• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    缺血前預(yù)處理改善腦缺血后再灌注損傷預(yù)后的效果研究

    2018-06-16 02:30:00謝凱勝盤慶飛黃賢李圣海何秀麗
    中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2018年12期
    關(guān)鍵詞:損傷腦組織預(yù)處理

    謝凱勝 盤慶飛 黃賢 李圣海 何秀麗

    [摘要]目的 探討缺血前預(yù)處理改善腦缺血后再灌注損傷預(yù)后的效果。方法 隨機(jī)選取75只健康雄性小鼠分為3組,包括假手術(shù)組(15只)、對(duì)照組(28只)、觀察組(32只),其中假手術(shù)組小鼠僅結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈,對(duì)照組、觀察組小鼠均以線栓法建立小鼠腦缺血模型,并在小鼠缺血2 h后進(jìn)行再灌注24 h,對(duì)照組灌注前給予生理鹽水處理,觀察組使用頭孢曲松處理,觀察三組小鼠腦組織梗死的容積、神經(jīng)功能缺陷評(píng)分以及組織內(nèi)白介素1β(IL-1β)炎性因子的水平情況。結(jié)果 觀察組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組,皮層腦內(nèi)IL-1β水平低于對(duì)照組,腦梗死容積小于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩組紋狀體炎性因子水平及梗死容積比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);假手術(shù)組神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組與觀察組,IL-1β水平低于對(duì)照組與觀察組,梗死容積小于對(duì)照組與觀察組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 臨床在腦缺血再灌注前使用頭孢曲松進(jìn)行預(yù)處理,能夠降低腦內(nèi)IL-1β炎性因子的表達(dá)、分泌,有效減少腦梗死容積,減輕腦神經(jīng)功能損失。

    [關(guān)鍵詞]預(yù)處理;損傷;缺血再灌注;腦組織

    [中圖分類號(hào)] R743 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721(2018)4(c)-0116-03

    Effect study of ischemic pretreatment on improving the prognosis of reperfusion injury after cerebral ischemia

    XIE Kai-sheng1 PAN Qing-fei1 HUANG Xian1 LI Sheng-hai1 HE Xiu-li2

    1.Department of Emergency,Shiyan People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province,Shenzhen 518100,China;2.Department of Emergency,Luohu People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province,Shenzhen 518100,China

    [Abstract]Objective To investigate the effect of ischemic pretreatment on improving the prognosis of cerebral ischemia-reperfusion injury.Methods A total of 75 healthy male mice were randomly divided into 3 groups:sham operation group (n=15),control group (n=28) and observation group (n=32).In the sham operation group,only right common carotid artery was ligated.In the observation and control groups,the cerebral ischemic model in mice was established by suture method.The mice were reperfused 24 hours after ischemia for 2 hours.In the control group,saline was used before perfusion,while in the observation group,ceftriaxone was applied.The infarct volume,neurological deficit scores and interleukin-1β (IL-1β) inflammatory cytokines levels in the three groups of mice were observed.Results The score of neurological function in the observation group was higher than that in the control group.The level of IL-1β in the cortex was lower than that in the control group.The volume of cerebral infarction was smaller than that in the control group,the difference was statistically significant (P<0.05).The levels of inflammatory cytokines and infarcted volume of corpus striatum were not displayed statistical differences (P>0.05).The scores of neurological function in the sham operation group were higher than those in control group and observation group.The IL-1β level and infarct volume in the sham operation group were also lower than those in the other two groups,,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion Application of ceftriaxone for pretreatment before cerebral ischemia-reperfusion can decrease the expression and secretion of IL-1β inflammatory factor,effectively reduce the volume of cerebral infarction,and alleviate neurological deficit.

