù)中醫(yī)理論和臨床實(shí)踐，項(xiàng)目組提出元?dú)馐侨梭w機(jī)能活動(dòng)根本，血液的運(yùn)行有賴氣的和煦和推動(dòng)。虛妄勞作是損害傷氣的根本因素，氣虛無力推動(dòng)血液運(yùn)行，血流不暢，瘀滯腦脈，故氣虛是腦梗死血瘀證形成的核心病機(jī)；貫穿腦梗死發(fā)生發(fā)展的全過程；中氣虧虛，運(yùn)化失常，水濕停聚，化而為痰，痰瘀互結(jié)，淤阻腦絡(luò)，故痰凝血瘀是腦梗死發(fā)展的重要環(huán)節(jié)；痰瘀諸邪日久，化熱化火，痰瘀火熱，蘊(yùn)積不除，毒邪乃生，損傷腦髓，發(fā)為中風(fēng)。

2.闡明腦梗死血瘀證的現(xiàn)代生物學(xué)基礎(chǔ)。從血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）損傷、血管內(nèi)膜增生和動(dòng)脈粥樣硬化（AS）、血栓形成以及腦神經(jīng)細(xì)胞損傷四個(gè)維度系統(tǒng)研究腦梗死血瘀證的生物學(xué)基礎(chǔ)。提出VEC是腦梗死血瘀證的關(guān)鍵病理部位；血管內(nèi)膜增生、AS是腦梗死血瘀證的病理基礎(chǔ)；血栓形成是腦梗死血瘀證的病理前提；神經(jīng)細(xì)胞損傷是腦梗死血瘀證的病理核心。

圖1 腦梗死血瘀證研究思路

3.系統(tǒng)開展腦梗死血瘀證中醫(yī)藥防治的實(shí)證研究和臨床應(yīng)用。采用益氣活血化瘀、祛痰活血化瘀、解毒活血化瘀的代表方補(bǔ)陽還五湯、腦泰方和滋陰解毒祛瘀方防治腦梗死的臨床和基礎(chǔ)研究，從方證對(duì)應(yīng)的角度闡述了腦梗死氣虛血瘀、痰凝血瘀和瘀毒互結(jié)的病理生理實(shí)質(zhì)。

（二）研究方向及研究方法

1.研究方法創(chuàng)新

（1）率先提出并建立了一種新的研究中藥藥效（藥理）的半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究方法——中藥血漿藥理學(xué)方法（Medicinal Herb Research:Serum Pharmacological Method and Plasma Pharmacological Method.Biol Pharm Bull.2010,33(9):1459-1465）。

（2）率先建立了基于血管內(nèi)皮損傷的腦梗死大鼠模型，并用于相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究（A New Rat Model of Cerebral Infarction Based on the Injury of Vascular Endothelial Cell.Chin J Integr Med.2005,11(30:195-200）。

（3）建立基于雙氧水損傷血管內(nèi)膜的頸動(dòng)脈血栓家兔模型（以雙氧水損傷血管內(nèi)膜所致的家兔頸總動(dòng)脈血栓模型，中國病理生理雜志，1990,6(5):318-319）。

（4）提出了腦梗死細(xì)胞鐵轉(zhuǎn)運(yùn)工作模式并用于鐵超載損傷機(jī)制研究（NTE Treatment Results in Increased Fpn Expression in Hippocampus of Rats Subjected to Cerebral Ischemia.Molecular Medicine Reports.2015,11(6):4047-4052）。

（5）運(yùn)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)尋找中藥方劑治療腦梗死的特征性蛋白質(zhì)，利用生物信息學(xué)方法，結(jié)合KEGG網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫，研究腦梗死發(fā)生發(fā)展過程中特征性蛋白之間的相互作用，闡明相關(guān)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)機(jī)制。從基因組和蛋白（肽）組學(xué)層次研究血瘀證的實(shí)質(zhì)。

2.研究內(nèi)容突出“三結(jié)合”

（1）將中醫(yī)學(xué)的病因病機(jī)和現(xiàn)代病理生理研究相結(jié)合，豐富了中醫(yī)活血化瘀法的理論認(rèn)識(shí)，為中西醫(yī)結(jié)合的理論研究提供了新范式。

圖2 血清藥理學(xué)與血漿藥理學(xué)比較示意圖

圖3 鐵離子細(xì)胞內(nèi)外轉(zhuǎn)運(yùn)的工作模式

圖4 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法尋求腦梗死生物標(biāo)記物

1）系統(tǒng)地從循環(huán)VEC、VEC凋亡、VEC功能分子標(biāo)記物等研究了腦梗死時(shí)VEC損傷與功能改變與氣虛血瘀證的關(guān)系。

