豬血蛋白酶解物對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用

胡 濱，李康林，吳 橋，柯 琴，鄧玉嬋，陳一資

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014）

隨著現(xiàn)代社會(huì)交往需求增加，酒精消費(fèi)量快速增加，酒精性肝損傷的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)，在我國(guó)已成為繼病毒性肝炎后的第二大肝病，嚴(yán)重危害著大眾身體健康。由于酒精性肝損傷是進(jìn)行性疾病，發(fā)展到晚期為肝硬化難以治愈。因此，研究預(yù)防和早期遏制酒精性肝損傷的有效方法顯得尤為重要[1-2]。目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療酒精性肝損傷除了戒酒、對(duì)癥治療外，臨床多采用激素類藥物進(jìn)行治療，但療效有限，而且藥物也存在潛在的毒副作用。因此，從食物中尋找具有保肝作用的活性成分，已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)之一[3-5]。

豬血是一種價(jià)格低廉，又可大量獲取的食品工業(yè)副產(chǎn)品，含有蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、酶和一些生理活性物質(zhì)；其蛋白質(zhì)含量達(dá)到18%左右，蛋白質(zhì)中含有人體所需的8 種必需氨基酸，是極具開發(fā)利用價(jià)值的優(yōu)質(zhì)蛋白資源。如今優(yōu)質(zhì)蛋白資源短缺，而我國(guó)作為世界養(yǎng)豬大國(guó)，有豐富的血資源，并且生豬定點(diǎn)屠宰的貫徹實(shí)施和屠宰加工企業(yè)向大型化的發(fā)展，使血液的大規(guī)模收集成為可能。因此，開發(fā)利用豬血蛋白資源受到了廣泛重視[6-7]。近年來，由于生物酶解技術(shù)的發(fā)展，利用蛋白酶水解豬血以提高其利用率已逐漸成為熱點(diǎn)。目前對(duì)豬血蛋白酶解產(chǎn)物的功能研究多集中在抗氧化[8]、降血脂[9]、輔助調(diào)節(jié)血壓[10]等方面，而有關(guān)其對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究鮮見報(bào)道。為此，本實(shí)驗(yàn)以雄性昆明種小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，通過建立急性酒精性肝損傷動(dòng)物模型，研究豬血蛋白酶解物對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用，為更廣泛利用豬血蛋白資源和開發(fā)抗酒精性肝損傷的功能食品提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、材料與試劑

實(shí)驗(yàn)專用雄性昆明種小鼠60 只，體質(zhì)量（20±2）g，小鼠專用生長(zhǎng)維持飼料，均由四川大學(xué)華西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK（川）-2013-026。

豬血蛋白酶解物（porcine blood hydrolysate，PBH）的制備：將新鮮豬血于40 ℃水浴條件下，加胰酶進(jìn)行攪拌酶解。酶解5 h后，將酶解液置沸水浴滅酶，冷卻后將酶解液離心，取上清液于試管中，經(jīng)過濾、濃縮、干燥后得到粉末狀產(chǎn)品。

超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）測(cè)試盒、谷胱甘肽-過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）測(cè)試盒、甘油三酯（triglyceride，TG）測(cè)試盒、還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙二醛（malonic dialdehyde，MDA）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α、白細(xì)胞介素-6（nterleukin-6，IL-6）測(cè)試盒 南京建成生物工程研究所；GSH原料藥（純度98%） 北京澳康生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

TE412-L電子天平 德國(guó)Sartorius公司；MicrOTOF-QⅡ型高分辨質(zhì)譜儀 德國(guó)Bruker公司；S-433D型全自動(dòng)氨基酸分析儀 德國(guó)賽卡姆公司；XHF-D型高速分散器 寧波新芝生物科技有限公司；UV-3200型紫外-可見分光光度計(jì) 上海美譜達(dá)儀器有限公司；St16r型冷凍離心機(jī)和Multiskan MK3型全自動(dòng)酶標(biāo)儀 賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；7020型全自動(dòng)生化分析儀 日本Hitachi株式會(huì)社；RM2135型半自動(dòng)切片機(jī) 德國(guó)Leica公司；NIS-Elements BR顯微攝像儀 日本Nikon株式會(huì)社。

