人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16與子癇前期發(fā)病的關(guān)系

葉耀群 鄭松柏 龍健靈 董福昌

[摘要] 目的 探討人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16（IFI16）與子癇前期（PE）的關(guān)系。 方法 選擇2015年6月～2017年3月廣州市番禺區(qū)何賢紀(jì)念醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我院”）收治的PE患者125例作為研究組，另外選擇同期于我院進(jìn)行體檢的健康孕婦53例作為對(duì)照組。分別采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法和蛋白免疫印跡法檢測(cè)孕婦血清中IFI16水平和胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)，并用Pearson相關(guān)分析PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白表達(dá)的相關(guān)性。 結(jié)果 研究組孕婦血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組（t=17.580、16.135，均P < 0.01）；與輕度PE患者相比，重度患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平均明顯升高（t=18.883、 14.845，均P < 0.01）；早發(fā)型和晚發(fā)型PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.360、0.840，均P > 0.05）；PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.725，P < 0.05）。 結(jié)論 PE患者血清中IFI16和胎盤(pán)中IFI16蛋白表達(dá)水平異常升高，并且與疾病發(fā)展密切相關(guān)，可以作為臨床診斷指標(biāo)，并且為治療PE提供新的靶點(diǎn)。

[關(guān)鍵詞] 人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16；子癇前期；血清；胎盤(pán)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R730.231 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）04（c）-0094-04

The relationship between human-induced protein 16 and preeclampsia

YE Yaoqun1 ZHEN Songbai2 LONG Jianling2 DONG Fucang2

1.Department of Obstetrics and Gynecology， Panyu District He Xian Memorial Hospital of Guangzhou， Guangdong Province， Guangzhou 511400， China； 2.Test Center Laboratory， Guangzhou Huayin Medical Testing Center Co. Ltd.， Guangdong Province， Guangzhou 511400， China

[Abstract] Objective To explore the relationship between human interferon-inducible protein 16 （IFI16） and the onset of preeclampsia （PE）. Methods From June 2015 to March 2017， 125 patients with PE in Panyu District He Xian Memorial Hospital of Guangzhou （"our hospital" for short） were selected as the research group. In addition， 53 cases of healthy pregnant women in our hospital during the same period were treated as control group. The levels of IFI16 in serum and IFI16 protein expression in the placenta of pregnant women were detected by enzyme-linkedimmunosorbent assay and Western blotting respectively. The correlation between the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of pregnant women with PE was analyzed by Pearson. Results The levels of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of research group were significantly higher than those in the control group （t=17.580， 16.135， all P < 0.01）. Compared with patients of mild PE， the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of patients with severe PE significantly increased （t=18.883， 14.845， all P < 0.01）. There were no statistically significant differences of the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta between early onset and late onset （t=0.360， 0.840， all P > 0.05）. The expression levels of IFI16 in the serum of PE patients were positively correlated with the expression level of IFI16 in the placenta （r=0.725， P < 0.05）. Conclusion The level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of patients with PE are abnormally elevated， they are closely related to the disease development， which can be used as a clinical diagnosis of indicator and provide a new target for the treatment of PE.

