細(xì)胞黏附分子變異體6、黏蛋白1及血管內(nèi)皮生長因子在三陰性乳腺癌中的生物學(xué)特征及其預(yù)后的意義

羅紅蘭，劉凱，王萍，萬鴻，劉靜

(黃岡市中心醫(yī)院腫瘤科，湖北 黃岡 438000)

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，發(fā)病率與死亡率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重威脅女性患者的身體健康[1-2]。三陰性乳腺癌是指乳腺癌患者中雌激素受體、孕激素受體及內(nèi)皮生長因子受體2表達(dá)均缺失的特殊類型，具有獨(dú)特生物學(xué)特性和高侵襲性，屬乳腺癌中難治性疾病，尋找其特異性生物標(biāo)志物是治療的關(guān)鍵[3-4]。細(xì)胞黏附分子變異體6(cell adhesion molecule variant 6，CD44v6)為黏附分子 CD44主要成員，參與細(xì)胞與間質(zhì)間的黏接，與多種惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)[5]。黏蛋白1(mucin-1，MUC1)在腫瘤患者的血清中表達(dá)異常，與腫瘤細(xì)胞的生長、浸潤轉(zhuǎn)移及機(jī)體的免疫功能有關(guān)[6]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是促脈管生成因子，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖及血管生成[7]。本研究旨在通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測血清CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平，探討CD44v6、MUC1及VEGF在三陰性乳腺癌中的生物學(xué)特征及其對預(yù)后評估的意義。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2014年2月至2016年3月在黃岡市中心醫(yī)院確診的65例三陰性乳腺癌患者和75例非三陰性乳腺癌患者為研究對象，所有患者均經(jīng)病理切片證實(shí)為乳腺癌患者，三陰性乳腺癌患者雌激素受體、孕激素受體及內(nèi)皮生長因子受體2無表達(dá)。所有研究對象均已簽署知情同意書，并表示對研究內(nèi)容理解。本次研究已獲得黃岡市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組患者的年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

1.2試劑與儀器CD44v6試劑盒(南京建成生物科技公司)，MUC1試劑盒(美國 eBioscience公司)，VEGF試劑盒(上海生工有限公司)，促凝管(美國BD 公司)。23R離心機(jī)(上海力康集團(tuán)力新儀器有限公司)，-80 ℃低溫冰箱(美菱公司)，Milli-Q超純水儀(美國Millipore公司)，ST-360酶標(biāo)儀(上?？迫A生物工程股份有限公司)，SW-CJ-2F超凈工作臺(tái)(蘇州安泰超凈工作臺(tái)凈化有限公司)，JY2002電子天平(上海良平儀器儀表有限公司)。

1.3檢測方法早晨空腹抽取患者靜脈血3 mL，3 mL置促凝管，30 min后，4 ℃,3 000 r·min-1離心10 min，分離血清，-80 ℃冰箱保存。使用前于4 ℃溶化，離心取上清，采用ELISA檢測CD44v6、MUC1和VEGF表達(dá)水平，設(shè)3個(gè)復(fù)孔，嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算每份血清中CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1兩組患者CD44v6、MUC1及VEGF比較三陰性乳腺癌患者的CD44v6和MUC1表達(dá)水平與非三陰性乳腺癌患者比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而三陰性乳腺癌患者的VEGF表達(dá)水平明顯低于非三陰性乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

2.2三陰性乳腺癌臨床特征與CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)三陰性乳腺癌患者的CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平與年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

2.3CD44v6、MUC1及VEGF相關(guān)性相關(guān)性分析顯示，CD44v6 與MUC1表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.224，P=0.015)，與VEGF表達(dá)水平無相關(guān)性(r=0.023，P=0.637)，MUC1與VEGF表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.271，P=0.008)。

3 討論

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，約占女性惡性腫瘤的30%，手術(shù)創(chuàng)傷、化放療及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重折磨患者，影響生命質(zhì)量[8]。三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌相比具有侵襲性強(qiáng)、進(jìn)展快、死亡風(fēng)險(xiǎn)高、生存期短、臨床預(yù)后差的特點(diǎn)，是目前乳腺癌研究關(guān)注的焦點(diǎn)。并且三陰性乳腺癌的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，成為臨床乳腺癌治療難點(diǎn)[9-11]。尋找三陰性乳腺癌相關(guān)的蛋白質(zhì)、腫瘤標(biāo)志物及腫瘤藥物治療靶標(biāo)，對三陰性乳腺癌的診治具有重要作用。本研究探討CD44v6、MUC1及VEGF在三陰性乳腺癌中的生物學(xué)特征及其對預(yù)后評估的意義，可為三陰性乳腺癌臨床診治提供參考依據(jù)。