    [Key words]Pretreatment;Injury;Ischemia-reperfusion;Cerebral tissue

    腦是人體中重要的功能性器官之一,也是最為耗氧的器官,但近幾年腦卒中、腦梗死等疾病發(fā)病率明顯上升,患者發(fā)病時(shí)腦部均會(huì)有不同程度的缺血,研究提示腦缺血是造成患者神經(jīng)功能障礙、死亡的主要原因[1]。為有效減輕腦疾病患者的腦缺血,臨床需及時(shí)恢復(fù)缺血區(qū)域的血液灌注,但大量研究提示缺血再灌注會(huì)對(duì)患者腦組織造成二次損傷,不僅無法起到良好的治療效果,同時(shí)還會(huì)導(dǎo)致腦細(xì)胞死亡,危及患者的生命安全[2]。有學(xué)者提出對(duì)腦缺血患者再灌注前可行預(yù)處理,以減輕腦組織損失,避免腦梗死的面積擴(kuò)大[3]。本研究觀察頭孢曲松預(yù)處理小鼠的神經(jīng)損傷情況,旨在為后期臨床腦缺血再灌注的治療提供依據(jù),現(xiàn)報(bào)道如下。

    1資料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    本研究所選取的動(dòng)物均購于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,體重(192.25±19.12)g,合格證號(hào):SCXK(軍)2016-0001。

    1.2主要儀器與試劑

    兔抗大鼠 OX-42(北京泰澤瑞達(dá)科技有限公司)、兔抗大鼠 IL-1β[派普泰克生物科技(蘇州)有限公司]、兔抗大鼠 GFAP(上海谷研科技有限公司)、頭孢曲松(南昌立健藥業(yè)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H20023084)、小鼠抗大鼠 NeuN(Chemicon)、IL-1βELISA 試劑盒(上海吉泰依科賽生物科技有限公司)。

    1.3實(shí)驗(yàn)分組及處理

    合格健康實(shí)驗(yàn)小鼠30只,體重221~254 g,術(shù)前所有小鼠禁食12 h。所有小鼠稱重后,以10%水合醛3.5 ml/kg于小鼠腹腔注射,麻醉后在小鼠頸正中處做切口,游離頸內(nèi)外動(dòng)脈及右側(cè)頸總動(dòng)脈,在充分暴露血管后將頸總動(dòng)脈、外動(dòng)脈近心端結(jié)扎,于總動(dòng)脈分叉下方做小切口,將尼龍栓線蘸取適量肝素鈉后置入,并緩慢推進(jìn),深度在19~20 mm時(shí)停止(假手術(shù)組推進(jìn)深度為9 mm),將頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端扎緊,建立腦缺血模型。后在對(duì)照組及觀察組小鼠右側(cè)股靜脈做切口置管,連接微量注射泵,在栓塞2 h后拔出尼龍栓線恢復(fù)再灌注24 h,此時(shí)對(duì)照組泵入生理鹽水,觀察組泵入頭孢曲松,所有小鼠術(shù)中用保溫毯維持體溫在38℃左右。

    1.4 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

    1.4.1觀察指標(biāo) 觀察三組小鼠腦組織梗死容積、神經(jīng)功能缺陷評(píng)分以及腦內(nèi)IL-1β炎性因子的水平情況。梗死容積=(對(duì)側(cè)腦組織-患側(cè)正常腦組織)/對(duì)側(cè)腦組織×100%;神經(jīng)功能缺陷評(píng)分:小鼠再灌注24 h后,將其提起觀察小鼠動(dòng)作,小鼠四爪屈伸無變化計(jì)0分,對(duì)側(cè)前爪伸展不完全計(jì)1分,小鼠向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈計(jì)2分,小鼠向?qū)?cè)傾倒計(jì)3分,小鼠無法行走、意識(shí)喪失計(jì)4分,小鼠死亡計(jì)5分。

    1.4.2檢測(cè)方法 腦梗死容積測(cè)定:再灌注24 h后,先對(duì)小鼠動(dòng)作進(jìn)行觀察,后麻醉小鼠斷頭處死,打開其顱骨蓋,剝?nèi)ツX膜,取出整個(gè)大腦,以PBS溶液清洗后立即置于-20℃冷凍10 min。將冷凍后的腦組沿冠狀面切成厚度2.0 mm 左右的薄片6張,將切片置于2% TTC 溶液中,并在37℃水浴下避光孵育 10~20 min,最后以4%多聚甲醛固定腦切片,時(shí)間1~3 d,將切片用數(shù)碼相機(jī)拍下腦梗死圖片后,以圖像分析軟件計(jì)算小鼠的梗死容積。

