羅紅蘭,劉凱,王萍,萬(wàn)鴻,劉靜
(黃岡市中心醫(yī)院腫瘤科,湖北 黃岡 438000)
乳腺癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤,發(fā)病率與死亡率呈逐年上升趨勢(shì),嚴(yán)重威脅女性患者的身體健康[1-2]。三陰性乳腺癌是指乳腺癌患者中雌激素受體、孕激素受體及內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2表達(dá)均缺失的特殊類型,具有獨(dú)特生物學(xué)特性和高侵襲性,屬乳腺癌中難治性疾病,尋找其特異性生物標(biāo)志物是治療的關(guān)鍵[3-4]。細(xì)胞黏附分子變異體6(cell adhesion molecule variant 6,CD44v6)為黏附分子 CD44主要成員,參與細(xì)胞與間質(zhì)間的黏接,與多種惡性腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)[5]。黏蛋白1(mucin-1,MUC1)在腫瘤患者的血清中表達(dá)異常,與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及機(jī)體的免疫功能有關(guān)[6]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是促脈管生成因子,可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖及血管生成[7]。本研究旨在通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)血清CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平,探討CD44v6、MUC1及VEGF在三陰性乳腺癌中的生物學(xué)特征及其對(duì)預(yù)后評(píng)估的意義。
1.1一般資料選取2014年2月至2016年3月在黃岡市中心醫(yī)院確診的65例三陰性乳腺癌患者和75例非三陰性乳腺癌患者為研究對(duì)象,所有患者均經(jīng)病理切片證實(shí)為乳腺癌患者,三陰性乳腺癌患者雌激素受體、孕激素受體及內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2無(wú)表達(dá)。所有研究對(duì)象均已簽署知情同意書(shū),并表示對(duì)研究?jī)?nèi)容理解。本次研究已獲得黃岡市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組患者的年齡、腫瘤大小、組織分級(jí)、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移等一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性,見(jiàn)表1。
1.2試劑與儀器CD44v6試劑盒(南京建成生物科技公司),MUC1試劑盒(美國(guó) eBioscience公司),VEGF試劑盒(上海生工有限公司),促凝管(美國(guó)BD 公司)。23R離心機(jī)(上海力康集團(tuán)力新儀器有限公司),-80 ℃低溫冰箱(美菱公司),Milli-Q超純水儀(美國(guó)Millipore公司),ST-360酶標(biāo)儀(上??迫A生物工程股份有限公司),SW-CJ-2F超凈工作臺(tái)(蘇州安泰超凈工作臺(tái)凈化有限公司),JY2002電子天平(上海良平儀器儀表有限公司)。
1.3檢測(cè)方法早晨空腹抽取患者靜脈血3 mL,3 mL置促凝管,30 min后,4 ℃,3 000 r·min-1離心10 min,分離血清,-80 ℃冰箱保存。使用前于4 ℃溶化,離心取上清,采用ELISA檢測(cè)CD44v6、MUC1和VEGF表達(dá)水平,設(shè)3個(gè)復(fù)孔,嚴(yán)格按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算每份血清中CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平。
2.1兩組患者CD44v6、MUC1及VEGF比較三陰性乳腺癌患者的CD44v6和MUC1表達(dá)水平與非三陰性乳腺癌患者比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而三陰性乳腺癌患者的VEGF表達(dá)水平明顯低于非三陰性乳腺癌患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。
2.2三陰性乳腺癌臨床特征與CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)三陰性乳腺癌患者的CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平與年齡、腫瘤大小、組織分級(jí)、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移均無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表3。
2.3CD44v6、MUC1及VEGF相關(guān)性相關(guān)性分析顯示,CD44v6 與MUC1表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.224,P=0.015),與VEGF表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性(r=0.023,P=0.637),MUC1與VEGF表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.271,P=0.008)。
乳腺癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤,約占女性惡性腫瘤的30%,手術(shù)創(chuàng)傷、化放療及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移,嚴(yán)重折磨患者,影響生命質(zhì)量[8]。三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌相比具有侵襲性強(qiáng)、進(jìn)展快、死亡風(fēng)險(xiǎn)高、生存期短、臨床預(yù)后差的特點(diǎn),是目前乳腺癌研究關(guān)注的焦點(diǎn)。并且三陰性乳腺癌的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,成為臨床乳腺癌治療難點(diǎn)[9-11]。尋找三陰性乳腺癌相關(guān)的蛋白質(zhì)、腫瘤標(biāo)志物及腫瘤藥物治療靶標(biāo),對(duì)三陰性乳腺癌的診治具有重要作用。本研究探討CD44v6、MUC1及VEGF在三陰性乳腺癌中的生物學(xué)特征及其對(duì)預(yù)后評(píng)估的意義,可為三陰性乳腺癌臨床診治提供參考依據(jù)。
