Sevage法純化紫菜粗多糖的工藝研究

劉子健，岳 玲

（1.松原市油田總醫(yī)院；2.松原市食品藥品監(jiān)督管理局，吉林松原138000）

紫菜（Porphyra），是在海中互生藻類(lèi)的統(tǒng)稱(chēng)。屬于紅藻綱，紅毛菜科。種類(lèi)多，主要有條斑紫菜、壇紫菜、甘紫菜等。中國(guó)沿海地區(qū)已進(jìn)行人工栽培。21世紀(jì)初中國(guó)紫菜產(chǎn)量躍居世界第一位。紫菜其中富含蛋白質(zhì)、多糖和碘、磷、鈣等，營(yíng)養(yǎng)十分豐富。其中的紫菜多糖實(shí)驗(yàn)研究表明：紫菜多糖主要由巖藻糖、半乳糖、甘露糖和木糖組成，是一種糖醛酸含量較高的酸性雜多糖。對(duì)人體具有很好的保健作用，可以增強(qiáng)肌體免疫力，對(duì)某些淋巴細(xì)胞具有明顯的抑制作用，而且，對(duì)心血管疾病有較好的預(yù)防和治療作用[1-3]，紫菜是一種藥食兩用很有發(fā)展前景的資源。為了很好地利用紫菜資源，更好的發(fā)揮紫菜多糖的功效。本文對(duì)通過(guò)水提醇沉法制得的粗多糖進(jìn)行純化除雜研究，為有效利用和開(kāi)發(fā)紫菜多糖提供可靠依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

U1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普西通用儀器責(zé)任有限公司），電子天平BS224S（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司），數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH-2型，常州國(guó)華電器有限公司）。

1.2 材料

紫菜（購(gòu)于長(zhǎng)春農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)）、苯酚、濃硫酸、乙醇等均為分析純；標(biāo)準(zhǔn)品：無(wú)水葡萄糖（飛宇生物科技有限公司，含量大于98%，批號(hào)：FY18720206）。

2 試驗(yàn)方法

2.1 紫菜粗多糖的提取[4]

取紫菜適度粉碎后，加水煎煮3次，合并提取液濃縮至原藥液的1/3，加濃縮藥液4倍量的無(wú)水乙醇后，放置過(guò)夜進(jìn)行沉淀。抽濾后用無(wú)水乙醇、丙酮和乙醚進(jìn)行依次洗滌，干燥至恒重，即得紫菜粗多糖樣品。

2.2 Sevage法純化紫菜粗多糖

精密稱(chēng)取紫菜粗多糖3份，加蒸餾水使成4mg/ml、8mg/ml、12mg/ml的粗多糖溶液；依據(jù)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，加入Sevage試劑，適度振搖后，充分靜置，分出下層（Sevage試劑層），將剩余的藥液和析出物置于離心機(jī)內(nèi)離心，向傾出的上清液中加乙醇至含醇80%，放置過(guò)夜，離心，即得紫菜多糖沉淀。

2.3 紫菜粗多糖樣品液的配制

分別精密稱(chēng)取干燥至恒重的上述3種紫菜多糖各0.5g（9份），加蒸餾水定容至500ml容量瓶中，即得紫菜多糖樣品液（1～9號(hào)）。

2.4 多糖的測(cè)定方法[4]

藥材多糖的測(cè)定以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用硫酸-苯酚比色法。即：精密吸取樣品溶液2ml，再各加1.0ml6%苯酚試劑，混勻，精密加入5ml濃硫酸，振搖后放置5min，置沸水浴中加熱15min，立即轉(zhuǎn)入冷水浴中冷卻至室溫，以蒸餾水為空白，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程計(jì)算即得多糖含量。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的配制

精密稱(chēng)取0.0149g干燥至恒重的標(biāo)準(zhǔn)品無(wú)水葡萄糖，加入100ml容量瓶中，用水溶解至刻度，使成149ug/ml即得。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備[5]

依據(jù)參考文獻(xiàn)[6]標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備方法得：以濃度C對(duì)吸收度A回歸方程

3 紫菜多糖純化條件的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3.1 紫菜多糖提取條件的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

依據(jù)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，在對(duì)紫菜多糖的純化條件進(jìn)行單因素考察的基礎(chǔ)上，依據(jù)L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素-水平設(shè)計(jì)如表1。

表1 正交水平表

3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

表2 正交實(shí)驗(yàn)表

根據(jù)表1進(jìn)行正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果和方差分析，見(jiàn)表2和表3。

表3 方差分析表

，則該因素影響顯著，這里取

4 結(jié)論

正交試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過(guò)計(jì)算得知，影響紫菜多糖得率從主到次的因素排序?yàn)锳，C，B，即紫菜多糖濃度，Sevage試劑中氯仿與正丁醇體積比，Sevage試劑添加量與紫菜多糖樣品液體積比。因?yàn)闃O差R大小順序是，由，極差越大，對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果影響就越大。

正交試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過(guò)計(jì)算得知，因素 的水平1比其他兩個(gè)水平好，B的水平3比其他兩個(gè)水平好，C的水平1比其他兩個(gè)水平好，所以，經(jīng)純化后紫菜多糖中多糖含量最高的最佳工藝條件是A1B3C1，即：紫菜多糖濃度4mg/ml，Sevage試劑添加量與紫菜多糖樣品液體積比1/6，Sevage試劑中氯仿與正丁醇體積比。樣品濃度，試劑添加量與供試液體積比3/1。因?yàn)榫礙i因素反映了該因素水平對(duì)指標(biāo)的影響，指標(biāo)值越大越好，由

在水平下，由于FA，F(xiàn)B，F(xiàn)C均大于19，故ABC三因素對(duì)紫菜多糖的純化均有顯著影響。

5 討論

多糖的純化方法有很多，本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)Sevage法純化紫菜粗多糖進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，并且是在單因素考察的基礎(chǔ)上，只對(duì)純化后的紫菜多糖中總糖含量進(jìn)行了計(jì)算和分析，得出最佳工藝方案。但是，由于此法應(yīng)用的是萃取法，處理的樣品量較少，在純化過(guò)程的操作中，出現(xiàn)了乳化現(xiàn)象，難免有多糖的損失，因此，此項(xiàng)研究許多指標(biāo)需要考量，例如多糖的回收率情況等。

紫菜多糖作為食品紫菜中的主要成分之一，具有多方面的生理活性，并且，作為有藥用價(jià)值的食品，無(wú)毒、無(wú)不良反應(yīng)、無(wú)副作用，若能將其有效地開(kāi)發(fā)和利用，必將對(duì)人們的健康和保健具有很重要的意義，以后會(huì)有很好的發(fā)展前景。

[1]趙國(guó)華,陳宗道,李志孝,等.活性多糖研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),1995,23(03)：270-271.

[2]黃芳,蒙義文.活性多糖的研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),1999,11(05)：90-98.

[3]馬紅櫻,張德祿,胡春香,等.植物活性多糖研究進(jìn)展[J].西北師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）,2004,40(03):112-117.

[4]紀(jì)耀華,紀(jì)躍芝,等.大黃粗多糖傳統(tǒng)水提-醇沉法最佳工藝研究[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng),2010(01):62-65.

[5]紀(jì)耀華,紀(jì)躍芝,等.微波法提取大黃多糖最佳工藝優(yōu)化研究[J].中藥材,2009,(32).