頂空氣相色譜法測(cè)定丙酯原料藥中正丙醇的殘留量

符傳山，鐘振華，楊毅生

(1.海南華拓天涯制藥有限公司質(zhì)量部，海南 ?？?571159； 2.江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院/江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029)

棓丙酯(propyl gallate，PG)，為抗腦血栓藥，其化學(xué)名為3,4,5-三羥基苯甲酸丙酯，分子式為C10H12O5，為處方藥，非國(guó)家基本藥物目錄品種[1-4]。棓丙酯是由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院研發(fā)成功的抗腦血栓藥，1985年由吉林省紅光制藥廠首先生產(chǎn)，1987年閩東制藥廠引進(jìn)該品種，獲得批準(zhǔn)文號(hào)。棓丙酯的各類制劑主要用于預(yù)防和治療腦血栓、冠心病及血栓性深靜脈炎等。全國(guó)共6家生產(chǎn)企業(yè)獲得棓丙酯原料藥的批準(zhǔn)文號(hào)，目前在生產(chǎn)的僅有2家。根據(jù)上述2家企業(yè)提供的資料，棓丙酯原料藥主要制備工藝流程為：以沒食子酸、正丙醇為起始物料，在對(duì)甲苯磺酸(A企業(yè))或濃硫酸(B企業(yè))的催化作用下發(fā)生酯化反應(yīng)生成沒食子酸丙酯(見圖1)，再經(jīng)過(guò)蒸餾濃縮、溶解(純化水)、結(jié)晶及過(guò)濾得粗品，粗品經(jīng)溶解(純化水)、活性炭脫色、過(guò)濾、結(jié)晶、過(guò)濾及干燥得成品。該藥在合成過(guò)程中使用的溶劑只有正丙醇，同時(shí)棓丙酯原料藥在貯藏過(guò)程中發(fā)生降解也會(huì)產(chǎn)生正丙醇。《中華人民共和國(guó)藥典》殘留溶劑檢查法中規(guī)定正丙醇的限度為0.5%[5]。故本研究擬采用頂空氣相色譜法建立棓丙酯原料藥中正丙醇?xì)埩袅康臏y(cè)定方法，以期為該藥的質(zhì)量控制提供參考[6-10]。

1 材料

1.1 儀器

Clarus 680HS40氣相色譜，氫火焰離子化檢測(cè)器(flame ionization detector，F(xiàn)ID)，購(gòu)自珀金埃爾默企業(yè)管理上海有限公司；BP211D精密電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)。

1.2 藥品及試劑

N,N-二甲基甲酰胺(色譜純，純度為99.9%)，四氫呋喃(色譜純，純度為99.9%)，正丙醇(色譜純)；棓丙酯(A企業(yè)，批號(hào)：G6130020、G6150010和G6140030；B企業(yè)，批號(hào)：C002-140802、C002-140801M和C002-140802M)。

圖1 棓丙酯的合成路線Fig 1 Synthetic route of propyl gallate

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 內(nèi)標(biāo)溶液：精密稱取四氫呋喃100.56 mg，置于100 ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 對(duì)照品溶液：精密稱取正丙醇0.305 0 g，置于50 ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(正丙醇質(zhì)量濃度為6.100 0 mg/ml)。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.05、0.25、0.5、1.0、2.0及2.5 ml置于10 ml容量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 ml，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，得到0.030 5、0.152 5、0.305 0、0.610 0、1.220 0及1.525 0 mg/ml的系列質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液。

2.1.3 供試品溶液：精密稱取樣品1 g，置于10 ml容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 ml，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱為DB-624石英毛細(xì)管柱(30 m×0.53 mm，3.0 μm)；柱溫50 ℃保持6 min，以10 ℃/min升溫至200 ℃保持2 min；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；FID檢測(cè)器；FID溫度為300 ℃。載氣為氮?dú)?N2)；恒流流速5 ml/min；H2：30 ml/min；Air：300 ml/min；分流比4∶1。頂空進(jìn)樣，平衡時(shí)間：25 min；頂空瓶溫度：95 ℃。根據(jù)上述色譜條件，分別精密量取空白溶劑N,N-二甲基甲酰胺、對(duì)照品溶液及供試品溶液各5 ml，分別置于20 ml頂空瓶中，密塞，頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖[11-14]。結(jié)果表明，空白溶劑對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，內(nèi)標(biāo)峰與對(duì)照品峰分離度良好；峰對(duì)稱性良好，見圖2。