表1 患者一般資料比較/例
表2 兩組患者CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平比較
表3 三陰性乳腺癌臨床特征與CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)關(guān)系
CD44v6可介導(dǎo)細(xì)胞與基質(zhì)、細(xì)胞與細(xì)胞間粘附,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),加速腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移,CD44v6利用淋巴細(xì)胞歸巢機(jī)制,使細(xì)胞在惡變?cè)缙谥踩肓馨徒Y(jié),逃避免疫系統(tǒng)識(shí)別和殺傷,進(jìn)入淋巴結(jié)加速轉(zhuǎn)移,增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)粘附性,促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn),三陰性乳腺癌患者的CD44v6表達(dá)水平與非三陰性乳腺癌患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其與年齡、腫瘤大小、組織分級(jí)、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移均無(wú)明顯相關(guān)性,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明CD44v6表達(dá)水平不能鑒別三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌患者,對(duì)指導(dǎo)臨床預(yù)后沒(méi)有重要的意義。這與文獻(xiàn)報(bào)道CD44v6在三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺間無(wú)表達(dá)差異一致[14-15]。
MUC1是一種高分子量糖蛋白,主要分布在乳腺、消化道等組織器官的上皮細(xì)胞,腫瘤組織中MUC1表達(dá)量增加,會(huì)使糖鏈表達(dá)異常,影響細(xì)胞表面相互粘附,逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視,有利于癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)[16]。MUC1高表達(dá)可促進(jìn)基底膜蛋白粘附,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移,降低與鈣粘素細(xì)胞粘合作用,使癌細(xì)胞脫落為游離癌細(xì)胞,促使腫瘤轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn),三陰性乳腺癌患者的MUC1表達(dá)水平與非三陰性乳腺癌患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其與年齡、腫瘤大小、組織分級(jí)、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移均無(wú)明顯相關(guān)性,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明MUC1表達(dá)水平不能鑒別三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌患者,對(duì)指導(dǎo)臨床預(yù)后沒(méi)有重要的意義。這與Do等[17]的研究結(jié)論非三陰性乳腺癌患者中MUC1表達(dá)明顯高于三陰性乳腺癌患者不一致。目前MUC1與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性尚無(wú)定論。莊婷[18]指出MUC1表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。MUC1對(duì)于乳腺癌中的作用機(jī)制仍未完全弄清,在癌癥早期MUC1表達(dá)增加,促進(jìn)癌細(xì)胞與正常淋巴細(xì)胞外基質(zhì)分離,或許其在乳腺癌早期中起著重要作用[19]。
VEGF是一種肝素親和外分泌二聚體糖蛋白,以同源二聚體的方式存在,是最有效的血管生成刺激因子。VEGF能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂,在腫瘤新生血管形成、侵襲轉(zhuǎn)移中起著重要作用,導(dǎo)致血管數(shù)量增加,為腫瘤的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供通道[20-21]。本研究發(fā)現(xiàn),三陰性乳腺癌患者的VEGF表達(dá)水平明顯低于非三陰性乳腺癌患者,但其與年齡、腫瘤大小、組織分級(jí)、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移均無(wú)明顯相關(guān)性。這與楊艷芳等[22]的研究結(jié)果一致??赡苁且?yàn)榘┘?xì)胞產(chǎn)生的 VEGF 促進(jìn)淋巴管形成,使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管,回流至淋巴結(jié),使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。但VEGF對(duì)三陰性乳腺癌患者的作用機(jī)制及臨床意義尚需進(jìn)一步研究。
綜上所述,與非三陰性乳腺癌患者相比,三陰性乳腺癌患者血清CD44v6和MUC1表達(dá)水平未見(jiàn)異常,VEGF表達(dá)水平較低,CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平均與腫瘤大小、組織分級(jí)、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移等預(yù)后指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性,不能作為三陰性乳腺癌特異標(biāo)志物,對(duì)指導(dǎo)臨床預(yù)后沒(méi)有重要的意義。對(duì)于三陰性乳腺癌尚需進(jìn)行CD44v6、MUC1及VEGF聯(lián)合檢測(cè)或采用大樣本、不同實(shí)驗(yàn)技術(shù)發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證其特異標(biāo)志物。
[1] 馮新熠,陸蘇,劉曉,等.保乳治療對(duì)年輕三陰性乳腺癌患者預(yù)后的影響[J].中國(guó)腫瘤臨床,2015,42(4):236-240.
