按法對(duì)兔急性閉合性軟組織損傷影響的實(shí)驗(yàn)研究*

郭銀豐 王 睿 羅華送 任興昌 閆 濤 雷言坤 韓金生

浙江省杭州市中醫(yī)院 浙江 杭州 310007

對(duì)急性閉合性軟組織損傷實(shí)施推拿治療時(shí)少有即時(shí)實(shí)施手法者，而且大都運(yùn)用多個(gè)手法組合或成套手法，形成手法多樣、組合多樣的局面，每個(gè)手法的具體作用不明確，也無(wú)法確切說(shuō)明哪些手法、如何組合和如何把握手法的度才能更有效地治療軟組織損傷。而且推拿治療急性軟組織損傷的實(shí)驗(yàn)研究卻極少?；谏鲜霈F(xiàn)實(shí)，筆者認(rèn)為需研究單一手法的效用、優(yōu)勢(shì)后方可明確組合依據(jù)，形成更嚴(yán)密、規(guī)范的組合，以提高治療效果。實(shí)驗(yàn)介紹如下。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級(jí)中國(guó)長(zhǎng)耳兔100只，體重在2～2.5kg，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑及儀器：兔前列素E2（PGE2）ELISA試劑盒、兔五羥色胺（5-HT）ELISA試劑盒和兔β（β-EP）內(nèi)啡肽ELISA試劑盒（上海百沃科貿(mào)有限公司）；5804R型高速離心機(jī)（艾本德中國(guó)有限公司）；680型酶標(biāo)儀（美國(guó)伯樂(lè)公司）；電子天平MP120-1（上海第二天平儀器廠）。

2 方法

2.1 造模方法：參照周國(guó)林等[1]的方法略加改進(jìn)制備兔軟組織損傷模型。動(dòng)物由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，造模前先將中國(guó)長(zhǎng)耳兔適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)前24h用剪刀剪去兔右側(cè)大腿根部（肌肉豐厚處）外側(cè)毛，再涂以6%硫化鈉脫毛劑脫毛。將兔子麻醉后，左側(cè)在下，并將其固定，將一長(zhǎng)30.0cm、直徑3.0cm、內(nèi)壁光滑的管道下口對(duì)準(zhǔn)剪毛的部位，使其垂直，將一質(zhì)量250g、直徑2.5cm的打擊鐵錘置于管道上口，穩(wěn)定后讓鐵錘自由落下，打在兔子右側(cè)大腿根部外側(cè)肌肉豐厚處，避開腿骨。連續(xù)打擊2次，可見受打擊部位皮膚有細(xì)小出血點(diǎn)。每只動(dòng)物僅打擊右腿。數(shù)分鐘后手摸有明顯腫脹觸感及皮溫升高感者說(shuō)明造模成功，有合并局部皮膚破損或骨折者予以剔除。

2.2 動(dòng)物分組：將造模成功的100只中國(guó)長(zhǎng)耳兔隨機(jī)平均分為模型組、A組、B組、C組和D組5組，每組20只。再根據(jù)處死時(shí)間（即初次按壓10min后、第2天按壓10min后、第4天按壓10min后及第7天按壓10min后）分為1、2、3、4四個(gè)亞組；命名為模型組1，A1組、B1組、C1組、D1組5組，以此類推，每組5只。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法：造模成功后，立即對(duì)所有治療組實(shí)施不同強(qiáng)度當(dāng)量按壓。治療各組處死之前每天進(jìn)行1次按壓治療。模型組：不使用任何治療措施。A組：找準(zhǔn)打擊部位施以250g強(qiáng)度當(dāng)量按壓10min；B組：找準(zhǔn)打擊部位施以500g強(qiáng)度當(dāng)量按壓10min；C組：找準(zhǔn)打擊部位施以1000g強(qiáng)度當(dāng)量按壓10min；D組：找準(zhǔn)打擊部位施以2000g強(qiáng)度當(dāng)量按壓10min。造模完成后進(jìn)行10min的第1次按壓治療，按壓完畢后抽取耳緣靜脈血4m1左右，然后將所有第1亞組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死，并檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。第2天在對(duì)治療各組的2、3、4亞組于相應(yīng)時(shí)相進(jìn)行上訴按壓后抽取耳緣靜脈血4m1左右，然后處死所有第2亞組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。第4天在對(duì)治療各組的第3、第4亞組于相應(yīng)時(shí)相進(jìn)行上訴按壓后抽取耳緣靜脈血4m1左右，然后處死所有第3亞組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。第7天在對(duì)治療各組的第4亞組于相應(yīng)時(shí)相進(jìn)行上訴按壓后抽取耳緣靜脈血4m1左右，然后處死所有第4亞組動(dòng)物檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。

2.4 樣本采集：分述如下。

2.4.1 β-EP的檢測(cè)：血樣品的采集：造模成功后所有100只動(dòng)物取耳緣靜脈血4m1左右，作為治療前各組血樣。在動(dòng)物干預(yù)后處死前再次取耳緣靜脈血4m1左右，作為干預(yù)后各組血樣。血樣品處理流程：將所取的血樣靜置4小時(shí)。待凝固后以3500r/min轉(zhuǎn)速離心15分鐘。提取血清量≥600μ1，置于-20℃冷凍保存，集中進(jìn)行外周血清中β-EP指標(biāo)檢測(cè)。具體操作步驟按照試劑盒要求完成。