2）在系統(tǒng)評(píng)價(jià)腦泰方防治腦梗死臨床療效的基礎(chǔ)上，首次研究了祛痰活血中藥腦泰方對(duì)VEC死亡的保護(hù)作用及對(duì)VEC介導(dǎo)的凝血、纖溶、血管舒縮、血小板功能等的調(diào)節(jié)作用，表明保護(hù)和調(diào)節(jié)VEC功能是祛痰活血中藥防治腦梗死的重要途徑。

3）率先在國內(nèi)研究了腦泰方的腦缺血預(yù)處理樣作用，發(fā)現(xiàn)祛痰活血中藥腦泰方可以通過誘導(dǎo)內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)腺苷和一氧化氮的生成增加，從而發(fā)揮對(duì)腦缺血的腦保護(hù)作用。

4）以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-304為受試對(duì)象，以一定濃度的Glu、Ins、ox-LDL誘導(dǎo)體外血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，同時(shí)觀察滋陰活血解毒中藥對(duì)該細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，結(jié)果證明滋陰活血解毒中藥對(duì)受損的血管內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與提高內(nèi)皮細(xì)胞的纖溶功能、抑制與炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞粘附過程有關(guān)。

5）采用大鼠主動(dòng)脈球囊導(dǎo)管損傷后血管內(nèi)膜增生模型，研究了補(bǔ)陽還五湯及主要有效組分抗血管內(nèi)膜增生的作用，并從調(diào)控細(xì)胞周期及細(xì)胞外基質(zhì)揭示其作用機(jī)制。結(jié)果表明：補(bǔ)陽還五湯及其兩類有效組分生物堿和苷能顯著抑制血管內(nèi)膜增生，生物堿和苷可能為該方抑制血管內(nèi)膜過度增生的重要藥效物質(zhì)。其作用機(jī)制可能與抑制細(xì)胞周期的激活，阻抑VSMC增殖，抑制細(xì)胞外基質(zhì)的合成及其促進(jìn)其降解有關(guān)。

6）采用血小板衍生生長因子（PDGF）誘導(dǎo)的VSMC增殖模型和血漿藥理學(xué)方法，研究了補(bǔ)陽還五湯有效組分生物堿和苷對(duì)VSMC增殖的影響，并從細(xì)胞周期相關(guān)因子及ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究其抗VSMC增殖的機(jī)制。證明了抑制ERK信號(hào)途徑的激活，從而抑制了VSMC細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化和細(xì)胞增殖是補(bǔ)陽還五湯及其有效組分抗血管內(nèi)膜增生的主要機(jī)制。

（2）將經(jīng)典名方和臨床驗(yàn)方相結(jié)合，有利于中醫(yī)藥的合理利用，為臨床辨證施治、遣方用藥提供新指導(dǎo)。

1）采用腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ脱芯苛四X泰方和補(bǔ)陽還五湯及其有效組分抗腦缺血的作用，發(fā)現(xiàn)了腦泰方和補(bǔ)陽還五湯及其主要有效組分可減少腦梗死體積，改善腦缺血后神經(jīng)功能障礙，對(duì)腦缺血后腦組織具有保護(hù)作用。在此基礎(chǔ)上對(duì)其抗腦缺血的作用機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)的研究：①采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，從細(xì)胞凋亡研究了補(bǔ)陽還五湯兩類有效組分抗腦缺血后遲發(fā)性神經(jīng)元損傷的機(jī)制。結(jié)果證實(shí)了有效組分通過抑制缺血后腦組織Caspase-1、3、8的表達(dá)，從而對(duì)抗腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞凋亡，保護(hù)缺血腦組織。②采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，從腦缺血后炎癥反應(yīng)研究了補(bǔ)陽還五湯及兩類有效組分抗缺血性腦損傷的機(jī)制。證明了補(bǔ)陽還五湯及其有效組分生物堿、苷通過抑制IL-1β、IL-1R1、ICAM-1mRNA的表達(dá)，從而減少炎癥因子及炎癥介質(zhì)的表達(dá)，對(duì)缺血腦組織起保護(hù)作用。③率先從鐵超載這一腦缺血損傷的新機(jī)制研究了祛痰活血法抗腦缺血的作用。首次在國內(nèi)提出鐵超載這一腦缺血損傷的新機(jī)制，并用于中醫(yī)藥研究。從腦缺血后腦神經(jīng)元鐵跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制及益氣活血法干預(yù)著手，完成了腦缺血后不同時(shí)間不同腦區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鐵分布及TF、TFR、DMT1、FPn1、FLVCR、BCRP等鐵跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)研究，證明了PI3K/mTOR及NF-κB/p38MAPK信號(hào)途徑對(duì)腦缺血后鐵跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)及鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白具有調(diào)節(jié)作用，發(fā)現(xiàn)益氣活血中藥腦泰方通過減少TFR、DMT1的表達(dá)，抑制鐵的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，增加Fpn、FLVCR的表達(dá)，促進(jìn)胞內(nèi)鐵的外排，調(diào)節(jié)鐵代謝，發(fā)揮對(duì)腦組織的保護(hù)作用。④采用大鼠腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?，證明祛痰活血中藥腦泰方能通過提高HIF-1α表達(dá)，激活HIF-1α/VEGF通路，上調(diào)VEGF-Notch1信號(hào)通路，升高微血管CD34等環(huán)節(jié)促進(jìn)血管新生，改善腦缺血。