    小鼠IL-1β檢測(cè):本次檢測(cè)采用雙抗體夾心ELISA 法,于酶標(biāo)板上加入抗小鼠 IL-1β單抗,將標(biāo)準(zhǔn)品、樣品中IL-1β與單抗結(jié)合,并加入生物素化抗大鼠 IL-1β,以于酶標(biāo)板上形成免疫復(fù)合物,將Streptavidin(辣根過氧化物酶標(biāo)記)與生物素結(jié)合,最后加入底物液,在顯藍(lán)色后加終止液硫酸,觀察酶標(biāo)儀450 nm 處測(cè)吸光值,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IL-1β濃度,取平均值。

    1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用t檢驗(yàn),三組比較采用F檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1三組小鼠腦梗死容積的比較

    假手術(shù)組小鼠未出現(xiàn)腦梗死情況,觀察組皮層梗死容積小于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩組紋狀體梗死容積比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),觀察組梗死總面積顯著小于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1、圖1)。

    表1 三組小鼠腦梗死容積的比較(%,x±s)

    A:假手術(shù)組,腦梗死總?cè)莘e為0.00%;B:對(duì)照組,腦梗死總?cè)莘e(38.15±1.60)%;C:觀察組,腦梗死總?cè)莘e(22.40±1.75)%

    圖1 小鼠腦梗死情況

    2.2三組小鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分的比較

    對(duì)照組神經(jīng)功能缺陷評(píng)分為(8.31±0.26)分,觀察組為(12.54±0.32)分,假手術(shù)組為(17.63±1.20)分,假手術(shù)組小鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分高于其他兩組,同時(shí)觀察組小鼠的評(píng)分高于對(duì)照組(F=1239.13,P<0.05)。

    2.3三組小鼠腦內(nèi)IL-1β炎性因子水平的比較

    假手術(shù)組小鼠腦內(nèi)IL-1β水平低于其他兩組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);觀察組皮層IL-1β水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

    表2 三組小鼠腦內(nèi)IL-1β炎性因子水平的比較(pg/ml,x±s)

    與假手術(shù)組比較,*P<0.05;與對(duì)照組比較,#P<0.05

    3討論

    臨床對(duì)于腦缺血患者治療重點(diǎn)在于及時(shí)有效恢復(fù)缺血區(qū)域的血液灌注,但近幾年隨著臨床深入研究,發(fā)現(xiàn)缺血再灌注時(shí)會(huì)對(duì)患者的腦組織造成二次損害,導(dǎo)致腦細(xì)胞死亡,原因?yàn)樵俟嘧r(shí)腦細(xì)胞腫脹、破裂、壞死,而壞死腦細(xì)胞會(huì)刺激腦組織,造成大量炎性分子分泌,隨著炎性因子浸潤(rùn)組織,引發(fā)炎癥反應(yīng),誘發(fā)腦梗死、造成神經(jīng)元損傷,進(jìn)而危及患者的生命安全[4-6]。

