兩種檢測HAV-IgM試劑的敏感性評價(jià)

張海瑩，王震宇，孔祥沙，季穎，朱凌，魏來

[北京大學(xué)人民醫(yī)院 北京大學(xué)肝病研究所（丙型肝炎和肝病免疫治療北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室），北京 100044]

甲型肝炎病毒（hepatitis A virus, HAV）感染及所導(dǎo)致的疾病成為我國嚴(yán)重的社會(huì)公共衛(wèi)生問題[1]。我國屬于甲型肝炎的高發(fā)區(qū)，HAV感染可導(dǎo)致肝衰竭甚至死亡[2]。人感染HAV后多表現(xiàn)為亞臨床癥狀，檢測性能好的HAV診斷試劑，對HAV的防治尤為重要。HAV實(shí)驗(yàn)室檢測主要包括HAV-IgM和HAV-IgG兩種抗體。HAV-IgG陽性表明患者既往感染過HAV，HAV-IgM是用于診斷HAV新近感染的血清學(xué)標(biāo)志[3]。近年來HAV檢測試劑已得到廣泛應(yīng)用，但關(guān)于不同HAV-IgM檢測試劑的敏感性如何？目前相關(guān)研究較少。為加強(qiáng)HAV抗體實(shí)驗(yàn)室檢測的質(zhì)量控制，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，以及為甲肝抗體人群血清流行病學(xué)調(diào)查選擇試劑提供參考，本文旨在全面評價(jià)國內(nèi)市場上應(yīng)用較廣的2種HAV-IgM檢測試劑，并探討其原因。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月-2017年6月該院就診的疑似急性HAV感染門診和住院患者血清樣本196例。其中，男性108例，女性88例；年齡11～84歲，中位43歲。患者均轉(zhuǎn)氨酶異常升高或伴有黃疸，且均排除乙型、丙型、丁型及戊型肝炎病毒感染。

1.2 試劑與儀器

HAV-IgM檢測甲型肝炎病毒IgM抗體檢測試劑盒[化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法（chemiluminesent microparticle immuno assay, CMIA），批號：72366LI00、配套儀器為ARCHITECT i2000SR，美國雅培公司，S/CO為0.00～0.79]。當(dāng)S/CO≤0.79，儀器報(bào)告結(jié)果判為陰性；S/CO為0.80～1.20是HAV-IgM試劑檢測灰區(qū)；當(dāng)S/CO≥1.21，儀器報(bào)告結(jié)果判為陽性。萬泰甲型肝炎病毒IgM抗體檢測試劑盒[酶聯(lián)免疫法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）]，批號：AM20170609，北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，檢測波長450 nm，陽性對照吸光度值（optical delnsity, OD）平均值≥0.80，陰性對照OD值平均值≤0.10，樣本臨界值（Cut-off）=陰性對照孔OD均值×2.1，凡樣本OD值＞Cut-off值為陽性。北京高達(dá)甲型肝炎病毒IgM抗體檢測試劑盒（ELISA），批號：201707006，北京現(xiàn)代高達(dá)生物技術(shù)有限責(zé)任公司，檢測波長450 nm，陽性對照OD值平均值≥1.00，陰性對照OD值平均值≤0.10，Cut-off=0.7116，凡樣本OD值＞Cut-off值為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，兩組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)分析，一致性檢驗(yàn)采用Kappa檢驗(yàn)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種HAV-IgM敏感性和特異性

雅培HAV-IgM陽性35例，萬泰HAV-IgM陽性58例，高達(dá)HAV-IgM陽性48例。以雅培HAV-IgM檢測試劑為金標(biāo)準(zhǔn)，萬泰和高達(dá)HAV-IgM的敏感性、特異性。見表1。

萬泰、高達(dá)試劑與雅培檢測HAV-IgM有檢測結(jié)

表1 兩種HAV-IgM試劑檢測性能分析 %

果不一致的標(biāo)本，其中1例雅培HAV-IgM陽性但其S/CO值較低（1.30～1.47），萬泰和高達(dá)HAV-IgM均陰性；1例雅培HAV-IgM陽性，高達(dá)HAV-IgM陽性，萬泰HAV-IgM陰性；4例雅培HAV-IgM灰區(qū)（0.80～1.20），萬泰HAV-IgM陽性但S/CO值較低（0.50～1.10），高達(dá)HAV-IgM陽性但S/CO值較低（0.80～1.10）；5例雅培HAV-IgM陰性，萬泰HAVIgM陽性，其中4例S/CO值較低（均＞1.00），高達(dá)HAV-IgM陽性但S/CO值為弱陽性（0.75～1.00）；14例雅培HAV-IgM陰性，高達(dá)HAV-IgM陰性，萬泰HAV-IgM陽性。

2.2 兩種HAV-IgM S/CO值相關(guān)性

萬泰和雅培試劑檢測HAV-IgMS/CO值相關(guān)（r=0.597，P=0.000）；高達(dá)和雅培試劑檢測HAVIgMS/CO 值相關(guān)（r=0.541，P=0.000）。見圖1、2。