2）闡明了滋陰活血解毒法對(duì)急性腦缺血后凝血酶毒性損害的干預(yù)作用，其機(jī)制可能與滋陰活血解毒方抑制凝血酶及炎癥相關(guān)因子IL-1β、IL-8、TNF-α的表達(dá)有關(guān)。此外，解毒化瘀方能有效降低凝血酶受體和ERK1/2信號(hào)通路的表達(dá)，降低其毒性對(duì)細(xì)胞的損傷作用，從而達(dá)到保護(hù)腦組織的作用。

圖5 團(tuán)隊(duì)主要成員合影

（3）將實(shí)證研究和臨床應(yīng)用相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了基礎(chǔ)研究向臨床實(shí)踐轉(zhuǎn)化，為科研成果的轉(zhuǎn)化提供了新途徑。

自2005年來，項(xiàng)目研究成果在省內(nèi)外10多家醫(yī)院推廣應(yīng)用，十多年來，應(yīng)用該成果治療腦梗死病人近12 000例，療效顯著。項(xiàng)目在省內(nèi)外醫(yī)院推廣中產(chǎn)生了較好的經(jīng)濟(jì)效益，近三年新增經(jīng)濟(jì)效益600余萬元。項(xiàng)目成果應(yīng)用于臨床后，顯著提高了臨床療效，總有效率達(dá)91.3%，臨床治愈率達(dá)80.4%；在衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)方面，采用本項(xiàng)目成果治療能為每例患者節(jié)約醫(yī)療費(fèi)用約20%左右，減輕了患者的家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。成果的應(yīng)用間接培訓(xùn)臨床醫(yī)師100余人；孵化了各類重點(diǎn)?？啤W(xué)科10余個(gè)。

二、科研團(tuán)隊(duì)及科研支撐條件

以葛金文教授為學(xué)術(shù)帶頭人的科研團(tuán)隊(duì)共有32人，其中正高級(jí)職稱16人，副高級(jí)職稱8人，中級(jí)職稱8人；引進(jìn)海外高層次人才3人，享受國務(wù)院政府津貼專家2人，湖南省高層次衛(wèi)生人才“225”工程學(xué)科帶頭人3人，具有博士學(xué)位23人，碩士學(xué)位8人，博士學(xué)歷占71.8%；在讀博士研究生10名、碩士研究生26名。

團(tuán)隊(duì)所在研究方向是國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)學(xué)科中西醫(yī)結(jié)合臨床（心腦疾?。⒑鲜≈攸c(diǎn)學(xué)科中西醫(yī)結(jié)合的核心方向，依托國家中醫(yī)藥管理局心腦血管病重點(diǎn)?？?、分子病理三級(jí)實(shí)驗(yàn)室、中西醫(yī)結(jié)合心腦疾病防治湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、細(xì)胞生物與分子技術(shù)湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、中醫(yī)腦病湖南省臨床研究中心等平臺(tái)系統(tǒng)開展了中西醫(yī)結(jié)合防治腦梗死血瘀證的基礎(chǔ)和臨床研究。臨床研究中心擁有專業(yè)病床150張；實(shí)驗(yàn)室總面積1 600平方米，建有細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、形態(tài)功能三大技術(shù)平臺(tái)，儀器設(shè)備總值達(dá)1 500余萬元，包括流式細(xì)胞儀、活細(xì)胞工作站、分子相互作用儀、酶標(biāo)儀、實(shí)時(shí)定量PCR儀等細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究設(shè)備。

圖6 實(shí)驗(yàn)室各類技術(shù)平臺(tái)

三、主要科研成果

團(tuán)隊(duì)近五年承擔(dān)課題120項(xiàng)，其中：國家級(jí)科研項(xiàng)目34項(xiàng)，共獲得科研經(jīng)費(fèi)1 800余萬元。獲得國家發(fā)明專利9項(xiàng)，省部級(jí)科研成果獎(jiǎng)7項(xiàng)，其中省科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)1項(xiàng)、二等獎(jiǎng)3項(xiàng)。發(fā)表學(xué)術(shù)論文200余篇，其中SCI收錄20余篇。出版規(guī)劃教材和專著20余部。培養(yǎng)碩士研究生50余名，博士研究生20余名，博士后進(jìn)站10人，訪問學(xué)者2名；研究生參加科技競賽獲獎(jiǎng)22項(xiàng)，其中國家級(jí)二等獎(jiǎng)3項(xiàng)、省級(jí)一等獎(jiǎng)1項(xiàng)。