    缺血再灌注損傷炎癥反應(yīng)是引發(fā)損傷的主要原因之一,因此如何有效避免再灌注時(shí)腦部炎性細(xì)胞激活、抑制炎性因子釋放,是減輕缺血再灌注損傷的關(guān)鍵,有學(xué)者提出在再灌注前使用藥物進(jìn)行預(yù)處理,可以抑制灌注時(shí)炎性因子水平上升,減輕腦損傷[7]。頭孢曲松是臨床常用的抗菌藥物,但研究表明此藥不僅有滅菌、消炎效果,還能發(fā)揮一定的神經(jīng)保護(hù)作用,故有學(xué)者提出將其用于預(yù)處理,以減輕腦損傷[8-9]。本研究結(jié)果顯示觀察組小鼠的神經(jīng)功能缺陷評(píng)分高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示頭孢曲松能起到一定的神經(jīng)保護(hù)作用。這可能是由于此藥能促使細(xì)胞內(nèi)谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體RNA(信使mRNA)表達(dá),增加轉(zhuǎn)運(yùn)體含量,降低腦內(nèi)谷氨酸水平,從而減少神經(jīng)毒性,達(dá)到減輕腦組織損傷的目的[10-11]。研究提示谷氨酸是人體內(nèi)神經(jīng)興奮性遞質(zhì),大量谷氨酸釋放聚集,可導(dǎo)致神經(jīng)興奮性毒性,造成細(xì)胞腫脹誘發(fā)腦部病變,而頭孢曲松能在損傷早期清除興奮性谷氨酸,故能減輕神經(jīng)損傷[12]。同時(shí)本研究顯示觀察組小鼠皮層較對(duì)照組腦梗死容積小、腦內(nèi)IL-1β水平低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而在紋狀體兩組炎性因子水平及梗死容積無明顯差異(P>0.05),結(jié)果提示頭孢曲松可保護(hù)缺血半暗帶皮層,逆轉(zhuǎn)部分梗死容積、IL-1β表達(dá)。研究提示再灌注損傷早期炎性細(xì)胞激活釋放IL-1β,且隨著再灌注時(shí)間延長(zhǎng)炎性細(xì)胞開始逐漸釋放一系列如腫瘤壞死因子α(TNF-α)等炎性介質(zhì)[13-14]。由于IL-1β為缺血損傷早期產(chǎn)生因子,可放大炎癥級(jí)聯(lián)效應(yīng),導(dǎo)致炎癥因子聚集在損傷腦組織血管周圍,同時(shí)IL-1β可促使機(jī)體谷氨酸釋放,加重腦組織缺血、損傷,而頭孢曲松可抑制炎性細(xì)胞活化,阻礙IL-1β釋放,從而達(dá)到保護(hù)腦組織的目的[15]。

    綜上所述,臨床在腦缺血再灌注前使用頭孢曲松進(jìn)行預(yù)處理,能降低腦內(nèi)IL-1β炎性因子表達(dá)、分泌,有效減少腦梗死容積、減輕腦神經(jīng)功能損失,對(duì)腦組織起保護(hù)效果。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]戚翔,賈建麗,蔡勁松,等.不同劑量右美托咪定預(yù)處理對(duì)大鼠全腦缺血再灌注損傷炎性反應(yīng)的影響[J].臨床外科雜志,2015,23(11):852-854.

    [2]秦浩,顧麗澤,高麗,等.硫化氫預(yù)處理對(duì)大鼠全腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2013, 35(3):249-253.

    [3]楊克紅,劉浩,吳華璞,等.姜黃素預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2013,29(10):1432-1436.

    [4]邢東,吳志新,董輝,等.電針預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血損傷后腦內(nèi)炎癥反應(yīng)及NF-κB的影響[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2017, 46(9):1155-1158,1195.

    [5]肖愛嬌,康明非,張毫,等.艾灸預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠大腦皮質(zhì)caspase-3蛋白表達(dá)的影響[J].天津醫(yī)藥,2014,42(6):544-546.

    [6]石瑤,郭倩,周也涵,等.白藜蘆醇通過Sirtuins 1通路促進(jìn)自噬減輕大鼠腦缺血/再灌注損傷[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2015,35(4):496-501.

    [7]徐正虎,王君.阿托伐他汀預(yù)處理和缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中華老年心腦血管病雜志,2015,17(3):310-312.

    [8]朱芳蕓,張霞婧,朱蕭玲,等.谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體2在電針預(yù)處理減輕小鼠全腦缺血再灌注損傷中的作用[J].中華麻醉學(xué)雜志,2013,33(2):223-227.

    [9]李國(guó)福,賈佳,符加紅,等.異氟烷預(yù)處理或后處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷的影響[J].中華危重病急救醫(yī)學(xué),2014,26(6):431-435.