1.3 方法

1.3.1 PBH分子質(zhì)量的測(cè)定

將一定質(zhì)量的PBH溶于甲醇后，采用電噴霧質(zhì)譜法方式自動(dòng)進(jìn)樣，以3 μL/min的流速檢測(cè)分子質(zhì)量。

1.3.2 小分子肽得率的測(cè)定

蛋白質(zhì)含量測(cè)定：按照GB 5009.5—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》，采用凱氏定氮法測(cè)定。游離氨基酸含量和氨基酸組成的測(cè)定：按照GB 5009.124—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測(cè)定》，采用全自動(dòng)氨基酸分析儀測(cè)定，色氨酸的測(cè)定采用堿水解法進(jìn)行。三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）可溶性蛋白含量測(cè)定：按照GB/T 22492—2008《大豆肽粉》和GB/T 22729—2008《海洋魚低聚肽粉》進(jìn)行，取PBH 2 g，加入10 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%的TCA溶液，混合均勻，靜置10 min，將樣品溶液4 000 r/min離心10 min，取全部上清液，采用凱氏定氮法測(cè)定上清液蛋白質(zhì)含量。小分子肽含量測(cè)定：按照GB/T 22492—2008和GB/T 22729—2008進(jìn)行，PBH經(jīng)過TCA溶液溶解處理后，離心分離出沉淀物，收集離心上清液；按照GB 5009.5—2016方法測(cè)定離心清液中TCA可溶性蛋白含量，離心清液中TCA可溶性蛋白含量減去游離氨基酸含量可得到樣品中小分子肽的含量，即小分子肽含量/（g/100 g）＝TCA可溶性蛋白質(zhì)含量/（g/100 g）-游離氨基酸含量/（g/100 g）。

1.3.3 動(dòng)物分組和給藥方法

按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）》中“對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用”檢驗(yàn)方法要求，采用造酒精性肝損傷模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將60 只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后隨機(jī)分為6 組，每組10 只，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、藥物對(duì)照組和PBH低、中、高劑量組。通常蛋白質(zhì)類補(bǔ)充劑的人體推薦劑量為10 g/d，按成人體質(zhì)量平均為60 kg設(shè)計(jì)灌胃劑量。以人體推薦劑量5、10、20 倍作為受試劑量，即3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組以0.83（Ⅰ組）、1.70（Ⅱ組）、3.33 g/kg mb（Ⅲ組）劑量每日灌胃PBH，藥物對(duì)照組用GSH以20 mg/kg mb灌胃，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組給予等體積蒸餾水，實(shí)驗(yàn)期30 d。實(shí)驗(yàn)至第31天，模型對(duì)照組、藥物對(duì)照組及PBH各劑量組一次灌胃給予50%的無水乙醇12 mL/kg mb，空白對(duì)照組給予蒸餾水，禁食16 h后各組小鼠摘除眼球取血，再采用頸椎脫臼法處死，取出肝臟，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。

1.3.4 血清和肝臟生化指標(biāo)的檢測(cè)

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）活力采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。肝臟MDA、GSH-Px、GSH、TG、TNF-α、IL-6水平按試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定。

1.3.5 肝組織病理組織學(xué)觀察

取部分肝組織，用體積分?jǐn)?shù)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織形態(tài)學(xué)變化。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Duncan’s法進(jìn)行單因素多重比較分析，數(shù)據(jù)以表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 PBH中氨基酸組成、游離氨基酸含量和分子質(zhì)量

表1 PBH中氨基酸組成和游離氨基酸含量Table 1 Compositions of amino acid and free amino acid in PBH g/100 g