[Key words] Human interferon-inducible protein 16； Preeclampsia； Serum； Placenta

子癇前期（preeclampsia，PE）是妊娠期高血壓疾病中常見(jiàn)的類(lèi)型，目前全球的發(fā)病率為3%～12%，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和新生兒死亡的重要原因之一[1]。臨床主要表現(xiàn)為妊娠20周后出現(xiàn)高血壓、蛋白尿或多系統(tǒng)器官損傷、胎兒生長(zhǎng)受限等，重度PE危險(xiǎn)性更大，是導(dǎo)致我國(guó)孕產(chǎn)婦死亡的第二大原因[2-3]。雖然大部分子癇前期患者血壓在分娩后12周內(nèi)會(huì)恢復(fù)正常，但是造成母嬰不良結(jié)局，目前臨床上主要采用解痙、降壓、擴(kuò)容、利尿、糖皮質(zhì)激素、終止妊娠等綜合方法[4]。PE的發(fā)生為2個(gè)階段：第一階段，胎盤(pán)灌注量減少；第二階段，激活和/或損害孕婦的血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致周邊多個(gè)系統(tǒng)不同程度的損傷[5]。PE的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其病因尚未完全明確，其發(fā)病機(jī)制主要分為以下4個(gè)方面[6-7]：①血管內(nèi)皮功能受損；②免疫炎癥活動(dòng)過(guò)度；③抑制新生血管的形成；④胰島素抵抗。近年來(lái)，人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16（interferon-inducible protein 16，IFI16）在PE的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但是其與PE的關(guān)系研究并不多見(jiàn)[8-9]。本研究中通過(guò)檢測(cè)不同PE患者血清和胎盤(pán)中IFI16表達(dá)水平，觀察其與PE的關(guān)系，為臨床診斷和治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年6月～2017年3月廣州市番禺區(qū)何賢紀(jì)念醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我院”）收治的PE患者125例，作為研究組，所有患者的診斷及分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)均符合第八版《婦產(chǎn)科學(xué)》[10]，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均為單胎妊娠；②患者臨床資料完整，且依從性高；③經(jīng)患者及其家屬同意，并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心、肝、腎等重大臟器病變患者；②精神意識(shí)障礙患者；④入組前1個(gè)月服用抗炎和降壓藥物進(jìn)行治療。入組患者年齡25～35歲，平均（27.69±2.34）歲；孕齡32～39周，平均（36.04±2.14）周；嚴(yán)重程度：輕度75例，重度50例；疾病類(lèi)型：早發(fā)型（孕齡<34周）36例，晚發(fā)型（孕齡≥34周）89例。另外選擇同期于我院進(jìn)行體檢的健康孕婦53例作為對(duì)照組，年齡25～34歲，平均（27.53±2.28）歲；孕齡32～38周，平均（36.06±2.23）周。兩組孕婦的年齡和孕齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。所有研究過(guò)程均符合我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的相關(guān)規(guī)定。PE嚴(yán)重程度評(píng)價(jià)按照文獻(xiàn)[10]標(biāo)準(zhǔn)。輕度PE：妊娠20周后血壓水平不低于140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），24 h尿蛋白水平不低于0.3 g或隨機(jī)尿蛋白呈陽(yáng)性（+），同時(shí)伴隨出現(xiàn)上腹部疼痛和頭痛等癥狀。重度PE：妊娠20周后血壓水平不低于160/110 mmHg，24 h尿蛋白水平不低于2.0 g或隨機(jī)尿蛋白呈陽(yáng)性（++），血肌酐含量高于106 μmol/L，血小板低于100×109/L，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平升高，視覺(jué)障礙及持續(xù)性上腹部疼痛。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 IFI16試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo公司生產(chǎn)的VARIOSKAN FLASH Elx800型，鼠抗人IFI16單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司（工作濃度1︰200），兔二抗和PVDF膜由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供，蛋白裂解液試劑盒和ECL顯色液購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

1.2.2 血清IFI16水平檢測(cè) 所有孕婦均于入院次日清晨空腹抽取肘正中靜脈血3 mL，置于未涂肝素鈉的采血管中，室溫下靜置20 min，以3500 r/min的速度離心10 min，離心半徑為13 cm，分離上清液即得血清，置于-80℃冰箱中待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)孕婦血清中IFI16水平，嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.3 胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá) 孕婦分娩結(jié)束后，保留胎盤(pán)組織，采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)，使用蛋白裂解液試劑盒提取胎盤(pán)組織中的蛋白，應(yīng)用Bradford法檢測(cè)其濃度。取100 μg樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳蛋白后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，在4℃下5%脫脂奶粉封閉過(guò)夜，一抗為鼠抗人IFI16單克隆抗體（工作濃度1︰200），使用TBST緩沖液沖洗3次，然后在膜上加IRDye680LT標(biāo)記的羊抗鼠抗體（工作濃度1︰2000），37℃孵育2 h，加入ECL顯色液進(jìn)行顯色并曝光，使用美國(guó)LICOR公司Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)計(jì)算條帶的灰度值，內(nèi)參為β-actin，使用兩者的比值表示IFI16蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.4 觀察分析方法 比較健康孕婦和PE孕婦血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)情況，同時(shí)比較不同程度和不同類(lèi)型PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)情況，另外比較PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白表達(dá)的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Pearson系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組孕婦血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平比較

研究組孕婦血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表1。

2.2 不同程度PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平比較

與輕度PE患者相比，重度患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表2。

2.3 不同類(lèi)型PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平比較

早發(fā)型和晚發(fā)型PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表3。

2.4分析PE患者血清中IFI16水平與胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平的相關(guān)性

PE患者血清中IFI16水平與胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.725，P=0.027）。

