馬蓮種皮有效成分的提取及黃酮含量的測定

馬小虎，丁潤梅

（寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，寧夏銀川 750004）

馬蓮又名馬藺，是鳶尾科鳶尾屬多年生草本植物，生長于荒地、路旁、天然草地，尤以過度放牧的鹽堿化草場上較多，分布于中國內(nèi)蒙古、寧夏、青海、西藏等20多個省區(qū)[1]。由于其耐旱、耐鹽堿等特點，在綠化、水土保持、醫(yī)藥等方面具有一定的開發(fā)潛力[2]。馬蓮的根、花和種子均可入藥[3，4]。其中馬蓮種子呈不規(guī)則卵形的多面體，種子入藥稱馬藺子，有抑癌作用。馬藺子甲素是從馬藺種皮分離得到的化合物，能涼血、止血、清熱利濕，主治骨結(jié)核、淋巴結(jié)核，還可作口服避孕藥[5-7]。

馬蓮根系發(fā)達(dá)，綠期長，花色高貴幽雅，綠地建植景觀效果良好，近年來逐漸被用作缺水城市綠化、護(hù)坡固沙、鹽堿地改良、園林綠化和西部植被恢復(fù)，馬蓮全株都具有藥用價值。本文采用索氏提取法對馬蓮種皮總黃酮進(jìn)行提取并測定，旨在為馬蓮子的藥用價值和保健功能的研究及資源開發(fā)上提供理論依據(jù)及檢測手段。

1 材料與方法

多余的醇液，轉(zhuǎn)100 mL容量瓶中，以同濃度的乙醇定容，搖勻，提取3次，溶液待用。

1.2.4 樣品的測定 精密吸取1.00 mL樣品提取液至50 mL容量瓶中，按照1.2.2中NaNO2-Al（NO）3-NaOH比色法，用同濃度乙醇定容至刻度，搖勻，用紫外分光光度計在510 nm處，以0 mL管為對照，測定吸光度，平行3次，取其平均值。計算公式如下：

1.1 試驗儀器與試劑

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（101-4-S，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；紫外分光光度計（UV-1600，上海美譜達(dá)儀器有限公司）；KDM型調(diào)溫電熱套（山東省鄄城匯鑫科技有限公司）；萬分之一電子分析天平（AEU-210，日本島津）；索氏提取儀（瑞爾）。

馬蓮種皮；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（92.5%）（中國藥品生物制品檢定所）；無水乙醇、NaNO2、Al（NO）3、NaOH均為分析純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 試劑的配制

（1）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制：精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，用60%乙醇溶解，完全轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，用同濃度的乙醇定容至刻度，搖勻，配制成濃度為0.2 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

（2）5%NaNO2溶液的配制：精密稱取2.50 g NaNO2置于500 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，配制成5%NaNO2溶液。

（3）10%Al（NO）3溶液的配制：精密稱取5.00 g Al（NO）3置于500 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，配制成10%Al（NO）3溶液。

（4）4%NaOH溶液的配制：精密稱取2.00 gNaOH置于50 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，配制成4%NaOH溶液。

1.2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液 0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分別置于25 mL容量瓶中，依次5%NaNO21.25 mL，混勻放置5 min，加入10%Al（NO）3125 mL，搖勻放置6 min，加入4%NaOH 7.5 mL，加同濃度乙醇定容至刻度，搖勻，靜置10 min后，用紫外分光光度計在510 nm波長處，以未加蘆丁儲備液的顯色試劑乙醇溶液作為空白，在510 nm處測定其吸光度值。

1.2.3 樣品的提取 取馬蓮種皮洗凈烘干，研磨粉碎，過40目篩，各稱取5.0 g置于索氏提取裝置中，以不同濃度的乙醇為溶劑，回流。所得提取液減壓蒸餾，除去

式中：C-由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出的稀釋后提取液中總黃酮濃度；50-稀釋倍數(shù)；0.1-樣品提取液體積，L；5-樣品粉末質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

以蘆丁質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖1），所得的回歸方程為y=11.745x-0.018 3，R2=0.999 8。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Rutin standard curve

2.2 黃酮含量

采用 L9（34）正交試驗設(shè)計，考查料液比、提取時間、濃度3個因素對馬蓮種皮提取物的黃酮提取效果。正交試驗因素與水平（見表1、表2）。

表1 正交試驗因素與水平Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment

由表2可知，正交試驗不同條件下提取黃酮含量有一定的差別。最佳提取條件組合為A1+B3+C3，即提取馬蓮種皮中的最佳工藝條件為料液比1∶15，提取時間5 h，乙醇濃度70%。

表2 馬蓮種皮提取物正交試驗結(jié)果Tab.2 Orthogonal experimental results of Marlene seed coat

3 結(jié)論

黃酮類物質(zhì)具有很多有益的藥理作用和生理功能，對于提高免疫力、降脂、降壓、抗衰老、治療心腦血管疾病都有一定的作用。本試驗采用索氏提取法以乙醇為提取劑提取馬蓮種皮中的總黃酮，并以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，通過分光光度法在510 nm處測定提取液中黃酮的含量并利用正交試驗優(yōu)化馬蓮種皮中的有效成分提取。結(jié)果表明最優(yōu)工藝條件為：提取劑70%乙醇，提取時間5 h，料液比1:15，此時馬蓮種皮中黃酮的含量最高。

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