圖1 萬泰和雅培試劑檢測HAV-IgM S/CO值相關(guān)性

圖2 高達(dá)和雅培試劑檢測HAV-IgM S/CO值相關(guān)性比較

2.3 兩種HAV-IgM檢測試劑一致性比較

Kappa系數(shù)解釋如下，＜0.00：沒有一致性；0.00～0.19：極低的一致性；0.20～0.39：一般的一致性；0.40～0.59：中等的一致性；0.60～0.79：高度的一致性；0.80～1.00：幾乎完全一致。萬泰HAV-IgM檢測試劑與雅培HAV-IgM試劑高度一致（K=0.648，P=0.000）；高達(dá)HAV-IgM檢測試劑與雅培HAV-IgM檢測試劑高度一致（K=0.772，P=0.000）。見表2。

表2 兩種HAV-IgM試劑一致性比較

3 討論

甲型肝炎是世界范圍內(nèi)最常見的急性病毒性肝炎[4]，為許多國家嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一[5]。它主要經(jīng)糞-口途徑傳播，通過污染水源、食物及食具等廣泛流行[6-10]，也可通過器官移植傳播[11]。甲型肝炎的實(shí)驗(yàn)室診斷主要包括ELISA、CMIA及電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（electro chemi luminescence immuno assay，ECLIA）檢測血清中HAV-IgM。雅培全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀利用化學(xué)發(fā)光原理結(jié)合免疫技術(shù)進(jìn)行檢測，具有敏感性好、特異性高及受干擾小的特點(diǎn)，與其他電化學(xué)發(fā)光免疫分析法有相關(guān)性，在臨床檢驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，是公認(rèn)的臨床檢測HAV-IgM金標(biāo)準(zhǔn)[12-14]。

本研究發(fā)現(xiàn)，高達(dá)試劑的敏感性、特異性均高于萬泰試劑，高達(dá)試劑和萬泰試劑均有較高的陰性預(yù)測值。研究還發(fā)現(xiàn)萬泰、高達(dá)試劑與雅培HAV-IgM試劑S/CO值均有相關(guān)性；萬泰、高達(dá)試劑與雅培試劑均有高度的一致性。說明兩種試劑均有很好的診斷性和可靠性，為臨床檢測試劑的選擇提供更多的依據(jù)。國內(nèi)外研究對臨床常用的甲型肝炎檢測方法進(jìn)行比較，黃嫵姣等[15]比較瑞士羅氏公司的ECLIA方法和上海科華生物工程股份有限公司的ELISA方法檢測HAV-IgM，發(fā)現(xiàn)兩種檢測結(jié)果的一致性較低。該研究使用ECLIA方法不同于筆者研究的雅培CMIA方法以及ELISA。HYEWON等[12]比較雅培CMIA、羅氏ECLIA及德國西門子公司的ADVIA Centaur全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測HAV-IgM，發(fā)現(xiàn)3種方法有高度的一致性，對16例檢測不一致的結(jié)果，雅培試劑顯示灰區(qū)，其他兩種方法均為陰性。

兩種試劑盒在檢測IgM低水平患者標(biāo)本時(shí)，出現(xiàn)結(jié)果不一致的情況，不排除有假陽性或假陰性的可能，是臨床檢測、臨床診斷及人群血清流行病學(xué)調(diào)查時(shí)選擇檢測試劑需注意的問題。黃嫵姣等[15]研究發(fā)現(xiàn)，ELISA法檢驗(yàn)敏感性高，但易出假陽性，羅氏ECLIA特異性好，檢測結(jié)果更符合臨床。本研究發(fā)現(xiàn),雖然兩種檢測HAV-IgM試劑有不一致結(jié)果，但兩種試劑檢測的S/CO值有相關(guān)性。但HYEWON等[12]比較雅培CMIA、羅氏ECLIA及西門子ADVIA Centaur檢測HAV-IgM的S/CO值有相關(guān)性。

萬泰、高達(dá)試劑均采用ELISA法檢測HAV-IgM。ELISA法檢測HAV-IgM假陽性的主要原因：①類風(fēng)濕因子，自身免疫性疾病及腎衰竭等的干擾，都可導(dǎo)致HAV-IgM假陽性[16-17]；②標(biāo)本性狀的影響，標(biāo)本溶血、乳糜血或分離血清不徹底而使血清中含有纖維蛋白原影響檢測結(jié)果引起假陽性。為降低檢測假陽性率，可增大標(biāo)本離心轉(zhuǎn)速（3 000 r/min），延長標(biāo)本離心時(shí)間，使抗凝血標(biāo)本得以徹底離心分離。ELISA法洗板機(jī)洗板時(shí)，保證洗板針無纖維蛋白或異物堵塞，將洗液注滿各反應(yīng)孔，防止產(chǎn)生假陽性[18]。

綜上所述，國內(nèi)常用的兩種HAV-IgM檢測試劑盒有很好的檢測性和一致性，可在臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用，為HAV診斷提供有力的支持，防止甲型肝炎流行。但在部分IgM水平較低的患者中，兩種抗體檢測試劑會(huì)存在不一致的結(jié)果，對這一部分結(jié)果還有待進(jìn)一步研究，應(yīng)是臨床檢測、臨床診斷及人群血清流行病學(xué)調(diào)查時(shí)選擇參考試劑需要注意的問題。進(jìn)一步研發(fā)HAV-IgM的定量試劑有助于診斷不典型的HAV感染及移植后的HAV再激活。

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