由表1可知，PBH中必需氨基酸含量豐富，總量為34.6 g/100 g，而且還含有11.45 g/100 g的游離氨基酸。

由圖1可知，PBH是分子質(zhì)量集中在1 000 Da以下的多種小肽和氨基酸的混合物。由凱氏定氮法測(cè)得PBH中蛋白質(zhì)含量為91.25 g/100 g，TCA可溶性蛋白質(zhì)含量為89.85 g/100 g。由于高分子質(zhì)量蛋白質(zhì)在酸性條件容易被沉淀，低分子質(zhì)量蛋白質(zhì)水解物（包含小分子肽和游離氨基酸）可溶于TCA溶液。樣品經(jīng)過TCA溶液溶解處理后，離心分離出沉淀物，上清液中TCA可溶性蛋白含量減去游離氨基酸含量即可得到樣品中小分子肽的含量。因此，PBH中小肽含量占70%以上，各組分含量所占比例如圖2所示。

圖1 PBH分子質(zhì)量范圍Fig. 1 Molecular mass distribution of PBH

圖2 PBH中小分子肽、游離氨基酸、高分子質(zhì)量蛋白質(zhì)等含量比例Fig. 2 Proportions of small peptide, free amino acid and high-molecular-mass protein in PBH

2.2 PBH對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠精力充沛，活潑好動(dòng)，食欲旺盛；皮膚富有彈性，被毛光滑明亮，個(gè)體增質(zhì)量迅速，體質(zhì)量測(cè)定結(jié)果見表2。實(shí)驗(yàn)至第31天灌胃酒精后，模型對(duì)照組首先表現(xiàn)出興奮狀態(tài)，然后出現(xiàn)反應(yīng)遲緩、嗜睡、四肢癱軟，此狀態(tài)持續(xù)1 h左右。PBH各劑量組與模型對(duì)照組相比較，精神狀態(tài)明顯優(yōu)于模型對(duì)照組，中、高劑量組尤為明顯。

表2 各組小鼠平均體質(zhì)量的測(cè)定結(jié)果（n＝ 10）Table 2 Average body weight of mice (n= 10)g

由表2可知，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠的體質(zhì)量差異不顯著（P＞0.05），表明在本實(shí)驗(yàn)條件下PBH對(duì)小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育和健康狀況無不良影響。

2.3 PBH對(duì)小鼠血清ALT、AST活力的影響

表3 PBH對(duì)小鼠血清 ALT和AST活力的影響（n＝8）Table 3 Effect of PBH on ALT and AST activity in serum from mice (n= 8)

ALT和AST是主要存在于肝臟的轉(zhuǎn)氨酶，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生損傷如變性或壞死時(shí)，ALT和AST會(huì)逸出肝細(xì)胞使血中ALT、AST活力升高。因此，在臨床醫(yī)學(xué)上常用血中ALT、AST活力作為判斷肝臟是否受到損傷的重要指標(biāo)。由表3可知，模型對(duì)照組血清AST和ALT活力與藥物對(duì)照組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、空白對(duì)照組差異極顯著（P＜0.01），表明模型組肝細(xì)胞受到損傷，肝功能出現(xiàn)異常。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組AST和ALT活力與藥物對(duì)照組、空白對(duì)照組差異顯著（P＜0.05，P＜0.01），Ⅰ組與Ⅱ組、Ⅲ組差異顯著（P＜0.05），Ⅱ組與Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05）；這表明PHB各劑量組ALT和AST活力雖然高于藥物對(duì)照組，但顯著低于模型對(duì)照組，說明豬血經(jīng)過酶解后產(chǎn)生的PHB對(duì)維持肝細(xì)胞的完整性起到重要作用。而且隨著PHB灌胃劑量增加，小鼠血中ALT和AST活力逐漸下降，呈現(xiàn)一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。劉睿等[11]在研究人參低聚肽對(duì)急性酒精性肝損傷的作用時(shí)證實(shí)，通過人參低聚肽干預(yù)可以顯著降低大鼠血清ALT、AST活力；何慧等[12]研究靈芝肽對(duì)乙醇誘導(dǎo)肝損傷小鼠的保護(hù)作用時(shí)，也得出了類似結(jié)論。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與同類研究結(jié)果類似。