[2] 陳海,戚曉東,邱萍.中西醫(yī)結(jié)合對(duì)三陰乳腺癌患者的生存率影響研究[J].安徽醫(yī)藥,2014,18(9):1757-1758.
[3] 陳洪流.三陰性乳腺癌患者的臨床特征及預(yù)后因素[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2013,33(23):5840-5841.
[4] 李春艷,王培,張晟,等.三陰性乳腺癌的臨床病理特征和預(yù)后分析[J].中華腫瘤雜志,2013,35(6):463-467.
[5] 章革,李濤.乳腺癌中CD44S和CD44V6基因蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2013,17(6):1091-1093.
[6] 謝軼群,包家林,徐明,等.MUC1在不同免疫表型乳腺癌組織中的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系[J].腫瘤防治研究,2013,40(8):781-785.
[7] 馬玲娣,董燕芬,劉乾,等.三陰性乳腺癌中COX-2、NF-κB及VEGF表達(dá)的臨床研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(4):436-437,440.
[8] 李軍濤,張恒偉,郭旭輝,等.合并糖尿病的乳腺癌組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)及其與微血管生成的關(guān)系[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2015,95(4):252-255.
[9] 余峰,張霄蓓,張晟,等.三陰性乳腺癌復(fù)發(fā)特征及危險(xiǎn)因素分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2014,94(28):2180-2183.
[10] 王小明,張喜平.Ki-67在乳腺癌病灶中的表達(dá)及其與18F-FDGPET-CT標(biāo)準(zhǔn)化攝取值和腫瘤本底比值的相關(guān)性分析[J].安徽醫(yī)藥,2016,20(5):879-882.
[11] 唐琴,丁克保,施開(kāi)德,等.血清YKL-40、MCP-1水平與乳腺癌患者轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系[J].安徽醫(yī)藥,2015,19(9):1722-1725.
[12] 黃秀英,李鳳玲,唐福興,等.P-選擇素、CD44v6和nm23蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].診斷病理學(xué)雜志,2013,20(1):42-45.
[13] 孟迪,馮曉燕,進(jìn)淑娟,等.CD44v6、MUC1及VEGF在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].腫瘤學(xué)雜志,2014,20(2):91-96.
[14] 朱慧芳,果永寬,史志春.CD44V6和MMP-2在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)婦幼保健,2013,28(23):3833-3834.
[15] 王麗娜,張崇建,李連方等.三陰性乳腺癌表柔比星和環(huán)磷酰胺聯(lián)合紫杉醇周療新輔助化療臨床觀察[J].中華腫瘤防治雜志,2015,22(3):211-215.
[16] 張錄民,楊瑞光,姚健,等.外周血循環(huán)MUC1 mRNA表達(dá)水平與乳腺癌、肺癌的相關(guān)性研究[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊,2014,41(4):17-19.
[17] DO SI,KIM K,KIM DH,et al.Associations between the expression of Mucins (MUC1,MUC2,MUC5AC,and MUC6) and clinicopathologic parameters of human breast ductal carcinomas[J].J Breast Cancer,2013,16(2):152.
[18] 莊婷,薛梅,房愛(ài)菊,等.黏蛋白(MUC1,MUC2,MUC5AC和MUC6)在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及意義[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012,50(5):107-111.
[19] SINN BV,VON MG,DENKERT C,et al.Evaluation of Mucin-1 protein and mRNA expression as prognostic and predictive markers after neoadjuvant chemotherapy for breast cancer[J].Ann Oncol,2013,24(9):2316-2324.
[20] 李青春,姜浩,劉進(jìn)才,等.乳腺癌組織中VEGF的表達(dá)及其與微小鈣化、毛刺征形成的關(guān)系[J].實(shí)用放射學(xué)雜志,2014,30(9):1470-1472.
[21] 黃芳.VEGF和CA153表達(dá)水平與乳腺癌疾病進(jìn)展的關(guān)系[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(2):147-148.
[22] 楊艷芳,劉君,姜戰(zhàn)勝,等.VEGF在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)腫瘤臨床,2012,39(8):439-442.