A. 空白溶劑；B.對(duì)照品溶液；C.供試品溶液A. blank solvent; B. reference solution; C. test solution

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取系列對(duì)照品溶液5 ml，置于20 ml頂空瓶中，頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)(X)，正丙醇峰面積(A)與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為Y=0.857 9X+0.004 1，R2=0.999 8。結(jié)果表明，正丙醇在質(zhì)量濃度0.030 5～1.525 0 mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，見圖3。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液5.0 ml置于50 ml容量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10 ml，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.610 0 mg/ml的對(duì)照品溶液。精密量取5 ml，置于20 ml頂空瓶中，密封，平行制備6份，頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。正丙醇峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為0.520 1、0.528 7、0.523 6、0.527 9、0.522 1及0.526 8，RSD=0.66%，符合《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)“通則”的要求。

圖3 線性回歸方程Fig 3 Regression equations

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品(批號(hào)：G6130020)適量，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，6份樣品平均含量為0.042%，RSD=0.9%。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品(批號(hào)：G6130020)1 g(正丙醇含量為0.042%)，共9份，精密稱定，置于10 ml容量瓶中，分別精密加入0.5、1.0及2.0 ml對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(正丙醇質(zhì)量濃度為6.100 0 mg/ml)，每個(gè)回收濃度點(diǎn)各3份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。加樣回收率(%)=(測(cè)得量-樣品含有量)/加入量×100%，試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery test

2.7 定量限與檢出限試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(正丙醇質(zhì)量濃度為6.100 0 mg/ml)1 ml，置于100 ml容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置于10 ml容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 ml，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml，置于20 ml頂空瓶中，頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果表明，定量限濃度為12.2 μg/ml，信噪比=10.3。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(正丙醇質(zhì)量濃度為6.100 0 mg/ml)1 ml，置于100 ml容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 ml，置于10 ml容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 ml，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml，置于20 ml頂空瓶中，頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果表明，定量限質(zhì)量濃度為6.1 μg/ml，信噪比為4.1。

2.8 含量測(cè)定結(jié)果

精密稱定樣品1 g，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備，頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，6批棓丙酯樣品均檢出正丙醇，見表2。

表2 正丙醇含量測(cè)定結(jié)果Tab 2 Determination results of propyl alcohol

3 討論

正丙醇在《中華人民共和國(guó)藥典》中被歸為第三類溶劑，其限度為不得超過(guò)0.5%。從樣品測(cè)定結(jié)果可以看出，2個(gè)生產(chǎn)企業(yè)6批棓丙酯樣品中正丙醇?xì)埩袅烤谙薅确秶鷥?nèi)。A企業(yè)3批樣品(2013—2015年)及B企業(yè)3批樣品(同一年份生產(chǎn))中正丙醇含量測(cè)定結(jié)果均較低，說(shuō)明這2家企業(yè)棓丙酯生產(chǎn)工藝及樣品在貯藏過(guò)程均較為穩(wěn)定。棓丙酯中的正丙醇不僅在生產(chǎn)過(guò)程中可能有殘留，而且在貯藏過(guò)程中可能發(fā)生降解生成正丙醇。故監(jiān)測(cè)棓丙酯中正丙醇的含量，有助于棓丙酯從生產(chǎn)到貯藏運(yùn)輸各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制。

本方法檢測(cè)棓丙酯中正丙醇?xì)埩袅康膶傩詮?qiáng)，準(zhǔn)確度高，檢出限較低(6.1 μg/ml)，是科學(xué)、靈敏并準(zhǔn)確的測(cè)定法。

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