2.4 PBH對(duì)小鼠肝臟SOD、GSH-Px活力，MDA、GSH

和TG水平的影響

表4 PBH對(duì)小鼠肝臟SOD、GSH-Px活力，MDA、GSH和TG水平的影響（n＝8）Table 4 Effect of PBH on SOD and GSH-Px activities, MDA, GSH and TG level in liver from mice (n= 8)

肝臟是酒精代謝的重要器官，飲酒過量可使肝臟受到損傷，尤其對(duì)肝臟的抗氧化能力和脂肪代謝影響較大。SOD和GSH-Px是體內(nèi)重要是抗氧化酶，GSH能夠清除體內(nèi)自由基，MDA是體內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，它們的變化均可反映組織細(xì)胞過氧化損傷的程度。由表4可知，模型對(duì)照組肝臟SOD、GSH-Px活力，MDA、GSH和TG水平與藥物對(duì)照組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、空白對(duì)照組差異顯著（P＜0.05，P＜0.01），這進(jìn)一步表明模型對(duì)照組小鼠肝臟受到損傷，導(dǎo)致SOD、GSH-Px活力，GSH水平下降，MDA和TG水平上升，提示本實(shí)驗(yàn)造模成功；Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組SOD、GSH-Px活力，MDA、GSH和TG水平與藥物對(duì)照組、空白對(duì)照組差異顯著（P＜0.05，P＜0.01），Ⅰ組與Ⅱ組、Ⅲ組差異顯著（P＜0.05，P＜0.01），表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，灌胃不同劑量PHB能夠提高肝臟的抗氧化能力，改善肝臟的脂肪代謝。王雙玉等[13]在研究玉米肽對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，灌胃不同劑量玉米肽均能顯著提高肝臟GSH-Px活力，降低MDA、TG水平。本實(shí)驗(yàn)中Ⅱ組與Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05），表明蛋白質(zhì)類補(bǔ)充劑過量攝入不會(huì)增加機(jī)體的抗氧化能力。徐士勛等[14]在研究鱉甲寡肽抗小鼠急性酒精性肝損傷時(shí)也證實(shí)，鱉甲寡肽能夠使得肝組織SOD活力升高、MDA含量下降，但是高劑量組和低劑量組差異不顯著。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與同類研究類似。

2.5 PBH對(duì)小鼠肝臟TNF-α、IL-6水平的影響

表5 PBH對(duì)小鼠肝臟TNF-α和IL-6水平的影響（n＝8）Table 5 Effect of PBH on TNF-αand IL-6 level in liver from mice (n= 8)

TNF-α和IL-6作為重要的炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，在酒精性肝病的發(fā)生過程中被認(rèn)為是反映炎癥嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。由表5可知，模型對(duì)照組肝臟TNF-α和IL-6水平極顯著（P＜0.01）高于藥物對(duì)照組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、空白對(duì)照組，表明模型組肝細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組TNF-α和IL-6水平與藥物對(duì)照組、空白對(duì)照組差異顯著（P＜0.05，P＜0.01），Ⅰ組與Ⅱ組、Ⅲ組差異顯著（P＜0.05，P＜0.01），Ⅱ組與Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05）；這表明PHB對(duì)改善肝臟的炎癥反應(yīng)有明顯效果。孫夢(mèng)雯等[15]在研究腦腸肽對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用時(shí)證實(shí)，腦腸肽通過降低肝臟中TNF-α和IL-6水平，發(fā)揮抗炎抗氧化作用對(duì)酒精性肝損傷起保護(hù)作用。劉晨晨等[16]也認(rèn)為，鱈魚皮膠原蛋白肽通過降低肝臟中TNF-α水平對(duì)小鼠急性肝損傷起保護(hù)作用。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與同類研究類似。