    [10]王焰斌,楊建安,陳偉新,等.烏司他丁預(yù)處理對(duì)深低溫停循環(huán)主動(dòng)脈手術(shù)患者腦缺血再灌注損傷的影響[J].中華胸心血管外科雜志,2013,29(10):614-616,626.

    [11]方芳,李珍,王烈成,等.白藜蘆醇預(yù)處理對(duì)局灶性腦缺血/再灌注大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用和機(jī)制[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2012,28(11):1544-1548.

    [12]徐德友,印衛(wèi)兵,沈華超,等.脈血康聯(lián)合阿司匹林預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血-再灌注損傷的影響[J].江蘇醫(yī)藥,2013, 39(19):2244-2246.

    [13]何丹,楊勢(shì)赫,金志成,等.堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血/再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2015,34(5):714-720.

    [14]陳立英,王會(huì)軍,陶小雪,等.不同預(yù)處理方式對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2015,13(3):312-314.

    [15]任悅義,董河,王世端,等.嗎啡對(duì)大鼠腦缺血再灌注后腦含水量及S100 β的影響[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥,2010,17(6):5-7.

    (收稿日期:2017-11-22 本文編輯:閆 佩)

    猜你喜歡
    損傷腦組織預(yù)處理
    基于預(yù)處理MUSIC算法的分布式陣列DOA估計(jì)
    小腦組織壓片快速制作在組織學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用
    芒果苷對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腦組織炎癥損傷的保護(hù)作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    常見羽毛球運(yùn)動(dòng)軟組織損傷及診斷分析
    我院足球運(yùn)動(dòng)員踝關(guān)節(jié)損傷發(fā)生原因及預(yù)防分析
    淺談跑步運(yùn)動(dòng)中膝關(guān)節(jié)的損傷和預(yù)防
    輸煤輸焦皮帶的損傷原因剖析與維護(hù)辦法探討
    淺談PLC在預(yù)處理生產(chǎn)線自動(dòng)化改造中的應(yīng)用
    DNA雙加氧酶TET2在老年癡呆動(dòng)物模型腦組織中的表達(dá)及其對(duì)氧化應(yīng)激中神經(jīng)元的保護(hù)作用
    絡(luò)合萃取法預(yù)處理H酸廢水
    h视频一区二区三区| 国产一区有黄有色的免费视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 一区二区三区乱码不卡18| 精品久久久久久久末码| 丰满少妇做爰视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 大片免费播放器 马上看| av在线播放精品| 国产精品三级大全| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 免费看av在线观看网站| 亚洲精品一二三| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲欧洲日产国产| 高清不卡的av网站| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 另类亚洲欧美激情| 日韩一本色道免费dvd| 97超视频在线观看视频| 一区二区三区四区激情视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美激情国产日韩精品一区| 网址你懂的国产日韩在线| 91aial.com中文字幕在线观看| 日韩大片免费观看网站| 一级毛片我不卡| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品一区二区性色av| 草草在线视频免费看| 久久综合国产亚洲精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲三级黄色毛片| 在线天堂最新版资源| 99热国产这里只有精品6| 偷拍熟女少妇极品色| 麻豆成人午夜福利视频| 99久久精品一区二区三区| av.在线天堂| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久 成人 亚洲| 麻豆乱淫一区二区| 久久久欧美国产精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 一级毛片 在线播放| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 婷婷色av中文字幕| 尾随美女入室| freevideosex欧美| 国产精品一区二区在线不卡| 91在线精品国自产拍蜜月| 成人无遮挡网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| av国产精品久久久久影院| 国产av码专区亚洲av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产深夜福利视频在线观看| 久久婷婷青草| 国产成人freesex在线| 欧美日韩综合久久久久久| 男女免费视频国产| 身体一侧抽搐| 色婷婷av一区二区三区视频| 午夜老司机福利剧场| 欧美成人午夜免费资源| 全区人妻精品视频| 亚洲国产欧美在线一区| 精品久久久久久久末码| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久人妻熟女aⅴ| 我的女老师完整版在线观看| 在线 av 中文字幕| 少妇的逼水好多| 中文天堂在线官网| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 高清在线视频一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲精品一二三| 亚洲成色77777| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲精品自拍成人| 