HPLC測定復方依托紅霉素洗劑中依托紅霉素的含量

王姣

摘 要：本實驗采用高效液相色譜法對復方依托紅霉素洗劑中的依托紅霉素的進行了含量測定。方法：采用C18 色譜柱，10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）為流動相，檢測波長為205nm，流速為1.0ml/min。依托紅霉素在0.1～2.5mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系（r=0.99995）。依托紅霉素平均回收率分別為99.5%。結論：本法簡便、準確，可用于復方依托紅霉素洗劑中依托紅霉素的含量測定。

關鍵詞：復方依托紅霉素洗劑；含量；測定

依托紅霉素為紅霉素丙酸酯的十二烷基硫酸鹽，中文別名為紅霉素丙酸脂十二烷基硫酸鹽、紅霉素硫酸月桂酸酯、無味紅霉素干糖漿、紅霉素丙酸酯十二烷基硫酸鹽、無味紅霉素。依托紅霉素對葡萄球菌屬、各組鏈球菌和革蘭陽性桿菌均具抗菌活性。依托紅霉素系抑菌劑，但在高濃度時對某些細菌也具殺菌作用。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等，該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。本實驗采用高效液相色譜法對復方依托紅霉素洗劑中的依托紅霉素的進行了含量測定。

1儀器與試藥

1.1儀器：賽默飛Spectronic 200可見分光光度計（百道亨儀器設備（北京）有限公司）；Agilent 1260 液相色譜儀（上?？茖W儀器有限公司）；HWP-5實驗室蒸餾水器（鄭州澤銘科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三頻恒溫數(shù)控超聲波清洗器（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；Sail（賽爾）1000液相色譜儀（月旭科技（上海）股份有限公司）；DTA-27多功能靜音型臺式超聲波清洗機（鼎泰（湖北）生化科技設備制造公司）。

1.2色譜柱：迪馬C18鉆石色譜柱（220 mm×4.6mm，5μm）。

1.3對照品：依托紅霉素

1.4試劑：甲醇（武漢強松精細化學品有限公司）、乙腈（武漢強松精細化學品有限公司）、磷酸（上海江萊生物科技有限公司）、十二烷基磺酸鈉（武漢強松精細化學品有限公司）、三乙胺（武漢強松精細化學品有限公司）、磷酸二氫鈉（上海江萊生物科技有限公司）、氫氧化鈉（上海江萊生物科技有限公司）。

2測定方法確定

2.1色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[3-5]。流動相：10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）為流動相，檢測波長：205nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按依托紅霉素峰計算應不得低于2000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取依托紅霉素對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含1.0mg的依托紅霉素溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取復方依托紅霉素洗劑，精密量取，置10毫升容量瓶內，用流動相定容，搖勻，濾過，即得。

2.4精密度試驗

精密吸取10μl依托紅霉素對照品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。

2.5對照品的線性考察

精密稱取適量依托紅霉素對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，依托紅霉素在0.1～2.5mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.6陰性溶液的制備

依照處方取除依托紅霉素以外的原輔料等，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，依上述方法測定，結果在依托紅霉素出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.7重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的復方依托紅霉素洗劑樣品6份，測定含量并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.72%，結果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8準確度試驗

精密稱取已知含量的樣品9份，分別精密加入依托紅霉素對照品。取模擬樣品照試驗方法試驗，計算回收率為99.5%， RSD為0.71%。

2.9樣品穩(wěn)定性試驗

取同一批復方依托紅霉素洗劑樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4小時，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定復方依托紅霉素洗劑中依托紅霉素的RSD=0.83%。結果表明供試品4小時內穩(wěn)定。

2.10樣品含量測定

測定復方依托紅霉素洗劑三批樣品中依托紅霉素的含量，結果三批樣品的含量分別為標示量的100.1%、99.8%、100.2%。

3討論

分別考察0.005 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調節(jié)pH值至2.7）-乙腈（54∶46），0.02 mol·L-1磷酸二氫鉀（氫氧化鈉調pH至6.0）-甲醇（4∶1），10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01），乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液（40：60），10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（50：50：0.1：0.01），乙腈-0.1%磷酸（40：60，每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g），不同比例的流動相，結果以10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）為流動相。本實驗表明此方法分離效果好、方法簡便、快捷、準確、專屬性好，可用于復方依托紅霉素洗劑中依托紅霉素的含量測定。

參考文獻：

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