3 討論

PE被認(rèn)為是母體系統(tǒng)性的炎性反應(yīng)，正常妊娠過(guò)程中，母胎界面發(fā)生變化從而適應(yīng)激活的炎癥免疫反應(yīng)，有利于建立并維持正常的妊娠，同樣，炎癥免疫反應(yīng)在PE的發(fā)病過(guò)程中起著重要作用[11]，孕婦出現(xiàn)PE后，免疫平衡系統(tǒng)被打破，炎性反應(yīng)增強(qiáng)，激活大量的炎癥細(xì)胞，并且黏附在血管上，產(chǎn)生嚴(yán)重的炎性反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，使得血管重鑄發(fā)生異常[12-13]。PE發(fā)病前期，內(nèi)細(xì)胞損傷是重要環(huán)節(jié)，但是內(nèi)細(xì)胞損傷的發(fā)病機(jī)制尚未明確，研究發(fā)現(xiàn)[14]，內(nèi)皮細(xì)胞中的IFI16參與抑制細(xì)胞分化、增殖及凋亡的過(guò)程，在外界因素的影響下，IFIF16從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外，血清中高濃度的IFI16水平參與內(nèi)皮細(xì)胞損傷，推測(cè)IFI16是血管性疾病的重要調(diào)控因子。

干擾素結(jié)合相應(yīng)的受體，誘導(dǎo)干擾素相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)、加速細(xì)胞凋亡及抑制細(xì)胞增殖的作用[15]。干擾素γ誘導(dǎo)蛋白200家族包括13個(gè)鼠成員蛋白，如p202a、p202b、p203、p204等，和5個(gè)人成員蛋白，如IFI16、AIM2、MNDA、PYHIN1，該家族蛋白主要對(duì)于各類(lèi)免疫反應(yīng)、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、細(xì)胞生長(zhǎng)及分化中發(fā)揮重要作用[16]。IFI16作為干擾素γ誘導(dǎo)蛋白200家族成員之一，基因編碼定位于1q21～23，主要出現(xiàn)在成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)，是細(xì)胞內(nèi)雙鏈DNA的免疫受體，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、衰老及血管形成等過(guò)程[17-18]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，研究組孕婦血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組（P < 0.05），推測(cè)可能是因?yàn)镻E患者處于高炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激狀態(tài)，導(dǎo)致血清IFI16及胎盤(pán)中IFI16蛋白的高表達(dá)[5]。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨著PE嚴(yán)重程度的加重，血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平顯著升高（P < 0.05）。這與朱敏等[6]的研究結(jié)果一致，IFI16的氨基端有一個(gè)DAPIN結(jié)構(gòu)域，由88個(gè)氨基酸組成，這個(gè)結(jié)構(gòu)域通過(guò)介導(dǎo)干擾素的應(yīng)答反應(yīng)、細(xì)胞凋亡及炎性信號(hào)通路蛋白的集合從而影響細(xì)胞凋亡及炎癥反應(yīng)的功能[19]，同時(shí)氨基端PYRIN結(jié)構(gòu)域與銜接蛋白ASC結(jié)合，形成活化的炎癥小體，激活caspase-1，上調(diào)白細(xì)胞介素-1β和白細(xì)胞介素-18，激活機(jī)體的免疫反應(yīng)[20]，另外IFI16結(jié)合細(xì)胞周期相關(guān)蛋白，調(diào)控信號(hào)通路，減慢細(xì)胞周期的發(fā)展，加速細(xì)胞衰老和凋亡，從而發(fā)揮細(xì)胞的生長(zhǎng)及周期調(diào)節(jié)作用[16]。早發(fā)型和晚發(fā)型PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），這可能與選擇病例的范圍及特點(diǎn)有段，或者是選擇樣本量較小導(dǎo)致的后期研究中需要擴(kuò)大樣本量和樣本選擇的范圍進(jìn)一步研究。另外，PE患者血清中IFI16水平及胎盤(pán)中IFI16蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān)（P < 0.05），可能是因?yàn)槭艿酵饨缫蛩氐挠绊?，?xì)胞壞死，胎盤(pán)中的IFI6蛋白表達(dá)水平升高，通過(guò)胎盤(pán)和血液的屏障，進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)[5]。

綜上所述，IFI16在PE患者的血清及胎盤(pán)中表達(dá)水平升高，并且與PE的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，為臨床上診斷PE提供新的指標(biāo)，同時(shí)為治療PE開(kāi)拓新的治療思路。

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（收稿日期：2018-01-18 本文編輯：任 念）