久久久久精品久久久久真实原创| 爱豆传媒免费全集在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲精品国产av成人精品| 秋霞在线观看毛片| 久久精品国产a三级三级三级| 男女无遮挡免费网站观看| 99国产精品免费福利视频| 九九在线视频观看精品| 国产高潮美女av| 精华霜和精华液先用哪个| 日日撸夜夜添| 久久久国产一区二区| 国产精品欧美亚洲77777| 综合色丁香网| 高清不卡的av网站| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 欧美少妇被猛烈插入视频| 毛片一级片免费看久久久久| 成年人午夜在线观看视频| 免费看日本二区| 黄色欧美视频在线观看| 国产成人一区二区在线| 免费观看av网站的网址| 激情 狠狠 欧美| 最近的中文字幕免费完整| 另类亚洲欧美激情| 美女主播在线视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 免费av中文字幕在线| 欧美xxxx性猛交bbbb| 少妇的逼水好多| 亚洲真实伦在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 久久久久久久国产电影| 亚洲色图av天堂| 少妇人妻久久综合中文| 我要看黄色一级片免费的| 精品久久久噜噜| 日韩欧美 国产精品| 色哟哟·www| 天天躁日日操中文字幕| 成年免费大片在线观看| 国产男女内射视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 99精国产麻豆久久婷婷| 日本与韩国留学比较| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产成人免费观看mmmm| 激情 狠狠 欧美| 我要看日韩黄色一级片| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品久久久久成人av| 18禁动态无遮挡网站| 国产色婷婷99| 午夜免费男女啪啪视频观看| av天堂中文字幕网| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲欧美成人综合另类久久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| 777米奇影视久久| 黄色怎么调成土黄色| 国产亚洲精品久久久com| 欧美3d第一页| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲人与动物交配视频| 久久精品国产亚洲av天美| 国产 一区 欧美 日韩| 午夜视频国产福利| 久久久亚洲精品成人影院| 日韩大片免费观看网站| 久久 成人 亚洲| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久久久久久大尺度免费视频| 色视频在线一区二区三区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 在线观看免费视频网站a站| 国产男女超爽视频在线观看| 免费观看a级毛片全部| 欧美日韩视频精品一区| 不卡视频在线观看欧美| 久久久久久九九精品二区国产| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品福利在线免费观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲精品,欧美精品| 久久久精品94久久精品| 激情 狠狠 欧美| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久婷婷青草| .国产精品久久| 五月伊人婷婷丁香| 久久久久视频综合| 大话2 男鬼变身卡| 内地一区二区视频在线| 国产精品一区www在线观看| 在线观看人妻少妇| 乱码一卡2卡4卡精品| 成年av动漫网址| 成人一区二区视频在线观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 日本免费在线观看一区| 国产高潮美女av| 中文欧美无线码| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 各种免费的搞黄视频| 我的老师免费观看完整版| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 在线观看av片永久免费下载| 久久久久久久亚洲中文字幕| 在线免费观看不下载黄p国产| 简卡轻食公司| 亚洲av不卡在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲av成人精品一二三区| 成人国产av品久久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 七月丁香在线播放| 午夜免费观看性视频| 少妇精品久久久久久久| 伊人久久精品亚洲午夜| 熟女av电影| 国产精品国产av在线观看| www.av在线官网国产| 高清午夜精品一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产男人的电影天堂91| 亚洲国产精品一区三区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 一级毛片电影观看| 一级a做视频免费观看| 国国产精品蜜臀av免费| 国产成人91sexporn| 日本vs欧美在线观看视频 | 性色avwww在线观看| 九九在线视频观看精品| 精品酒店卫生间| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美xxⅹ黑人| 免费观看无遮挡的男女| 国产在视频线精品| 国产中年淑女户外野战色| 国产69精品久久久久777片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美97在线视频| 一区二区三区精品91| 高清黄色对白视频在线免费看 | 国产爽快片一区二区三区| 久热久热在线精品观看| 亚洲av不卡在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 超碰97精品在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产亚洲最大av| 日韩国内少妇激情av| av.