標(biāo)本溶血對神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定結(jié)果的影響

楊麗珍 龍庭燕 黎宇

摘 要：目的 探討標(biāo)本不同程度溶血對神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）測定結(jié)果的影響。方法 選取我院80例健康體檢者的全血標(biāo)本作為觀察對象，采用德國羅氏診斷有限公司生產(chǎn)的Roche全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定同一標(biāo)本在溶血前及溶血后血清中NSE的濃度，比較各組之間的差異性。結(jié)果 輕度溶血組與重度溶血組的血清NSE濃度均高于對照組的血清NSE濃度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 不同程度的溶血標(biāo)本對血清NSE濃度的測定均有影響，檢測時(shí)應(yīng)盡量避免標(biāo)本溶血。

關(guān)鍵詞：溶血 NSE；電化學(xué)發(fā)光免疫分析法；測定；影響

中圖分類號：R446.11+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.08.066

文章編號：1006-1959（2018）08-0180-02

Effect of Hemolysis on the Determination of Neuron-specific Enolase

YANG Li-zhen，LONG Ting-yan，LI Yu

（Department of Blood Transfusion，Liuzhou Workers Hospital，Liuzhou 545005，Guangxi，China）

Abstract：Objective To investigate the effects of different levels of hemolysis on neuron specific enolase（NSE）.Methods The whole blood samples of 80 health examiners in our hospital were selected as the object of observation.The Roche full automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer produced by the German Roche Diagnostics Ltd was used to determine the concentration of NSE in the same specimen before and after hemolysis and to compare the differences between the groups.Results The serum NSE concentration in the mild hemolysis group and the severe hemolytic group was higher than that in the control group （NSE），and the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion Different degrees of hemolysis specimens have an effect on the determination of serum NSE concentration，and hemolysis should be avoided when testing.

Key words：Hemolytic NSE；Electrochemiluminescence immunoassay；Determination；Effect

神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞內(nèi)特有的一種酸性蛋白酶，可作為神經(jīng)細(xì)胞損害的標(biāo)志物，具有高特異性和高敏感性的特點(diǎn)[1，2]。常應(yīng)用于神經(jīng)母細(xì)胞瘤、小細(xì)胞肺癌、嗜鉻細(xì)胞瘤、新生兒缺氧缺血性腦病等疾病的診斷、病情監(jiān)測、療效評估和預(yù)后觀察等[3]。在日常的檢驗(yàn)工作中，有時(shí)會出現(xiàn)血清NSE測定結(jié)果與患者臨床表現(xiàn)不符的情況，究其原因可發(fā)現(xiàn)這些標(biāo)本都發(fā)生了不同程度的溶血，而標(biāo)本溶血是否會對血清NSE檢測造成影響，本文針對此問題做次實(shí)驗(yàn)，意在觀察溶血標(biāo)本對血清NSE測定結(jié)果的影響狀況。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2017年8月～2017年10月廣西柳州市工人醫(yī)院健康體檢者80例的全血標(biāo)本作為研究對象。其中男性50例，女性30例，年齡20～40歲，平均年齡（29.64±8.71）歲，要求體檢者各項(xiàng)身體指標(biāo)基本正常，無相關(guān)腦病史，無相關(guān)藥物服用史，且標(biāo)本無溶血、脂血、黃疸等異常情況。

1.2標(biāo)本溶血程度分級 根據(jù)肉眼觀察標(biāo)本溶血程度及血紅蛋白濃度分為三組，輕度溶血組（Hb 0～10 g/L），中度溶血組（Hb 11～20 g/L），重度溶血組（Hb 21～30 g/L），因?yàn)槿藶橹圃烊苎?，溶血程度較難控制，故只設(shè)置輕度溶血組和重度溶血組。

1.3儀器與試劑 采用德國羅氏診斷有限公司生產(chǎn)的Roche MODULAR E601及NSE測定配套試劑盒，日本希森美康公司生產(chǎn)的SysmexXN-3000全自動血液分析儀及其配套試劑盒，湖南湘儀L500低速離心機(jī)。

1.4方法 檢測方法采用電化學(xué)發(fā)光免疫法（ECLIA），該方法原理是雙抗體夾心法。其實(shí)驗(yàn)方法為，選取符合實(shí)驗(yàn)要求的體檢者的血液標(biāo)本，立即以3000 r/min離心10 min分離血清，用Roche MODULAR E601測定其血清NSE濃度并記錄檢測數(shù)據(jù)，將其設(shè)為對照組。然后用帶針頭的注射器輕微抽打所有血液標(biāo)本1～2次，使其均發(fā)生輕微溶血，采用SysmexXN-3000全自動血液分析儀測定其血紅蛋白濃度，控制血紅蛋白濃度在0～10 g/L，以3000 r/min離心10 min分離血清，使用Roche MODULAR E601測定其血清NSE濃度并記錄檢測數(shù)據(jù)，將其設(shè)為輕度溶血組。再用帶針頭的注射器用力抽打所有血液標(biāo)本10次以上，使其溶血程度明顯增大，采用SysmexXN-3000全自動血液分析儀測定其血紅蛋白濃度，控制血紅蛋白濃度在20 g/L以上，以3000 r/min離心10 min分離血清，使用Roche MODULAR E601測定其血清NSE濃度并記錄檢測數(shù)據(jù)，將其設(shè)為重度溶血組。最后將兩組溶血標(biāo)本的數(shù)據(jù)與對照組用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較。以上檢驗(yàn)操作均按廠家提供的儀器及試劑說明書和檢驗(yàn)科制訂的SOP進(jìn)行，要求室內(nèi)質(zhì)控在控，試劑無過期現(xiàn)象。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理實(shí)驗(yàn)測定數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