2.4.2 前列腺素E2的檢測(cè)：①剪取處死兔受打擊部位的中心且呈青紫色的肌肉組織；②用生理鹽水漂洗1分鐘，然后濾紙吸干備用，使用天平稱取100mg肌肉組織；③向每10mg肌肉組織加入生理鹽水0.5ml，置于勻漿器中緩慢而均勻地研研磨15min，使得勻漿液呈均勻一致懸濁液；④倒入試管中，在2500r/min轉(zhuǎn)速下離心15分鐘；⑤收集上部清液，置于-20℃冰箱中備用。用放免法測(cè)定前列腺素E2水平。具體操作步驟按照試劑盒要求完成。

2.4.3 5-HT檢測(cè)：方法同β-EP檢測(cè)方法。

3 結(jié)果

3.1 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔5-HT表達(dá)水平的影響：見表1。

3.2 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔PGE2表達(dá)水平的影響：見表2。

3.3 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔β-EP表達(dá)水平的影響：見表3。

表1 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔5-HT表達(dá)水平的影響（±s，ng/ml）

表1 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔5-HT表達(dá)水平的影響（±s，ng/ml）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

145.07±46.02 80.74±44.99 61.86±18.44 97.75±13.59 84.45±34.92模型組A組B組C組D組167.02±70.00 89.77±27.26*113.94±28.99 102.38±24.57*96.28±26.31*126.25±35.62 127.07±58.39 86.66±20.16 114.47±19.22 115.09±45.61 150.36±59.06 111.77±15.32 115.22±50.32 122.72±62.89 107.44±21.33

表2 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔PGE2表達(dá)水平的影響（±s，pg/ml）

表2 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔PGE2表達(dá)水平的影響（±s，pg/ml）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

模型組A組B組C組D組66.78±37.97 38.27±29.77 43.32±7.15 57.48±21.37 67.01±13.79 84.91±40.04 27.14±13.49*40.29±6.13*54.14±12.02 54.79±7.98*109.63±44.96 24.62±5.62*40.81±11.76*63.68±35.33*76.02±43.05 119.01±28.88 18.98±14.31*30.12±7.22*44.96±14.27*43.93±7.70*

表3 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔β-EP表達(dá)水平的影響（±s，ng/ml）

表3 不同強(qiáng)度按法對(duì)急性閉合性軟組織損傷兔β-EP表達(dá)水平的影響（±s，ng/ml）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

模型組A組B組C組D組13.27±2.12 9.38±1.43*7.04±2.26*5.27±1.38*3.97±0.70*9.01±3.67 7.57±2.88 6.22±1.53 6.22±2.63 8.07±2.56 10.19±4.39 9.04±2.12 4.56±1.42 8.03±1.69 7.06±1.75 8.12±2.97 7.56±1.61 7.60±3.19 5.07±9.77 6.26±1.14

4 討論

軟組織損傷屬中醫(yī)學(xué)中“傷筋”之范疇?！镀諠?jì)方·折傷門》云：“若因傷折內(nèi)動(dòng)經(jīng)絡(luò)，血行之道不得宣通。瘀積不散，為腫為痛?！庇纱丝梢姡瑩p傷的病機(jī)主要是氣滯血瘀，疼痛和腫脹是急性損傷主要的臨床表現(xiàn)。因此，必須“疏其血?dú)?，令其條達(dá)，而致和平”，而“按之則氣血散，故按之痛止”。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為急性軟組織損傷的病理變化表現(xiàn)為局部組織細(xì)胞壞死、毛細(xì)血管擴(kuò)張、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫、出血等。由于致痛物質(zhì)組織胺、5-羥色胺、緩激肽、K+、H+等，及創(chuàng)傷性水腫刺激了痛覺(jué)感受器，并傳入神經(jīng)中樞而引起疼痛，此時(shí)間致痛物質(zhì)濃度升高等導(dǎo)致骨骼肌和血管痙攣，形成疼痛—缺血—疼痛之惡性循環(huán)。本實(shí)驗(yàn)研究表明按法作用于損傷局部，可能通過(guò)降低5-羥色胺濃度對(duì)痛覺(jué)感受器的刺激，同時(shí)減輕了骨骼肌及血管痙攣，降低前列腺素E2含量抑制局部炎癥，從而緩解疼痛。按法在損傷初期降低β-EP釋放，可能是減少白細(xì)胞和免疫細(xì)胞在損傷部位的聚集造成的。也就是說(shuō)按法可能對(duì)減輕損傷機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)起到了作用。

本研究表明按法可以用于急性閉合性軟組織損傷的立刻治療，無(wú)需等24小時(shí)后。按法的取效機(jī)理可能是通過(guò)影響PGE2、β-EP、5-HT的體內(nèi)含量而對(duì)急性閉合性軟組織損傷起到治療作用。有部分?jǐn)?shù)據(jù)不盡人意，原因不確定，可能與具體操作、造模時(shí)損傷輕、樣本數(shù)少等因素有關(guān)。

5 參考文獻(xiàn)

[1]周國(guó)林,姚全勝,潘玉英.一種動(dòng)物軟組織損傷的實(shí)驗(yàn)方法[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),1991(5)：396-398.