在线天堂| 亚洲熟女精品中文字幕| 精品一区二区免费观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日本黄色片子视频| 亚洲精品456在线播放app| 国产在线男女| 国产 一区精品| 色视频www国产| 香蕉精品网在线| 久久久久久久久久久丰满| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 在线看a的网站| 各种免费的搞黄视频| 国产精品女同一区二区软件| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲国产精品成人久久小说| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲在久久综合| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美一级a爱片免费观看看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲av中文av极速乱| 国产视频首页在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产精品久久久久久精品古装| 久久婷婷青草| 亚洲国产高清在线一区二区三| 我的老师免费观看完整版| 亚洲av成人精品一二三区| 大码成人一级视频| 激情 狠狠 欧美| 超碰97精品在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日韩一区二区视频免费看| 久久人妻熟女aⅴ| 成人特级av手机在线观看| 亚洲综合精品二区| 国产精品久久久久久精品古装| av专区在线播放| 日韩视频在线欧美| 国产免费福利视频在线观看| 精品人妻视频免费看| av国产精品久久久久影院| 久久久久精品性色| 日韩欧美 国产精品| 国产精品一区二区性色av| 亚洲av欧美aⅴ国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 99久久人妻综合| 精品视频人人做人人爽| 色综合色国产| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 中文天堂在线官网| 黑人高潮一二区| 日本av手机在线免费观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 男女下面进入的视频免费午夜| 精品久久国产蜜桃| 免费观看无遮挡的男女| 大香蕉97超碰在线| 中文字幕亚洲精品专区| 久久久久国产网址| 久久久久久九九精品二区国产| av免费在线看不卡| 久久青草综合色| 最近的中文字幕免费完整| 色5月婷婷丁香| 国产高清不卡午夜福利| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲av成人精品一二三区| 国产高清国产精品国产三级 | 国产在视频线精品| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲欧美日韩东京热| 成人毛片60女人毛片免费| 街头女战士在线观看网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 麻豆国产97在线/欧美| 五月天丁香电影| 青春草视频在线免费观看| 人妻一区二区av| 中文天堂在线官网| 久久久成人免费电影| 精品一区在线观看国产| 国产精品久久久久久精品古装| h视频一区二区三区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美日韩在线观看h| 十分钟在线观看高清视频www | 看免费成人av毛片| 国产乱人视频| 一级毛片 在线播放| 黑人高潮一二区| 六月丁香七月| 亚洲精品第二区| 国产成人精品一,二区| 国产永久视频网站| 国产黄片视频在线免费观看| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲av中文av极速乱| 久久 成人 亚洲| 秋霞在线观看毛片| 一级爰片在线观看| 亚洲最大成人中文| 伦理电影大哥的女人| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 大片电影免费在线观看免费| 美女福利国产在线 | 在现免费观看毛片| 最近的中文字幕免费完整| 一级爰片在线观看| 国产黄片美女视频| 国产一区二区三区av在线| 99久久综合免费| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 丝袜喷水一区| 亚洲精品自拍成人| 精品久久国产蜜桃| 久久久久网色| 国产午夜精品一二区理论片| freevideosex欧美| av国产久精品久网站免费入址| av黄色大香蕉| 黄片wwwwww| 精品一区二区三区视频在线| 在线观看av片永久免费下载| 国产淫片久久久久久久久| 国产毛片在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 联通29元200g的流量卡| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日本黄色片子视频| 高清视频免费观看一区二区| 观看美女的网站| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品视频女| 精品一区二区免费观看| 国产男女超爽视频在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产有黄有色有爽视频| 黄片wwwwww| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲国产av新网站| 草草在线视频免费看| 亚洲,一卡二卡三卡| 如何舔出高潮| 日韩电影二区| 身体一侧抽搐| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久6这里有精品| 成年av动漫网址| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品一区二区性色av| 在线观看一区二区三区| 亚洲精品久久午夜乱码| 中文字幕制服av| 成年女人在线观看亚洲视频| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品三级大全| 日本欧美国产在线视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 22中文网久久字幕| 日韩av免费高清视频| 日韩亚洲欧美综合| tube8黄色片| 大话2 男鬼变身卡| 日韩中文字幕视频在线看片 | 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲久久久国产精品| 欧美日韩视频精品一区| 好男人视频免费观看在线| 老女人水多毛片| 边亲边吃奶的免费视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲精品,欧美精品| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 国产成人freesex在线| 亚洲国产精品专区欧美| 国内精品宾馆在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产v大片淫在线免费观看| 