輕度溶血組與重度溶血組的血清NSE濃度均高于對照組的血清NSE濃度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3討論

溶血是如何導(dǎo)致NSE的檢測結(jié)果升高，其分析原因?yàn)椋杭t細(xì)胞中存在大量的NSE，其含量是血含量濃度的817倍[4]。當(dāng)標(biāo)本發(fā)生溶血時(shí)，紅細(xì)胞膜遭到破壞，其胞質(zhì)中含量較高的的NSE便釋放到血清中，勢必引起血清中NSE濃度增高[5，6]。本次試驗(yàn)采用電化學(xué)發(fā)光免疫法，其基本原理是雙抗體夾心法，即生物素化人抗NSE的單克隆抗體和釕標(biāo)記的抗NSE的單克隆抗體與標(biāo)本混勻，形成夾心復(fù)合物，再加入鏈霉親和素包被的微粒，通過生物素和親和素的特異性作用將夾心復(fù)合物結(jié)合到磁性微粒上，與檢測反應(yīng)使用的堿性溶液中的三丙胺（TPA）反應(yīng)，該反應(yīng)中由于磁性微粒被電極下的磁鐵吸附而留在電極板表面，在加壓的陽性電場條件下，復(fù)合物與三丙胺發(fā)生氧化還原反應(yīng)，在該反應(yīng)中NHS和TPA兩種電化學(xué)物質(zhì)可同時(shí)失去電子發(fā)生氧化反應(yīng)，在此過程中發(fā)射光子，檢測免疫反應(yīng)體系中的光量子數(shù)，即可得知待檢物的濃度。當(dāng)標(biāo)本發(fā)生溶血時(shí)，紅細(xì)胞釋放至血清中的NSE也會與生物素化人抗NSE的單克隆抗體和釕標(biāo)記的抗NSE的單克隆抗體結(jié)合生成免疫復(fù)合物，參與到免疫反應(yīng)體系中，導(dǎo)致儀器檢測到的NSE含量比血清實(shí)際的NSE含量明顯增高。

通過本次研究，輕度溶血組與重度溶血組的NSE測定結(jié)果分別與對照組NSE測定結(jié)果相比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。由此可見，標(biāo)本溶血會對NSE測定造成影響，這種影響會隨著標(biāo)本溶血程度的增大而使NSE的檢測結(jié)果升高。

綜上所述，標(biāo)本溶血對NSE測定有影響，尤其是重度溶血標(biāo)本，溶血會使血清NSE濃度升高，因此應(yīng)盡量避免使用標(biāo)本溶血做檢測。如何才能有效控制溶血標(biāo)本的發(fā)生，這就需要從標(biāo)本流轉(zhuǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)上注意，對于護(hù)理人員，應(yīng)規(guī)范采血，正確執(zhí)行采血流程操作。對于送檢人員，在運(yùn)送標(biāo)本的過程中應(yīng)避免搖晃和碰撞，及時(shí)送檢。對于檢驗(yàn)工作人員，應(yīng)拒絕接收溶血標(biāo)本，嚴(yán)格遵守檢驗(yàn)操作規(guī)程。

參考文獻(xiàn)：

[1]王廣斌，季泰令.S100B蛋白、NSE作為腦損傷標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J].中國老年學(xué)，2011，31（5）：890-892.

[2]王琨，李彥敏.NSE、S-100蛋白與腦損傷關(guān)系的研究[J].腦與神經(jīng)疾病雜志，2009，17（5）：396-398.

[3]陳海斌，梁業(yè)賓，黃慧嫦，等.標(biāo)本溶血對電化學(xué)發(fā)光免疫法結(jié)果的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，27（8）：651-653.

[4]吳坤芳，蔡玉玲.紅細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測[J].中國實(shí)驗(yàn)學(xué)診斷，2015，19（10）：1762-1763.

[5]龍躍兵，朱偉斌，章美燕.溶血對生化檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的影響及校正方法的探討[J].廣東醫(yī)學(xué)，2011，32（12）：1562-1563.

[6]武春梅，李玲，徐麗萍，等.溶血和標(biāo)本保存條件對血清NSE檢驗(yàn)結(jié)果的影響[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（19）：2591-2593.

收稿日期：2017-12-13；修回日期：2017-12-26

編輯/高章利