表1 患者一般資料比較/例

表2 兩組患者CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平比較

表3 三陰性乳腺癌臨床特征與CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)關(guān)系

CD44v6可介導(dǎo)細(xì)胞與基質(zhì)、細(xì)胞與細(xì)胞間粘附，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長，加速腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，CD44v6利用淋巴細(xì)胞歸巢機(jī)制，使細(xì)胞在惡變早期植入淋巴結(jié)，逃避免疫系統(tǒng)識(shí)別和殺傷，進(jìn)入淋巴結(jié)加速轉(zhuǎn)移，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)粘附性，促進(jìn)腫瘤浸潤性生長[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，三陰性乳腺癌患者的CD44v6表達(dá)水平與非三陰性乳腺癌患者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其與年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明CD44v6表達(dá)水平不能鑒別三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌患者，對指導(dǎo)臨床預(yù)后沒有重要的意義。這與文獻(xiàn)報(bào)道CD44v6在三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺間無表達(dá)差異一致[14-15]。

MUC1是一種高分子量糖蛋白，主要分布在乳腺、消化道等組織器官的上皮細(xì)胞，腫瘤組織中MUC1表達(dá)量增加，會(huì)使糖鏈表達(dá)異常，影響細(xì)胞表面相互粘附，逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，有利于癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移生長[16]。MUC1高表達(dá)可促進(jìn)基底膜蛋白粘附，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，降低與鈣粘素細(xì)胞粘合作用，使癌細(xì)胞脫落為游離癌細(xì)胞，促使腫瘤轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn)，三陰性乳腺癌患者的MUC1表達(dá)水平與非三陰性乳腺癌患者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其與年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明MUC1表達(dá)水平不能鑒別三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌患者，對指導(dǎo)臨床預(yù)后沒有重要的意義。這與Do等[17]的研究結(jié)論非三陰性乳腺癌患者中MUC1表達(dá)明顯高于三陰性乳腺癌患者不一致。目前MUC1與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性尚無定論。莊婷[18]指出MUC1表達(dá)與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。MUC1對于乳腺癌中的作用機(jī)制仍未完全弄清，在癌癥早期MUC1表達(dá)增加，促進(jìn)癌細(xì)胞與正常淋巴細(xì)胞外基質(zhì)分離，或許其在乳腺癌早期中起著重要作用[19]。

VEGF是一種肝素親和外分泌二聚體糖蛋白，以同源二聚體的方式存在，是最有效的血管生成刺激因子。VEGF能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂，在腫瘤新生血管形成、侵襲轉(zhuǎn)移中起著重要作用，導(dǎo)致血管數(shù)量增加，為腫瘤的生長提供營養(yǎng)和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供通道[20-21]。本研究發(fā)現(xiàn)，三陰性乳腺癌患者的VEGF表達(dá)水平明顯低于非三陰性乳腺癌患者，但其與年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性。這與楊艷芳等[22]的研究結(jié)果一致。可能是因?yàn)榘┘?xì)胞產(chǎn)生的 VEGF 促進(jìn)淋巴管形成，使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管，回流至淋巴結(jié)，使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。但VEGF對三陰性乳腺癌患者的作用機(jī)制及臨床意義尚需進(jìn)一步研究。

綜上所述，與非三陰性乳腺癌患者相比，三陰性乳腺癌患者血清CD44v6和MUC1表達(dá)水平未見異常，VEGF表達(dá)水平較低，CD44v6、MUC1及VEGF表達(dá)水平均與腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉(zhuǎn)移等預(yù)后指標(biāo)無明顯相關(guān)性，不能作為三陰性乳腺癌特異標(biāo)志物，對指導(dǎo)臨床預(yù)后沒有重要的意義。對于三陰性乳腺癌尚需進(jìn)行CD44v6、MUC1及VEGF聯(lián)合檢測或采用大樣本、不同實(shí)驗(yàn)技術(shù)發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證其特異標(biāo)志物。

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