2.6 PBH對(duì)小鼠肝臟的組織病理學(xué)影響

圖3 小鼠肝臟切片HE染色Fig. 3 HE staining of liver sections from mice

由圖3A可知，空白對(duì)照組肝小葉清晰，肝細(xì)胞索排列整齊，在中央靜脈周圍呈放射狀分布；中央靜脈無擴(kuò)張，胞漿內(nèi)無脂滴，無異常改變。由圖3B可知，模型對(duì)照組肝小葉界限不清，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，胞漿內(nèi)有大量脂滴出現(xiàn)，嚴(yán)重者脂滴互相融合，將細(xì)胞核擠向細(xì)胞一側(cè)，出現(xiàn)明顯的脂肪變性。

由圖3C可知，藥物對(duì)照組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和肝索排列基本接近正常，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴基本消失，偶見散在脂滴。由圖3D可知，實(shí)驗(yàn)Ⅰ組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本完整，胞漿內(nèi)有部分脂滴出現(xiàn)，但脂滴排列稀疏，脂肪變性程度明顯輕于模型對(duì)照組。

由圖3E可知，實(shí)驗(yàn)Ⅱ組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整，胞漿內(nèi)有散在脂滴出現(xiàn)，但脂肪變性程度明顯輕于實(shí)驗(yàn)Ⅰ組。由圖3F可知，實(shí)驗(yàn)Ⅲ組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整，胞漿內(nèi)有少量脂滴出現(xiàn)，脂肪變性程度輕于實(shí)驗(yàn)Ⅰ組。因此，PBH對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷有顯著的改善作用。蔡琦等[17]在研究蛹蟲草多肽對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷的作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，灌胃蟲草多肽可以明顯減輕肝細(xì)胞脂肪變性及壞死。李林格等[18]通過研究大鯢皮膠原蛋白肽對(duì)乙醇肝損傷時(shí)證實(shí)，小鼠灌胃大鯢皮膠原蛋白肽后肝細(xì)胞損傷得到改善。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與同類研究類似。

3 討 論

酒精性肝病已成為全球面臨的重要公共衛(wèi)生問題之一，多個(gè)國(guó)家都在致力于降低酒精的過量使用，以減少酒精性肝病的發(fā)病率。目前認(rèn)為酒精性肝病的發(fā)病機(jī)制與酒精及其代謝產(chǎn)物對(duì)肝臟的損傷密切相關(guān)，包括氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、內(nèi)毒素作用、免疫學(xué)、營(yíng)養(yǎng)和遺傳等因素，而氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)在酒精性肝損傷中的作用日益受到重視[19-20]。大量研究表明，急性酒精中毒會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞中的酶和細(xì)胞器受到損傷，使脂肪酸在線粒體內(nèi)的β-氧化產(chǎn)生障礙，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。而脂質(zhì)過氧化會(huì)不僅會(huì)使肝細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷，使血中AST、ALT活力升高，還會(huì)使甘油三酯在肝細(xì)胞中的代謝發(fā)生障礙，導(dǎo)致甘油三酯在肝臟聚集。肝臟在發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)時(shí)，TNF-α可通過直接細(xì)胞毒作用，引起肝細(xì)胞變性或壞死，也可與IL-6相互激發(fā)，引起級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)而加重肝損傷[21-22]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組小鼠肝組織SOD、GSH-Px活力和GSH水平顯著下降，MDA、TNF-α、IL-6水平顯著升高，表明小鼠在灌胃酒精后機(jī)體氧化應(yīng)激水平發(fā)生改變，引起了肝細(xì)胞損傷。而灌胃PBH劑量組顯著升高肝組織SOD、GSH-Px活力和GSH水平，降低MDA、TNF-α、IL-6水平，表明PBH能夠?qū)构辔妇凭笠鸬母渭?xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)肝細(xì)胞免受損傷。此外，模型組小鼠肝臟TG水平顯著上升，病理組織切片也顯示肝細(xì)胞胞漿有大量脂滴出現(xiàn)，發(fā)生明顯脂肪變性；且肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞，使得血中ALT、AST活力顯著上升。而PBH劑量組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，脂肪變性程度減輕，而且肝臟TG水平、血中ALT、AST活力明顯下降，表明PBH能夠調(diào)節(jié)肝脂代謝，降低肝臟的脂質(zhì)過氧化損傷，通過修復(fù)和維持肝細(xì)胞膜的完整性以降低血中ALT、AST活力。Wu Yuhong等[23]在研究玉米肽對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用時(shí)證實(shí)，玉米肽通過提高肝內(nèi)SOD、GSH-Px活力和GSH水平，降低TNF-α濃度，減輕肝臟過氧化損傷，以促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)而降低血中ALT、AST活力。Lin Bing等[24]在研究海洋膠原蛋白肽對(duì)酒精性肝損傷的作用時(shí)也認(rèn)為，海洋膠原蛋白肽能夠通過抗炎抗氧化途徑緩解酒精性肝損傷。