国产av码专区亚洲av| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 美女福利国产在线 | 国产精品久久久久久精品电影小说 | 一级a做视频免费观看| 韩国高清视频一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 色吧在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 久久久午夜欧美精品| 国产免费视频播放在线视频| 免费人成在线观看视频色| 久久久久久人妻| 亚洲最大成人中文| 草草在线视频免费看| 丰满少妇做爰视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 街头女战士在线观看网站| 欧美成人a在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲精品,欧美精品| 国产免费一区二区三区四区乱码| h视频一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 日韩中字成人| 日韩亚洲欧美综合| 国产在线视频一区二区| 日韩大片免费观看网站| 麻豆乱淫一区二区| 黄色配什么色好看| 国产男人的电影天堂91| 国产中年淑女户外野战色| 老司机影院毛片| 亚洲国产欧美人成| 中文字幕制服av| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 在线观看人妻少妇| 五月伊人婷婷丁香| 欧美精品亚洲一区二区| 黄色一级大片看看| 麻豆国产97在线/欧美| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品久久久久久久电影| 一级毛片久久久久久久久女| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 插阴视频在线观看视频| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产av码专区亚洲av| 久久综合国产亚洲精品| tube8黄色片| 日本av免费视频播放| 国产亚洲精品久久久com| 国产在线视频一区二区| 男女边吃奶边做爰视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美zozozo另类| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 干丝袜人妻中文字幕| 大话2 男鬼变身卡| 91在线精品国自产拍蜜月| 成人综合一区亚洲| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 熟女电影av网| 黄色怎么调成土黄色| 秋霞伦理黄片| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲成人一二三区av| 成人毛片60女人毛片免费| 国精品久久久久久国模美| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美成人午夜免费资源| 五月伊人婷婷丁香| 久久人人爽人人片av| 永久网站在线| 能在线免费看毛片的网站| 国产在线视频一区二区| 久久久久视频综合| 亚洲人成网站在线播| 国产极品天堂在线| 国产亚洲精品久久久com| 三级经典国产精品| 成人漫画全彩无遮挡| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲美女视频黄频| 香蕉精品网在线| 日本色播在线视频| 久久99热6这里只有精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 91精品国产国语对白视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 大码成人一级视频| 97在线人人人人妻| 亚洲欧美日韩无卡精品| 成年人午夜在线观看视频| 黑丝袜美女国产一区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 大片免费播放器 马上看| 久久婷婷青草| 色吧在线观看| 直男gayav资源| av免费观看日本| 性色av一级| av播播在线观看一区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产高清不卡午夜福利| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲最大成人中文| 深爱激情五月婷婷| 日韩电影二区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美丝袜亚洲另类| 边亲边吃奶的免费视频| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品.久久久| 嫩草影院新地址| h视频一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久精品国产自在天天线| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲av国产av综合av卡| 精品一区二区三区视频在线| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲精品色激情综合| 亚洲精品一区蜜桃| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲精品第二区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲四区av| 国产有黄有色有爽视频| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲色图av天堂| 久久久久久久精品精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 色吧在线观看| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲怡红院男人天堂| 直男gayav资源| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲自偷自拍三级| 人妻 亚洲 视频| 一级毛片久久久久久久久女| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 午夜福利视频精品| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲四区av| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲av综合色区一区| 久久精品国产自在天天线|