豬血蛋白具有一定空間結(jié)構(gòu)，當(dāng)酶對(duì)其水解時(shí)，肽鍵發(fā)生斷裂，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。一些被包埋的氨基酸殘基和氨基酸的側(cè)鏈基團(tuán)暴露出來，其中具有提供氫原子和金屬鰲合能力的基團(tuán)能直接參與自由基的淬滅，抑制脂質(zhì)過氧化發(fā)生，保護(hù)肝細(xì)胞[25]。因此PBH的氨基酸組成可能決定其對(duì)肝細(xì)胞損傷有保護(hù)作用。Wei等[26]認(rèn)為所有氨基酸都含有—NH2基團(tuán)，可以在不同體系中表現(xiàn)出抗氧化活性，對(duì)肝細(xì)胞損傷有輔助保護(hù)作用；Ramos等[25]研究發(fā)現(xiàn)組氨酸、苯丙氨酸、色氨酸等抗氧化活性較強(qiáng)，這些氨基酸能夠作為潛在的護(hù)肝補(bǔ)充劑使用。但還有研究認(rèn)為，蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物的功能是由其含有的小肽和氨基酸共同體現(xiàn)。Zhang Feng等[27]在研究玉米肽的功能時(shí)發(fā)現(xiàn)，玉米蛋白水解物中的多種小肽能夠直接發(fā)揮保肝作用，而且在水解物中其他氨基酸的協(xié)同作用下，其保肝活性得到增強(qiáng)。通常對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的肽都具有抗氧化活性，而且其中富含亮氨酸、賴氨酸、組氨酸、苯丙氨酸等氨基酸[28-29]。PBH的氨基酸組成中含有一定量的組氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸等氨基酸，這些氨基酸不僅在游離狀態(tài)就具有抗氧化保肝作用，而且由其所組成的肽還能發(fā)揮保肝作用，這樣使得PBH的保肝效果還可能進(jìn)一步提高。此外，PBH作為蛋白質(zhì)類補(bǔ)充劑，在參與肝組織的更新與修復(fù)方面也起了重要作用。

因此，可以認(rèn)為PBH對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用是由組成它的許多小肽和游離氨基酸共同形成。其機(jī)制可能是PBH能夠有效拮抗急性酒精性肝損傷所導(dǎo)致的抗氧化酶活性下降、GSH耗竭以及炎癥因子的產(chǎn)生，抑制自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體自由基清除防御體系及脂肪酸在細(xì)胞內(nèi)的代謝能力，促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)和再生。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)以小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究PBH對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用，實(shí)驗(yàn)按照我國(guó)衛(wèi)生部頒布的《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》中“對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用檢驗(yàn)方法”評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示PBH能夠減輕小鼠急性酒精性肝損傷程度，降低血清中ALT、AST活力，提高小鼠肝臟SOD、GSH-Px水平及GSH水平，增強(qiáng)肝臟脂質(zhì)代謝能力，降低受損肝組織中MDA、TNF-α、IL-6水平，減輕肝組織病變程度，說明PBH作為對(duì)酒精性肝損傷有保護(hù)作用的保健食品的開發(fā)具有很大前景。

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